携人IL-12基因腺病毒的构建及其对Hep3B细胞增殖及TGF-β表达的影响

目的:构建携带人IL-12的重组腺病毒,观察其对Hep3B增殖及TGF-β表达的影响。方法:PCR扩增IL-12基因,构建穿梭质粒pAdTrack-IL-12;穿梭质粒经Pme I线性化后转化AdEasier Cell,E.coli BJ5183内同源重组;PacⅠ酶切重组腺病毒质粒,转染AD293,包装病毒;病毒pAd-IL-12感染肝癌细胞Hep3B,以RT-PCR、Western blot检测白介素12的表达;MTT法检测肝癌细胞的增殖情况;RT-PCR检测转化生长因子-β(TGF-β)的表达。结果:成功构建携IL-12基因的重组质粒,并成功包装可高效感染Hep3B的腺病毒pAd-IL-12;RT-PCR以及Western blot结果表明,病毒pAd-IL-12感染Hep3B后可高表达白介素12,并且与对照组相比Hep3B增殖能力显著降低(P<0.05),TGF-β表达量也降低(P<0.05)。结论:可高表达IL-12的腺病毒包装成功,感染肝癌细胞Hep3B后抑制其增殖,同时也下调TGF-β的表达,为进一步研究IL-12的肿瘤治疗作用奠定了基础。     

一4q部分三体10q部分单体患儿的分子细胞遗传分析

目的 确定一生长迟缓、智力低下患儿的核型,分析其染色体变异与表型的相关性,同时探讨微阵列比较基因组杂交(array-based comparative genomic hybridization,array-CGH)在临床分子细胞遗传诊断中的应用及其优越性.方法 应用G显带染色体分析、array-CGH、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)和实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)对患儿及其亲属进行核型分析.结果 G显带染色体分析显示患儿存在1条来源于父亲的10号衍生染色体der(10)t(4;10)(q25;q26),其父亲和祖母均是t(4;10)(q25;q26)平衡易位携带者.Array-CGH显示患儿存在4q26-q35.2三体,并将断裂点定位于4q26,此外,还发现患儿10号染色体存在一约0.54 Mb的微缺失del(10)(q26.3).FISH和RQ-PCR证实父亲和祖母也存在del(10)(q26.3).结论 del(10)(q26.3)并不导致表型异常,患儿的异常表型可归因于4q26-q35.2三体.与传统的细胞遗传分析方法 相比,array-CGH具有高分辨率和高准确性等优点.     

唐氏综合征胎儿21号染色体上新微小RNA基因的鉴定和功能分析

目的：利用Solexa高通量深度测序技术鉴定21号染色体上新的微小RNA(miRNA)基因,为阐明21号染色体功能、探索唐氏综合征(DS)患者新的治疗靶点提供依据。方法：收集5例经染色体核型分析诊断为DS胎儿的脐带血和3例正常胎儿脐带血,分析染色体核型;提取胎儿脐带血单个核细胞总RNA,构建小RNA文库,采用Solexa高通量深度测序、计算机分析、Stem-loop RT-PCR法鉴定 miRNA基因并分析其生物学功能。结果:血染色体核型分析,5例DS胎儿脐带血显示DS标准核型,3例正常胎儿脐带血显示正常核型;在DS胎儿脐带血中共发现21个新miRNA,其中仅1个候选miRNA来源于21号染色体,位于21号染色体的“DS关键区域”,命名为“miR-nov21”,后者在DS胎儿脐带血单个核细胞中表达水平高于正常胎儿。生物学功能分析,miR-nov21可调节211个靶基因共215个位点,与基因的表达、细胞分化的调节、胚胎形态的发生和心脏的发育有关。结论: 21号染色体“DS关键区域”存在1个新的miRNA基因--miR-nov21。     

