山莨菪碱对正常小鼠免疫功能的影响

目的:探讨山莨菪碱对正常小鼠免疫功能的影响。方法:健康ICR雄性小鼠随机分组,分别肌注给药,山莨菪碱大、中、小剂量分别为0.052、0.026、0.013 mg/20g;对照组则予等量生理盐水肌注。7天后用MTT比色法检测淋巴细胞转化功能;空斑形成试验检测抗体形成细胞功能;碳粒廓清法检测巨噬细胞吞噬功能;ELISA方法检测血清IL-2、TNF-α的含量的变化,对两组进行比较。结果:山莨菪碱能显著增强单核巨噬细胞的吞噬功能(P<0.01);对体液免疫功能影响不明显(P>0.05);并能显著抑制正常小鼠的细胞免疫功能,各剂量组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01);山莨菪碱大剂量组表现为明显抑制IL-2和TNF-α的含量。结论:一定剂量的山莨菪碱具有免疫调节作用。     

HBsAg负载的慢性乙肝患者DCs诱导特异性Th1细胞分化的作用

目的:研究HBsAg负载的慢性乙肝患者外周血树突状细胞(dendritic cells,DCs)对自身Th1细胞分化的诱导作用.方法:Fico11密度梯度离心和贴壁法分离慢性乙肝患者外周血单核细胞,以含ThIL-4 rhGMCSF的完全培养基诱导DCs.流式细胞术检测各组DC表面CD80,CD86,CD40和HLA-DR分子的表达,CCK-8法检测各组DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,ELISA法检测各组DCs培养液上清中IL-12的水平.免疫磁珠分选慢性乙肝患者外周血CD4 T细胞,分别与患者自身的DCs共培养,细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测共培养后CD4 T细胞内特征性细胞因子IFN-γ和IL-4,ELISA法检测共培养上清中IFN-γ/IL-4的水平.结果:与对照组相比,HBsAg、IFN-γ和HBsAg IFN-γ组DCs表面表达CD80,CD86,CD40和HLA-DR分子水平较高;刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力较强;DCs分泌的上清液中、IL-12水平也较高.与对照组相比,HBsAg、IFN-γ和HBsAg IFN-γ组DCs与自身Th细胞共培养后,Th1细胞占CD4 T细胞的百分比升高(10.76%±3.98%,11.43%±4.32%,15.28%±4.73% vs 7.84%±3.10%,P＜0.01),Th2细胞占CD4 T细胞的百分比降低(1.43%±0.96%.1.68%±0.16%,0.92%±0.21% vs 2.61%±1.27%,P＜0.01),共培养上清中IFN-γ的水平增高(578±47 mg/L,496±92 mg/L,784±97 mg/L vs 342±34 meg/L,P＜0.05),IL-4的水平降低(187±52 mg/L,169±38 mg/L,89±37 mg/L vs 226±48 mg/L,P＜0.05),以HBsAg IFN-γ组最为明显.结论:经HBsAg负载的DCs可以改善患者体内因DCs功能低下而引起的Th1细胞分化不足的状态.     

类风湿性关节炎患者早期外周血单个核细胞Toll样受体2、4表达及意义

目的探讨类风湿性关节炎(RA)早期患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体(TLR)2、TLR4对其配体双糖链蛋白多糖(BGN)、脂多糖(LPS)的刺激反应性,阐明PBMC TLR2、TLR4在RA疾病早期中的作用。方法采用流式细胞术、实时荧光定量逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测BGN和LPS刺激前后,RA组和健康对照组外周血CD14+单核细胞TLR4+细胞频率、PBMC TLR2 mRNA和TLR4mRNA及上清液白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量变化。结果 RA早期患者TLR2 mRNA明显升高、TLR4 mRNA下降(P<0.01);经LPS刺激后,RA患者TLR4 mRNA升高3.50倍,而健康对照组下降到0.11倍;LPS和BGN促进了各组PBMC产生IL-6、TNFα,但RA早期患者组上升的倍数明显高于健康对照组。结论 PBMC TLR2、TLR4参与早期RA的发生、发展。     

