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31.
目的:甲型H1N1流感爆发,使血凝素(haemagglutinin,HA)含量测定成为疫苗研发的关键制约环节。本研究采用替代方法来检测疫苗原液中HA含量,以解决这一制约瓶颈。方法:采用经验证的改良SDS-PAGE方法,测定HA在总蛋白中比例,结合总蛋白含量,计算出疫苗原液中HA含量,用以配制疫苗。以WHO提供的国际参考品对成品疫苗进行复测。结果:各企业采用该方法,检测疫苗原液,各原液中总蛋白在267~770μg·mL-1间,HA比例在23.1%~62.8%间,HA含量在104~303μg·mL-1间。各企业根据HA含量配制成品疫苗用于临床试验,复测结果证明临床剂量准确。结论:在甲型H1N1流感疫苗研发中,可采用HA含量测定替代方法。 相似文献
32.
应用吖啶橙染料法测定重组人白介素—2制品中十二烷基硫酸钠含量 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 :建立一种简便、快速、准确的测定重组人白介素 - 2制品中十二烷基硫酸钠 (SDS)含量的方法。方法 :用过量的吖啶橙溶液与一系列倍比稀释的不同浓度的SDS结合 ,产生有色的SDS -吖啶橙复合物 ,应用SpectraMax 2 5 0多功能酶标仪进行比色测定 ,并用Softmax分析软件分析结果。结果 :优化后的吖啶橙染料法测定重组人白介素 - 2制品中的SDS含量 ,最小检测限达到 0 0 2 μg·μL-1。经过 10次测定 ,均值为 (0 5 3± 0 0 0 6 3) μg·μL-1(n =10 ) ,RSD值为 11 9% ;当SDS的含量在 0 0 2~ 0 6 4μg·μL-1以内时 ,二次方程 (y =- 3 96× 10 -5x2 0 0 2 7x 0 0 18)线性良好 (r >0 99) ;精密度试验的RSD值均小于 8% ;当SDS浓度在 0 0 2~ 0 32 μg·μL-1测定范围内时 ,SDS在样品中的平均回收率为10 4 4% (n =10 )。结论 :该法重复性好 ,灵敏度高 ,省时简便 ,可作为重组人白介素 - 2制品中SDS含量测定的一种常规方法 相似文献
33.
由中国药品生物制品检定所副所长王军志研究员率领研究群体完成的“我国生物技术药物的质控标准、标准品的研究和制订”,荣获2004年国家科技进步奖二等奖。自1982年世界上第一个基因工程产品“重组人胰岛素”投放市场以来,生物技术药物仅有20余年的历史,却有着突飞猛进的发展。重组人干扰素、重组葡激酶、重组乙肝疫苗……这些源于生命科学研究的前沿成果,而且大多是针对人类重大疾病的生物技术药物,越来越多地进入医疗治疗和预防领域。但是,怎样才能控制这类药物的质量,保障人们的用药安全呢?这就需要为之建立科学规范的“中国标准”。在长… 相似文献
34.
白细胞介素-11(IL-11)为血小板生长因子,可直接刺激造血干细胞和巨核细胞母细胞的增殖.并诱导巨核细胞的成熟、从而增加血小板的生成.1997年11月由美国Genetic Instirute研制的rhIL-11通过FDA审评.在国内一度成为新的开发热点.在对成都地奥九泓制药厂生产的大肠杆菌表达的重组人白细胞介素-11(rhIL-11)的检定过程中,参照《重组DNA质量控制要点》,研究国内外标淮,结合制品特点,建立了rhIL-11质量标准,对我国第一家送检的样品进行了质量检定.rhIL-11的为179个氨基酸,比天然成熟的人IL-11在N端多一个氨基酸,分子量为19kD,等电点为11.7.虽然厂家基本能按《重组DNA质量控制要点》的要求制定质量标准,但由于缺少有效的HPLC分析方法,肽图分析往往不够准确;活性测定缺少国际标准品,比活性无法确定.针对这些问题我们进行了以下4个方面的研究. 相似文献
35.
重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白质控方法和标准的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的建立重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白质控方法和质量标准。方法用中和TNF-α生物学活性的方法测定重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白效价,用胰蛋白酶酶切分析肽图,用ELISA方法分别测定蛋白A、残留宿主细胞蛋白残留量和重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白含量。结果建立了重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的生物学活性、肽图分析、残留蛋白A等质控方法和质量标准。结论建立的方法和质量标准已用于重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白产品的检定。 相似文献
36.
37.
38.
重组人GM-CSF的理化特性及其肽图的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
rhGM-CSF在经过盐酸胍处理,DTT还原,碘乙酰胺封闭二硫键等各种状态下,分别分析其理化特性,发现经过DTT处理后其在紫外特征光谱和RP-HPLC行为上表现出不均一性,而在SDS-PAGE电泳行为和免疫学特性方面却没有明显差异,盐酸胍对其上述指标的影响是可逆的;经过打开二硫键,封闭巯基后的肽图分析比未经处理的样品溴化氰裂解更完全,蛋白酶消化更彻底。 相似文献
39.
目的:建立长效人红细胞生长刺激蛋白质量控制方法和质量标准。方法:用UT-7细胞依赖株和ELISA测活法测定生物学和免疫学活性,使用高效液相色谱系统分析N-糖链结构、测定纯度,及胰蛋白酶酶切的肽图分析.等电聚焦电泳分析异构体,使用比色法检测唾液酸含量。其余检测项目按2005年版中国药典三部方法进行。结果:建立的方法经过比较和对长效人红细胞生长刺激蛋白的检测,结果稳定可靠,重复性好,各指标符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和2005年版中国药典三部的要求。结论:本研究建立了一套完善的长效人红细胞生长刺激蛋白质量控制体系。 相似文献
40.
气相色谱法测定质粒DNA中乙醇和异丙醇残留量 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:建立测定质粒 DNA 中乙醇和异丙醇残留量的方法。方法:顶空进样气相色谱法。色谱条件:DB-624石英毛细管柱(30 m×0.53 mm×3μm),柱温:60℃,气化室温度:120℃,FID 检测器,温度为300℃;进样分流比:1:50,载气 N_2(3.0mL·min~(-1))。结果:乙醇、异丙醇线性关系良好(相关系数均大于0.9999);最低检测浓度分别为0.00125 mg·mL~(-1)和0.00083 mg·mL~(-1);平均回收率分别为100.1%和100.9%;平均 RSD 分别为3.0%和1.5%。结论:该法简单快速,可用于质粒 DNA 中乙醇和异丙醇残留量的测定。 相似文献