重组腺病毒人内皮抑素的质量标准研究

目的: 建立重组腺病毒人内皮抑素的质量标准和检测方法. 方法: PCR法鉴定腺病毒载体的E2B区和插入基因,琼脂糖凝胶电泳检查重组病毒DNA酶切图谱.分光光度法测定病毒颗粒数,TCID50法测定病毒感染滴度.感染人肝癌细胞HepG2测定插入基因的表达量,感染人血管内皮细胞HM2测定表达产物的生物学活性.病毒的纯度分析采用A260/A280比值和HPLC法进行.采用A549细胞进行复制型腺病毒的检测.结果: 腺病毒载体E2B区和插入基因PCR扩增结果与理论相符,重组病毒DNA的酶切图谱与标准品一致.原液病毒颗粒数为2.4×1012 VP/ml,滴度为1.53×1011 IU/ml,比滴度为6.4% IU/VP;成品病毒颗粒数为1.0×1012 VP/ml,滴度为3.75×1010 IU/ml,比滴度为病3.8% IU/VP.以50 MOI重组腺病毒感染HepG2细胞48 h后培养上清人内皮抑素表达量为332 ng/ml.50 MOI重组腺病毒对血管内皮细胞生长的抑制率为55%.A260/A280为1.29,HPLC纯度为99.7%.复制型腺病毒为≤1RCA/3×1010 VP.其他各项检测指标均符合规定.结论: 建立了重组腺病毒人内皮抑素的质量标准及其检测方法,并用于该产品的质量控制.     

重组抗肿瘤抗病毒蛋白乐复能质控方法与质量标准的建立

目的:建立重组抗肿瘤抗病毒蛋白乐复能(novaferon）的质控方法和质量标准。方法：以WST1染色法检测Daudi细胞增殖,测定乐复能的抗肿瘤细胞增殖活性;以WISH细胞病变抑制法测定乐复能抗病毒活性;乐复能以胰蛋白酶酶切后,用HPLC分析肽图;其余检测项目按《中华人民共和国药典》(三部)2005年版的规定进行。结果：3批乐复能原液和成品的抗肿瘤比活性均≥2.0×106 U/mg、抗病毒比活性均≥1.0×109 IU/mg。3批乐复原液的HPLC肽图与参考品一致,乐复原液的蛋白含量、纯度、分子质量、等电点、末端氨基酸序列等指标及成品的细菌内毒素、苯甲酸含量、乙腈残留量等指标均符合规定。根据检定结果建立了乐复能的质量标准。结论：建立的质控方法和质量标准可以保证乐复能的安全、有效和质量可控,可用于乐复能的常规检定。     

注射用鼠神经生长因子研制

神经生长因子(NGF)是一类能促进神经生长的多肽类生物活性特质。国内外许多研究证实NGF具有维持交感神经和感觉神经的生存、影响中枢神经元生长、促进神经细胞的分化、判定轴突生长等方面的生物学功能。我们把鼠神经生长因子作为一种非常有希望的临床药物进行开发,作为国家一类新药进行申报,其完成研究资料40余项,分为生产工艺和检定方法、稳定性试验、临床前药理、临床研究等四个方面。     

肠道病毒71型北京分离株全基因组序列分析

目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均最高,分别为95.6%～96.7%、88.3%～96.1%、78.1%～94.0%、90.8%～94.6%、85.9%～94.1%和90.9%～93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92～107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型.     

RNA干扰研究进展

一种能特异性抑制血管内皮细胞生长的抑制因子－内皮抑素（endostatin)，可以抑制内皮细胞的增殖和迁移，在体内具有良好的抗肿瘤效果。内皮抑素的抗肿瘤效果可能与诱导凋亡，以及与原肌球蛋白，黏附受体整合蛋白以及基质金属蛋白酶等重要因子有关。     

重组嵌合抗CD20单抗PUM100单次给药药代动力学研究

目的:研究国产重组嵌合抗CD20单抗PUM100经静脉单次给药后在食蟹猴体内的药代动力学,与相同条件下利妥昔单抗的药代动力学参数进行比较,评价二者的生物等效性关系。方法:12只食蟹猴按体重均衡法分为4组,分别单次给予不同剂量(10,30 mg.kg-1)的PUM100和利妥昔单抗,在不同时间点采血分离血清,用ELISA法测定血清中药物浓度;根据非房室统计矩模型用WinNolin药代软件对测定结果进行曲线拟合并计算药代动力学参数。结果:食蟹猴经静脉推注单次给予不同剂量(10,30 mg.kg-1)的PUM100后,半衰期(t1/2)分别为(111.3±10.8)和(154.0±39.1)h,全身清除率(CL)与表观分布容积(Vss)较接近,C0及AUC0-inf与给药剂量正相关,且两个剂量对应时间点的血药浓度存在显著性差异;PUM100与等剂量利妥昔单抗的主要药代动力学参数无显著性差异。结论:PUM100与等剂量利妥昔单抗的血清药物浓度-时间曲线特征相同,说明PUM100在试验剂量范围内与利妥昔单抗具有生物等效性。     

长效人红细胞生长刺激蛋白质量控制标准研究

目的：建立长效人红细胞生长刺激蛋白质量控制方法和质量标准。方法：用UT-7细胞依赖株和ELISA测活法测定生物学和免疫学活性，使用高效液相色谱系统分析N-糖链结构、测定纯度，及胰蛋白酶酶切的肽图分析．等电聚焦电泳分析异构体，使用比色法检测唾液酸含量。其余检测项目按2005年版中国药典三部方法进行。结果：建立的方法经过比较和对长效人红细胞生长刺激蛋白的检测，结果稳定可靠，重复性好，各指标符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和2005年版中国药典三部的要求。结论：本研究建立了一套完善的长效人红细胞生长刺激蛋白质量控制体系。     

红芪多糖和黄芪多糖的免疫调节作用

红芪多糖(RHPS)和黄芪多糖(APS)对正常小鼠和免疫抑制小鼠的免疫功能有影响.实验表明RHPS和APS均能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,并能完全纠正PDS的抑制作用;能促进体内淋巴细胞转化,并能使ANAE阳性淋巴细胞显著增多,对CY或PDS所致的细胞免疫功能低下有显著的纠正作用。家兔外周血淋巴细胞体外培养结果表明,RHPS或APS 1～100mg/L对PHA 50mg/L刺激淋巴细胞增生的作用无显著影响。RHPS对正常小鼠血浆cAMP水平无明显影响,但与PDS合用时可使血浆cAMP水平显著高出对照组和单用PDS组。