高脂血症家兔心肌、血管壁受体相关蛋白的表达研究

目的：探讨受体相关蛋白(RAP)与脂代谢的关系。方法：制备实验性家兔高脂血症动物模型，运用分子生物学技术克隆PAP基因片段，制备GST-PAP融合蛋白，用单克隆技术制备抗PAP单克隆抗体rapF2，用Westem-Blot方法及免疫组化法观察高脂血症家兔心肌，血管壁中PAP的表达及分布。结果：与对照组相比，高脂血症组心肌、血管壁中PAP表达增加，且主要分布于心脏的外膜、冠状动脉内壁与外周血管壁的内、外膜，并在67～94KD间出现特异表达带。结论：血液中过量的脂质及脂质代谢的紊乱可引起血管壁的病理改变并伴随PAP表达增加，PAP表达可能与脂质的代谢过程密切相关。     

血管外基质蛋白Fibulin-1在早期糖尿病肾病中的表达及临床意义

目的探究血管外基质蛋白Fibulin-1在早期糖尿病肾病(DN)中的表达情况及其临床意义。方法选取兴化市人民医院2017年2-6月住院患者90例,根据晨尿微量清蛋白水平,将其分为糖尿病组30例(尿微量清蛋白0~30mg/L),糖尿病微量清蛋白尿组30例(30~300mg/L),糖尿病大量蛋白尿组30例(300mg/L);另选体检健康者30例为健康对照组,分析4组血清中胱抑素C(Cys C)、空腹血糖(FBG)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和血清中Fibulin-1表达。结果糖尿病大量蛋白尿组Cys C水平和健康对照组以及糖尿病组之间差异有统计学意义(P0.05)。糖尿病大量蛋白尿组的Fibulin-1的水平与健康对照组、糖尿病组及糖尿病微量蛋白尿组之间差异有统计学意义(P0.05),糖尿病微量蛋白尿组与健康对照组及糖尿病组之间差异有统计学意义(P0.05)。采用Spearman相关分析发现,血清Fibulin-1水平与血清Cys C、FBG、TG、TC、LDL-C均呈正相关(r分别为0.46、0.38、0.29、0.37、0.35,P0.05)。结论血清Fibulin-1水平与DN的发生及病情严重程度相关。检测血清Fibulin-1水平对DN的病情判断具有积极的临床意义。     

rIL—2激活的小鼠粘附性LAK细胞抗瘤活性和扩增的研究

小鼠脾脏淋巴细胞在体外ｒＩＬ－２培养下，可粘附到塑料板或玻璃瓶上，在除去非粘附性淋巴细胞后，粘附性ＬＡＫ细胞在ｒＩＬ－２条件下，４天内可迅速扩增３６倍，与ＬＡＫ细胞抗瘤活性相比，Ａ－ＬＡＫ细胞抗瘤活性明显增强，培养２０天后其抗瘤活性仍可达３３％，从形态学分析，Ａ－ＬＡＫ细胞主要由大颗粒淋巴细胞组成。     

乙肝患者外周血Th17与Treg细胞的表达与临床意义

目的:探讨乙肝患者外周血Th17与Treg细胞的表达情况及与临床指标的相关性?方法:采集17例慢性乙肝患者(CHB组)?13例急性乙肝患者(AHB组)和14例健康者(对照组)外周血,流式细胞术分析Th17和Treg细胞的频率;酶联免疫吸附测定血清IL-17的水平,实时定量PCR法检测HBV DNA载量,速率法检测ALT水平?结果:AHB组?CHB组外周血Th17细胞频率和IL-17水平高于对照组(P < 0.05);CHB组外周血Treg细胞频率高于对照组(P < 0.01),而AHB组和对照组之间差异无统计学意义(P > 0.05);与对照组相比,AHB组外周血Th17/Treg比值显著增高而CHB组明显降低(P < 0.05);AHB组?CHB组外周血Th17细胞频率和Th17/Treg比值与ALT水平成正相关,Treg细胞频率与HBV DNA载量成正相关?结论:乙肝患者外周血存在Th17?Treg细胞表达异常和Th17/Treg相对失衡,并与ALT水平?HBV DNA载量具有一定的相关性,提示Th17和Treg细胞可能在乙型肝炎的发病机制中起着比较重要的作用?     

