脂多糖刺激后腹腔巨噬细胞表面Toll样受体表达的变化

目的探讨LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR2、TLR4表达的动态变化.方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞,调整细胞数为2×106/孔,分为6组,每组设3个复孔,加入LP S使其终浓度为1μg/ml,在终浓度为1μg/ml LPS刺激下,5%CO2,37℃孵育0、1.5、3、6、16、24h.用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的大鼠抗小鼠TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的大鼠抗小鼠TLR4抗体对小鼠腹腔巨噬细胞进行免疫荧光染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞数及其平均荧光强度(MFI).结果1.随着LPS刺激时间的延长,TLR2阳性率逐步上升,6h达到高峰后出现缓慢下降趋势,各刺激组阳性率与对照组组相比,P＜0.01.TLR2 MFI则随着LPS刺激时间的延长而缓慢下降,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.2.随着LPS刺激时间的延长,TLR4阳性率逐步上升,刺激达24h时,阳性率为14.02%+1.23%,与对照组(8.98%±1.06%)相比,P＜0.01.TLR4 MFI也随着刺激时间的延长而上升,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.结论LPS能够引起巨噬细胞TLR2/4表达和分布发生变化,说明TLR2与TLR4均参与针对LPS的反应.     

吸入伤犬部分液体通气后血一氧化氮、超氧化物歧化酶及丙二醛的含量变化

目的：观察吸入性损伤及部分液体通气后血清一氧化氮（NO）,超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的变化情况,探讨部分液体通气对吸入性损伤的治疗作用。方法：制作8条犬吸入性损伤模型,将氟碳（FC－77）缓慢注入肺内,实施部分液体通气,然后分别于致伤前,致伤后2h及部分液体通气治疗90min后抽血测NO,SOD及MDA。结果：致伤后NO,MDA值明显升高而SOD值却明显下降,与致伤前相比,有显性差异（P＜0．05）;随着部分液体通气的进行,NO,SOD基本回复到致伤前的水平,与致伤前相比,差异不大（P＞0．05）;而MDA回复则较慢,虽比致伤后显下降（P＜0．05）,但仍高于致伤前水平（P＜0．05）。结论：部分液体通气可以通过抗脂质过氧化作用和减少体内一氧化氮同组织损伤,因而对吸入性损伤有一定的治疗作用。     

多囊肾患者家系血清miRNA-15a和miRNA-17表达水平的比较

目的观察比较miRNA-15a和miRNA-17在多囊肾患者家系中的表达水平,探讨miRNA与多囊肾病发生发展的可能关系。方法采用实时定量PCR技术检测多囊肾患者及其家系成员与正常人血清中miRNA-15a和miRNA-17的表达水平。结果所检测的多囊肾患者家系中已出现肾功能损害的多囊肾患者血清miRNA-15a的表达水平明显高于正常人及肾功能正常的多囊肾患者;而miRNA-17在多囊肾患者家系未表达。结论多囊肾患者血清miRNA-15a表达水平与正常人不同,提示miRNA在多囊肾的发生发展过程中可能起重要调控作用,值得深入研究。     

初级纤毛在骨组织力学信号传导中的作用

骨组织不断接受力学刺激并保持骨形成和骨吸收的动态平衡。目前,人们仍不清楚骨组织如何感知力学刺激。越来越多的研究表明初级纤毛可能是骨组织力学刺激感受器,并将细胞外的力学刺激信号转化为细胞内的生化信息,最终骨组织实现其结构的重塑。在此,本文将对初级纤毛研究现状进行综述,并预测初级纤毛未来的研究趋势, 为利用初级纤毛来防治骨质疏松症打下基础。     

miR-210对血管内皮细胞VEGF-Notch信号通路的调控

目的: 观察过表达miR-210对血管内皮细胞中血管内皮生长因子(VEGF)-Notch信号通路相关分子表达的影响,探讨miR-210调控血管新生的分子机制。方法: 采用常规方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)。通过转染LV- miR-210-GFP重组慢病毒载体上调内皮细胞miR-210表达,实验分为miR-210过表达组(LV- miR-210-GFP)和对照组(LV-GFP)。采用real-time PCR检测miR-210的表达变化,流式细胞术检测ephrin-A3的表达,采用real-time PCR、Western blotting、免疫荧光细胞化学染色法分别检测VEGF-Notch信号通路相关分子VEGF、VEGF 2(VEGFR 2)、Notch1的mRNA和蛋白表达水平。结果: Real-time PCR结果显示,与对照组相比,miR-210过表达组miR-210表达水平上调了(32.10±1.26)倍;流式细胞术结果显示,miR-210过表达组阳性细胞率 较对照组 明显增加(P<0.05)。Real-time PCR结果显示,miR-210过表达组 VEGF、VEGFR2、Notch1 mRNA分别较对照组上调了(7.40±0.67)、(2.50±0.10)、(9.70±0.72)倍,P<0.05;免疫荧光结果显示,miR-210过表达组VEGF和VEGFR2红色荧光信号均显著强于对照组(P<0.05)。Western blotting 结果显示,miR-210过表达组血管内皮细胞中Notch1的蛋白表达量(4.22±0.60)较对照组明显升高(P<0.05)。结论: miR-210过表达可显著上调VEGF-Notch信号通路分子的表达水平。     