cDNA芯片检测STAT5诱骗核苷酸对K562细胞凋亡相关基因的影响

目的：转录因子STAT5在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)中组成性激活,并与CML细胞恶性表型密切相关,本研究用cDNA芯片检测方法探讨诱骗核苷酸(decoy ODNs)抑制STAT5对白血病K562细胞株凋亡相关基因的影响。方法：分别提取decoy ODNs处理前后的K562细胞总RNA,逆转录合成Cy3、Cy5标记的cDNA探针,与人14K基因表达谱cDNA芯片(V2.0)杂交,扫描获得数据后,用Genespring软件分析对照组和实验组的差异表达基因,半定量RT- PCR验证cDNA芯片结果。结果：2张cDNA芯片检测重复性良好(R=0.9799)。在13824个标记的基因中,检出413个上调基因,其中包括：TIAF1、GAB1、GYPA、DAPK3、TNFRSF1B、IRF1和PML等在内的18个凋亡相关基因；在检出的332个下调基因中,发现PIM1、CCND2、CCND1、MYC和BCL2L1等在内的11个凋亡相关基因；部分基因经半定量RT-PCR证实与cDNA芯片结果一致。结论：Decoy ODNs抑制STAT5信号通路后可引起K562细胞多种凋亡相关基因的变化,本实验为进一步研究STAT5信号通路所调控的凋亡相关基因提供了依据。     

苦参碱对内毒素致炎大鼠PLA2活性影响及其抗炎机制研究

目的研究苦参碱抗炎机制和其抑制磷脂酶A2(PLA2)活性的作用.方法用[3H]花生四烯酸掺入大肠杆菌膜为底物检测细胞内外PLA2方法,测定了苦参碱对内毒素(LPS)造成的大鼠急性内毒素炎症时血清中分泌型磷脂酶A2(sPLA2)活性和外周血白细胞中胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)活性的影响,同时用Fura2-AM作荧光指示剂检测胞内游离Ca2+浓度的变化,并通过大鼠足跖肿胀实验证实苦参碱的抗炎作用.结果在LPS介导的急性内毒素血症大鼠,30 mg/miL的苦参碱0.2 mLip 1 h对外周血sPLA2抑制效果最好,抑制率达(81.9±1.8)%,此时胞内cPLA2活性抑制率是(28.4±6.0)%,而Ca2+浓度是(157.10±20.56)nmol/L,比对照升高1 5.3%.足跖肿胀实验亦证明苦参碱对炎症有显著抑制作用.结论苦参碱是一种具有抗炎作用的新型PLA2抑制剂.     

吡哇酮映体及吡哇酮三种衍生物的抗血吸虫作用

左旋吡喹酮250mg/kg和417mg/kg灌胃一次治疗人工感染血吸虫小鼠、减虫率分别为50.0%和71.9%.右旋吡喹酮用上述两种同样剂量灌胃一次治疗感染小鼠,减虫率分别为-5.9%和4.3%,几无抗虫作用.吡喹酮衍生物S-01、S-02和S-04分别用235.5mg/kg,qd×3d;233.0mg/kg,qd×3d和213.8mg/kg,qd×3d(均为0.64mmol/kg/d×3d)治疗感染小鼠,减虫率分别为10%、6%和12%,该三种衍生物抗虫作用均较吡喹酮差.     

