GM-CSF协同抗肿瘤作用研究进展

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 ( granulocytemacrophage colony stimulating factor,GM- CSF)主要由 T细胞和巨噬细胞产生 ,是一种具有多种生物活性的细胞因子 ,可以促进 DC等 APC分化、成熟和活化及上调 CD86的表达以激发对肿瘤的免疫应答 [1] ;在体外具有促进髓样祖细胞增殖 ,增强中性粒细胞、单核巨噬细胞、嗜酸性粒细胞对肿瘤细胞的吞噬作用和 ADCC效应等活性 ;促进 Th、Tc、NK在肿瘤部位浸润 ,从而杀伤肿瘤 [2 ]。本文就其协同抗肿瘤作用研究进展作一综述。1　GM- CSF作为肿瘤疫苗的组成部分肿瘤疫苗的抗肿瘤作用是利用肿瘤…     

卵巢癌干细胞对5种化疗药物的耐药性及其机制

目的探讨卵巢癌干细胞（Ovarian Cancer Stem cells,OCSCs）针对化疗药物耐药的作用机制。方法通过免疫磁选方法分离和纯化OCSCs,对比普通卵巢癌细胞（EOC）,观察在紫杉醇、卡铂、顺铂、5-FU、阿霉素5种化疗药物作用下OCSCs耐药的情况。通过定量PCR,分析EOC与OCSCs中ABCG2、ABCB1、Nanog、MMP-2和MMP-9基因的表达水平。结果从HO8910细胞分离的CD44＋CD117＋细胞,对卡铂、顺铂、紫杉醇、阿霉素和5-FU等化疗药物的耐药性明显强于HO8910细胞（P〈0.05）。定量PCR检测发现CD44＋CD117＋细胞中ABCG2、ABCB1、Nanog、MMP-2和MMP-9基因的表达显著高于HO8910细胞（P〈0.05）。结论与EOC相比,OCSCs对多种化疗药物的耐药性更为明显的机制可能与其较高水平表达ABCG2,ABCB1,Nanog,MMP-2和MMP-9基因有关。     

纳米技术在医学中的应用

纳米技术 (ｎａｎｏｓｃａｌｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ)是一门在 0 1～ 10 0ｎｍ量度范围内利用物质———包括原子、分子的特性 ,研究其相互作用 ,并对材料进行加工 ,制造成具有特异功能的产品 ,掌握其原子和分子的运动规律的综合交叉技术体系。现将纳米技术在医学中的应用作如下综述。1　纳米技术在医学材料中的应用纳米材料技术包括纳米相材料技术和纳米复合改性技术。其特点是因为纳米颗粒的性质发生了变化 ,从而使其在力、磁、热、光、电等性能也发生了变化。纳米材料是指由纳米级的结构单元构成的任何类型的材料 ,例如金属、陶瓷、聚合…     

细胞因子GM-CSF和结核杆菌Ag85A融合表达载体的构建与鉴定

目的：构建并鉴定细胞因子GM—CSF和结核杆菌Ag85A融合表达质粒，为研究新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。方法：用PCR方法从pc-mGM—CSF质粒中扩增出GM—CSF，构建于pcDNA3．1质粒上，成为pcDNA3．1-GM-CSF。从结核杆菌H37Rv基因组中扩增出结核杆菌Ag85A基因序列并插入到质粒pcDNA3．1-GM-CSF上，将基因GM-CST的3’端与基因Ag85A的5’端直接连接构建融合表达质粒pcGM85A。结果：经酶切鉴定和DNA测序证实重组质粒构建正确。结论：细胞因子GM-CSF和结核杆菌Ag85A融合表达载体构建成功，为研制新型结核病基因疫苗奠定了基础。     

肿瘤抗原P1A与细胞因子mGM-CSF共表达载体的构建和表达

目的：构建并鉴定细胞因子mGM-CSF和肿瘤特异抗原PIA共表达载体，为研究新型的肿瘤疫苗提供新的策略。方法：以PCR方法从pCI-neo／PIA中扩增出PIA编码基因片段，构建于pRSC质粒上；再从pORF-mGM-CSF中扩增出mGM-CSF基因片段．插入pRS-PIA重组质粒PIA基因的上游。以酶切和DNA测序进行鉴定。并将鉴定过的重组质粒以脂质体法转染7721细胞．用RT-PCR法鉴定转染细胞中PIA基因和mGM-CSF基因的表达。结果：经酶切鉴定和DNA测序证实mGM-CS17和PIA重组质粒构建正确，并在转染此质粒的7721细胞中检测出了PIA和mGM-CSF基因的表达。结论：成功构建mGM-CSF和PIA的共表达载体，为研制新型肿瘤疫苗奠定了基础。     

TIM家族成员对Th细胞分化的调节作用

TIM(T-cell immunoglobulin mucin,TIM)是新近发现的一个基因家族,其中TIM-3、TIM-1分别选择性的表达于Th1与Th2细胞,TIM家族在Th细胞分化过程中扮演了重要的角色,其在免疫调节中的作用初见端倪。     

人、黑猩猩和叶猴FKN全基因的克隆及体外表达的比较研究

目的克隆人、黑猩猩和叶猴FKN全基因及体外表达,比较研究FKN在进化过程中基因组水平和蛋白表达水平的差异。方法应用基因重叠延伸拼接PCR法（Gene splicing by overlapping extension PCR,SOE-PCR）将FKN的3个外显子编码序列依次进行前后拼接,然后插入pcDNA3.1/myc-His（-）A真核表达载体中,经酶切、测序鉴定后转染CHO细胞体外表达,RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot检测其表达产物。结果酶切、测序鉴定证实插入的基因片段为完整的FKN,RT-PCR可从转染的CHO细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段,其表达蛋白能分泌至胞外,SDS-PAGE显示其分子量约为95000,抗c-myc抗体可与载体上的c-myc蛋白特异性结合。测序显示人、黑猩猩和叶猴相比,FKN基因除了有散在的点突变外,还发现有一明显的30bp的缺失,但此缺失对FKN蛋白的表达并不影响。结论成功克隆人、黑猩猩和叶猴FKN全基因,基因组水平和蛋白表达水平的比较研究为后续探讨FKN在高级灵长类物种进化过程中免疫学功能的演变奠定基础。     

小鼠白细胞介素21 cDNA的克隆及真核表达质粒的构建

目的：克隆小鼠自细胞介素2l(IL-21)基因，构建真核表达质粒，用以进行肿瘤的基因治疗。方法：用RT-PCR法。从ConA活化的小鼠T细胞中扩增IL-21 cDNA。克隆人哺乳动物细胞高效表达质粒pcDNA3．1中，构建重组mIL-21真核表达质粒。重组体用载体上的通用引物和PCR下游引物为测序引物，鉴定克隆的正确性。将已鉴定的重组质粒用脂质体法转染Sp2／0细胞，用RT-PCR法鉴定转染细胞中IL-21基因的表达，用MTT比色法检测表达的mIL-21诱导的NK细胞杀伤活性的增强。结果：正确构建了重组真核表达质粒pcDNA3．1／mIL-21，并在转染的细胞中检测出IL-2l的表达，表达的mIL-21可在体外增强NK细胞的杀伤活性：结论：成功地构建了重组真核表达质粒pcDNA3．1／mIL-21，为进一步在肿瘤动物模型中进行IL-21基因治疗及疗效观察奠定了基础.