白介素12诱导肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的实验研究

目的比较IL-12诱导肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)与常规用IL-2诱导的肿瘤浸润淋巴细胞的特异性杀伤力、增殖能力、细胞因子和细胞表型的改变.方法将20例原发性肝癌手术切除的癌瘤进行体外分离,分别用常规含IL-2的培养液和含IL-12的培养液以及IL-12+IL-2的培养液培养,诱导TIL的生长.培养10～14d测定细胞杀伤率、细胞因子、增殖能力及用流式细胞仪检测淋巴细胞亚群CD+3、CD+4、CD+8、CD+56的表达.结果①IL-12+IL-2组和单用IL-12组对自体肝癌细胞的细胞杀伤率比IL-2组明显增高(P＜0.001;P＜0.01),均具有极显著差异;②IL-12+IL-2组较IL-2组表达CD+3、CD+4、CD+8明显升高(P＜0.01);CD+56增多不明显,无显著差异(P＞0.05).③IL-12+IL-2组比IL-2组扩增能力明显增强(P＜0.05).④IL-12+IL-2组或IL-12组较IL-2组细胞因子IFN-γ和TNF-α水平明显增高.(P＜0.05).结论白介素12作为诱导剂诱导肝癌TIL可明显增强TIL细胞的特异性细胞毒作用且增殖能力明显增强.     

肝癌术后应用白介素12及白介素2诱导的自体肿瘤浸润淋巴细胞的临床观察

目的 观察肝癌患者术后单用白细胞介素2(IL-2)培养和IL-12+IL-2培养的自体肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)输注后,其特异性杀伤力、增殖能力、细胞因子的改变以及细胞免疫功能和临床症状的变化.方法 将手术切除的原发性肝癌组织进行体外分离,分别用含IL-2的培养液和含IL-12+IL-2的培养液培养,诱导TIL的生长.培养10-14 d测定细胞杀伤率、细胞因子和增殖能力,待细胞扩增达108-9/ml时进行输注,随访观察临床疗效.结果 ①输注IL-12+IL-2组TIL对自体肝癌细胞的细胞杀伤率、细胞扩增能力、细胞因子IFN-γ和TNF-α水平均比IL-2组明显增高;②输注IL-12+IL-2诱导的TIL组与IL-2诱导的TIL组输注后CD3+、CIM+、CD8+均升高,以CD3+、CD8+升高为主.与输注前比较,差异均有统计学意义;IL-12+IL-2组与IL-2组间比较,前者CD3+、CD8+、CD 56+上明显高于后者,差异均有统计学意义.③输注后两组患者的临床症状均比输注前改善明显,但两组间比较无明显差异.④接受TIL自体输注治疗的患者,其1年、3年、5年生存率均有所提高,IL-12+IL-2组与IL-2组与同期非TIL治疗组相比较(P＜0.05).结论 白介素12诱导肝癌TIL可明显增强TIL细胞的特异性细胞毒作用且增殖能力明显增强.肝癌患者术后输注IL-12+IL-2诱导的自体肝癌肿瘤浸润淋巴细胞比输注IL-2诱导的肝癌肿瘤浸润淋巴细胞能更有效地提高肝癌患者机体免疫机能,延长1年生存期,减少复发.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对小鼠胶原诱导性关节炎的治疗作用

目的 研究组蛋白去乙酰酶化抑制剂制滴菌素A(TSA)对小鼠胶原诱导性关节炎的作用,初步探讨其作用机制.方法 将雄性DBA/1小鼠随机分为胶原诱导性关节炎(CIA)模型组、预防性给药组、治疗性给药组、正常组.免疫后第35天处死小鼠,检测小鼠足爪炎症的肿胀度,病理切片观察炎症变化,MTT法检测脾淋巴细胞对胶原的增殖反应,实时荧光定量PCR检测TSA对小鼠脾细胞IFN-γ、IL-4 mRNA表达的影响,ELISA检测IFN-γ、IL-4的含量.结果 CIA模型组关节炎评分、对CⅡ的增殖反应、IFN-γ水平均高于正常对照组;给药组关节炎评分、对CⅡ的增殖反应低于CIA模型组;给药组IFN-γ水平低于CIA组,但IL-4水平高于CIA组.结论 TSA对CIA具有抑制作用,其可能机制是抑制T细胞的活化、增殖,调节Th1/Th2的失衡状态.