染矽尘大鼠表面活性蛋白D和克拉拉细胞蛋白表达的变化

目的 探讨染矽尘大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)表面活性蛋白-D(SP-D)和克拉拉细胞蛋白(CC16)表达的动态变化.方法 将80只大鼠随机分为对照组、染矽尘组(每组40只),采用气管暴露注入矽尘悬液法建立矽肺动物模型.染尘后在7、14、21、28和60 d时每组分别处死8只大鼠,取肺组织和BALF.免疫组化法检测不同时间点的肺组织SP-D和CC16在肺组织中的表达,并作定量分析;以Western Blot法检测BALF中SP-D和CC16含量,并作定量分析.结果 对照组大鼠肺泡Ⅱ型细胞和Clara细胞胞浆内有少量sP-D表达.染矽尘组染矽尘7d后肺组织SP-D表达明显升高,与对照组的差异有统计学意义(P＜0.01);14 d时达到高峰期,此后开始下降.在对照组细支气管周边的Clara细胞胞浆内CC16高表达,部分细胞核内也可见CC16表达.染矽尘大鼠7d后CC16表达明显减少,与对照组的差异有统计学意义(P＜0.01).随着染矽尘时间的延长,CC16表达逐渐减少,并且呈负相关性(t=-0.967,P＜0.01) 7、28 d染矽尘组BALF中SP-D含量均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);且28 d BALF中SP-D含量明显高于7 d染矽尘组,差异有统计学意义(P＜0.01).7、28 d染矽尘组BALF中CC16蛋白含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);且28 d明显低于7 d染矽尘组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 染矽尘能够导致大鼬市组织和BALF SP-D和CC16蛋白表达改变且与染矽尘时间有一定关系.     

肿瘤患者CD62p和CD63测定及其临床意义

 【摘要】　目的　比较不同疾病状态下活化血小板测定值的差别及使用阿司匹林防治血栓的效果。方法　采用流式细胞仪测定126例肿瘤患者和60例非肿瘤患者外周血活化血小板CD62p和CD63的表达以及服用阿司匹林后的变化。结果　肿瘤患者外周血的活化血小板CD62p和CD63的表达量明显高于非肿瘤患者（P＜0.05），有血栓形成的肿瘤患者外周血的活化血小板CD62p和CD63的表达量明显高于无血栓形成的肿瘤患者（P＜0.05），有血栓的肿瘤患者的活化血小板经过阿司匹林干预治疗后明显下降（P＜0.05）。结论　测定活化血小板可以预测肿瘤患者存在高凝状态风险性的大小。同时，服用小剂量肠溶阿司匹林可以降低外周血活化血小板CD62p和CD63。     

96位中国汉族志愿者的美托洛尔α-羟化能力(英文)

目的:体内及试管内研究汉族人美托洛尔 (Met)α-羟化能力.方法:反相离子对高效液相色谱法测定Met和α-羟基美托洛尔(HM).结果:96名汉族人尿Met和HM比值(MR)的对数示单基因遗传特征性双态频率分布,仅发现1例弱代谢者(MR=199.3),95例强代谢者MR为3.1±2.5.性别、吸烟、饮茶对尿Met,HM及MR均无影响.试管内研究发现NADH对人肝微粒体Met α-羟化酶活性无影响,该酶K_m为89.6 μmol L~(-1),V_(max)为39.5 ngmg~(-1)min~(-1).在8例汉族人肝微粒体中未发现该酶缺陷者,测得其活性为31.4±22.1 ngmg~(-1) min~(-1).结论:中国汉族人Met α-羟化弱代谢者发生率低,NADH未参与人肝微粒体Met α-羟化反应.     

哌唑嗪对急性内毒素性肝损害的保护作用及机制

研究ｏｆ一肾上腺素受体（０１－＊以桔抗剂赈哇嗓对内毒素诱导的急性肝损害的保护作用,并探讨其抗损害作用机制。１．材料与方法：（１）动物处置：雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠,随机分为４组,腹腔注射磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）作为对照组（ＰＢＳ组）;腹腔注射脂多糖（ＬＰＳ）２ｍｇ／ｋｇ作为损伤对照组;先用５ｍｇ／ｋ抓哩味（ＰＲＡ）灌胃,ｌ小时后腹腔注射ＬＰＳＺｉｎｇ／ｋｇｇ于１２／Ｊ’时后补灌ＰＲｘ一次作为保护组;用ｓｍｍ／ｘｍＰＲＡ灌胃作ＰＲＡ对照组。（２）肝细胞分离及［ＣａＺ”ｈ测定：以上各组处理６／Ｊ’时后,按…