稀土化合物氯化镧影响神经干细胞增殖的探讨

目的初步探讨稀土化合物氯化镧（Lanthanum chloride，LaCl3）对体外培养的NSCs增殖状况的影响。方法采用成球悬浮法分离培养小鼠神经干细胞（mNSCs）；将生长状态良好的第3代mNSCs分为空白对照组、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）组、LaCl3组，分别采用常规NSCs培养液、含10ng／ml TNF-α的NSCs培养液、含2.5μmol／L LaCl3的NSCs培养液培养NSCs 1-3天。采用神经球计数、神经球体积测量方法以及采用免疫荧光细胞化学方法检测与细胞增殖相关的指标（CyclinD1）来观察NSCs的增殖状况。结果神经球计数和神经球体积测量结果显示，TNF-α组和LaCl3组神经球数量分别为[（74.56±2.6）个／瓶]和[（62.32±2.8）个／瓶]，较空白对照组[（42.28±3.5）个／瓶]明显增多，P〈0.05；神经球体积分别为[（0.82±0.16）×10^6（μm^3）]和[（0.66±0.12）×10^6（μm^3）]，较对照组[（0.26±0.0.08）×10^6（μm^3）]明显增大，P〈0.05。免疫细胞荧光检测细胞增殖结果显示，TNF-α组和LaCl3组中，Cyclin D1阳性细胞率分别为（68.6±4.2）％和（51.2±2.8）％，明显高于空白对照组的（35.6±2.6）％，P〈0.01。结论一定浓度的Lacl3具有促进NSCs增殖的作用。     

定向诱导的骨髓基质细胞移植后在大鼠缺血脑组织中的分布

目的探讨人骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，MSCs）源神经细胞体内移植后的分布状况。方法采用密度梯度离心结合贴壁分离法分离、纯化人MSCs。MSCs经bFGF预诱导24h及阿魏酸钠（Sodium Ferulate）诱导24h后用于移植。采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注动物模型．缺血2h后行再灌注，24h后经栓塞侧颈内动脉注入诱导后的MSCs（5×10^6/0．8ml）（n=61。2w后取脑组织行冰冻切片．通过检测人细胞核特异抗体MAB1281来鉴定移植的人MSCs。结果MSCs经阿魏酸钠诱导后．细胞逐渐圆缩并伸出突触．呈现神经细胞样形态。在移植大鼠脑内可检测到MAB1281呈阳性表达的人MSCs．且MSCs主要分布在缺血侧损伤灶的周围，明显高于对侧同部位及其它脑区。结论人MSCs源神经细胞移植后在大鼠脑内存活并主要聚集在脑内缺血灶的周围。     

微小RNA在神经发生中的调控作用

神经发生是指神经干细胞自我增殖和分化成为新的神经元,并整合入神经网络的生物学过程,包括胚胎时期神经发牛和成体时期的神经发生.研究表明,微小RNA在神经发生中发挥着重要的调控作用.文章就近年来微小RNA在胚胎和成体神经发生调控中的分子机制以及脑缺血后神经发生过程中微小RNA的可能调控作用进行了综述.     

内皮细胞缺氧后miR-210、miR-92a、miR-126表达及意义

目的进一步探讨缺氧后血管新生的调控机制。方法常规方法培养人微血管内皮细胞,低氧培养箱制备内皮细胞缺氧模型（观察组）,正常细胞作为对照组。采用real time PCR法检测两组内皮特异性microRNA（miR-210、miR-92a、miR-126）表达变化。结果与对照组比较,miR-210、miR-92a、miR-126分别上调了（5.19±0.99）、（3.02±0.88）、（3.87±0.83）倍,P均〈0.05。结论缺氧可促使内皮细胞特异性microRNA表达改变,此可能为缺氧后血管新生的主要调控机制。     

内皮祖细胞与缺血性脑血管病的细胞治疗

内皮祖细胞(EPC)是血管内皮细胞的前体细胞,存在于骨髓、外周血和脐血中,并参与出生后的血管发生过程.内源性和外源性因素刺激可动员骨髓EPC进入外周血,参与缺血组织的血管重建和损伤血管的再内皮化过程.血液循环中的EPC数量或质量下降是缺血性卒中预后不良的重要原因之一.EPC移植有可能为缺血性脑血管病的治疗提供一种全新的治疗策略.     