microRNA-1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的研究microRNA-1(miRNA-1)能否诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化。方法构建大鼠miRNA-1表达载体,分离扩增培养及鉴定大鼠MSCs。脂质体法转染大鼠第4代MSCs,实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测转染miRNA-1质粒后MSCs的miRNA-1表达水平。分别于转染2、4和6 d后用RT-PCR检测心肌重要转录因子GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达,免疫荧光检测心肌特异蛋白I(cTnI)的表达。结果 90%以上的MSCs表达MSCs重要标志物CD29、CD44;未检测到造血前体细胞标志抗原CD34、白细胞标志抗原CD45的表达。转染miRNA-1质粒后,miRNA-1表达水平明显上调。转染miRNA-1质粒2、4和6 d后,GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达逐渐增强。第4和6天后可见cTnI阳性表达细胞。结论 miRNA-1能诱导大鼠MSCs向心肌样细胞分化。     

镧抑制内毒素/脂多糖激活NF-κB信号通路的分子机制探讨

目的 分析镧调控内毒素/脂多糖(LPS)激活巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)信号通路的分子机制.方法 体外培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,随机分为:LaCl3 +LPS组、LPS对照组、LaCl3对照组和空白对照组.免疫细胞化学法分析p65蛋白核转位情况;分别提取细胞总蛋白或胞核胞质蛋白,ELISA法测胞核蛋白中p65蛋白与靶基因结合的活性;Western blot分析胞核蛋白中p65蛋白、胞质中核因子抑制蛋白α(IκBα)和磷酸化的核因子抑制蛋白α(p-IκBα)水平,及总蛋白IKK激酶的表达和磷酸化情况.结果 镧可阻断LPS诱导p65蛋白活化,如抑制其核转位、降低其在胞核中的表达并减弱其与靶基因结合活性.镧可抑制LPS诱导的IκBα降解,但LPS诱导IKKβ磷酸化不能为镧所阻断,且p-IKKβ磷酸化IκBα的能力亦未受到镧的影响.结论 镧可通过抑制LPS激活巨噬细胞IκBα蛋白降解、p65蛋白核易位及与靶基因结合,从而抑制LPS诱导NF-κB信号通路的活化,这可能是镧抑制LPS活化NF-κB通路分子机制之一.     

无精症或严重少精症患者Y染色体微缺失的检测

目的探讨不育男性无精子症或严重少精子症与Y染色体微缺失之间的关系。方法利用多重PCR法检测无精子症或严重少精子症患者的Y染色体微缺失情况。结果52例无精子症或严重少精子症患者中共检出Y染色体微缺失4例,缺失率为7.69%。精液正常者（对照组）12例未发现Y染色体微缺失。4例Y染色体微缺失的无精子症患者睾丸细胞学检查均未发现精子。结论Y染色体微缺失是造成男性精子发生障碍的常见病因之一。     

小鼠肾缺血再灌注损伤后缺氧诱导因子的表达变化

目的 观察小鼠肾缺血再灌注损伤中缺氧诱导因子-1(HIF-1)在缺血再灌注后不同时间点的的表达变化.方法 采用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾带制备急性缺血/再灌注肾损伤模型,分为假手术对照组和缺血再灌注组,于缺血再灌注后4h、1d、3d分别处死.采用半定量RT-PCR法检测缺血再灌注后各时间点HIF-1 mRNA的表达变化....     

诱导性多能干细胞及其在脑血管病研究和治疗中的应用

诱导性多能干(induced pluripotent stem,iPS)细胞由已分化的体细胞重新编程而来,在生物学特性方面与胚胎干细胞极其相似.与胚胎干细胞相比,iPS细胞不受细胞来源、免疫排斥和伦理学等方面的限制,并具有保留特定个体基因等优势,为再生医学以及组织工程等领域提供了可能的细胞资源.文章主要介绍了iPS细胞及其在脑血管病研究和治疗中的应用.