microRNAs在肾透明细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨microRNA(miRNA)在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法用实时荧光定量PCR技术检测20例肾透明细胞癌患者癌组织与癌旁组织中miRNA-20b、-21、-34a、-210、-141、-200c、200b、-514、-532-5p的表达变化。结果与癌旁组织相比,肾透明细胞癌患者癌组织中miRNA-21、-34a、-210呈高表达(P<0.05),miRNA-141、-200c呈低表达(P<0.05),miRNA-20b、-200b、-514、-532-5p则无差异。miRNA-34a随着肾癌病理分级的增高而增高。结论miRNA-21、-34a、-210、mir-141、-200c在肾透明细胞癌患者癌组织中表达存在差异,可能在肾透明细胞癌中起重要作用。     

体外培养骨髓间质干细胞向神经细胞分化的研究进展

成年动物骨髓中有两类干细胞，一是造血干细胞，另一为非造血干细胞，最早称之为成纤维克隆形成单位(CFU—fibroblast)，现指骨髓间质干细胞(mesenchymal stemcell，MSCs)或称之为骨髓基质细胞(BMSCs)。MSCs并非由单一的细胞群体组成，根据MSCs的形态特点将其分为毯子样细胞、网状细胞、     

脂多糖刺激后腹腔巨噬细胞表面Toll样受体表达的变化

目的探讨LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR2、TLR4表达的动态变化.方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞,调整细胞数为2×106/孔,分为6组,每组设3个复孔,加入LP S使其终浓度为1μg/ml,在终浓度为1μg/ml LPS刺激下,5%CO2,37℃孵育0、1.5、3、6、16、24h.用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的大鼠抗小鼠TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的大鼠抗小鼠TLR4抗体对小鼠腹腔巨噬细胞进行免疫荧光染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞数及其平均荧光强度(MFI).结果1.随着LPS刺激时间的延长,TLR2阳性率逐步上升,6h达到高峰后出现缓慢下降趋势,各刺激组阳性率与对照组组相比,P＜0.01.TLR2 MFI则随着LPS刺激时间的延长而缓慢下降,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.2.随着LPS刺激时间的延长,TLR4阳性率逐步上升,刺激达24h时,阳性率为14.02%+1.23%,与对照组(8.98%±1.06%)相比,P＜0.01.TLR4 MFI也随着刺激时间的延长而上升,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.结论LPS能够引起巨噬细胞TLR2/4表达和分布发生变化,说明TLR2与TLR4均参与针对LPS的反应.     

人诱导性多能干细胞的培养及鉴定

目的 建立稳定的人诱导性多能干细胞(iPS细胞)培养体系.方法 取第3～5代的小鼠胚胎成纤维细胞,丝裂霉素C处理后用作饲养层.人iPS细胞接种于饲养层上生长,胶原酶消化或机械法传代.倒置显微镜下观察iPS细胞生长状态;观察拟胚体形成能力;RT-PCR检测iPS细胞多能性基因的表达情况.结果 (1)小鼠胚胎成纤维细胞(MEn为贴壁生长细胞,呈梭形或多角形.细胞增殖旺盛.(2)生长在饲养层上的人iPS细胞呈典型的克隆状生长.克隆呈圆形或椭圆形,边界清晰.克隆内细胞排列紧密,细胞体积小,核大,细胞核,质比高.RT-PCR结果 显示人iPS细胞强表达多能性基因Oct4,Nanog,Sox2;去除饲养层后悬浮培养能形成拟胚体(EB).结论 本实验的培养体系适合人iPS细胞的培养,人iPS细胞能稳定增殖,保持自我更新及分化潜能.     

TNF-α体外诱导rMSC向神经细胞分化的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用.方法 采用密度梯度离心法分离rMSCs,取培养至3～5代的rMSCs以含TNF吨-α5ng/ml的培养基培养,镜下观察细胞诱导后形态的变化,采用免疫荧光细胞化学染色法检测神经前体细胞标志物巢蛋白nestin和神经元特异性烯醇化酶在细胞中的表达强度和分布.结果 rMSCs经TNF-α诱导6h后基本表现为典型神经样细胞形态,nestin和NSE呈阳性表达.结论 TNF-α具有体外诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的作用.