细胞因子实时定量PCR检测方法的建立和应用

目的 建立细胞因子mRNA实时定量PCR的检测方法,并探讨人单个核细胞(PBMC)在激发型CD3单克隆抗体作用下,细胞因子mRNA的表达.方法 分离健康个体的PBMC,体外与激发型CD3单克隆抗体共培养,应用实时定量PCR检测不同共培养时间点Th1型(IL-2,IFN-γ)和Th2型(IL-10)细胞因子mRNA的表达.结果 激发型CD3抗体能显著上调PBMC胞浆IL-2,IFN-γ和IL-10 mRNA的表达.在共培养的12 h,IL-2 mRNA的含量显著上升并达到峰值14 000 copies/ml,随着培养时间的延长快速下降.IFN-γ和IL-10 mRNA在共培养的24～48 h达到峰值,分别为110 000 copies/ml和15 000 copies/ml.不同细胞因子其胞浆mRNA水平的基础值有明显差异.结论 实时定量PCR能在基因转录水平敏感和特异地反映微量生物活性因子的表达和调节.因此,该技术在基础和临床免疫研究中,具有良好的应用价值.     

慢性乙型肝炎抗病毒治疗后病毒学应答与特异性细胞免疫的关系

目的探讨阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎（CHB）患者病毒学应答与HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的关系。方法51例CHB患者,HBVDNA阳性（HBVDNA≥I×10^4拷贝／ml,HBeAg阳性32例（62．75％）、丙氨酸转氨酶（ALT）〉2×正常值上限（ULN）、人白细胞抗原（HLA）-A2阳性,用阿德福韦酯10mg,口服,每日1次。观察治疗72周后HBVDNA转阴和HBeAg血清学转换与HBV特异性CTL的关系。结果阿德福韦酯治疗72周后,HBVDNA转阴（〈500拷贝／m1）39例（76．47％）,其HBV特异性CTL（0．81％±0．06％）,高于12例（23．53％）的HBVDNA未转阴者（0．66％±0．06％）,t=7．93,P〈0．01,IqBeAg血清学转换8例（25％）,其HBV特异性CTL（0．97％±0．07％）,高于24例（75％）的无HBeAg血清学转换者（0．67％±0．07％）,t=7．61,P〈0．01。结论阿德福韦酯治疗CHB患者病毒学应答和血清学应答与HBV特异性CTL水平升高有关。     

两种血吸虫病免疫诊断试剂盒临床诊断特异性的评价

目的评价胶体染料试纸条(DDIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)两种试剂盒在血吸虫病临床诊断中的价值。方法采集非血吸虫病流行区的华支睾吸虫、并殖吸虫病人、健康正常人群血清和乙肝病人血清,按照单盲试验进行DDIA和ELISA检测。结果 DDIA和ELISA两种试剂盒,检测186份健康献血员的特异性分别为98．92％和99．6％,检测35例并殖吸虫病人的交叉反应率为42．86％和17．14％,检测31例华支睾吸虫病人的交叉反应率为9．68％和6．45％,检测159 份乙肝病人假阳性率分别为1．26％和5．03％;DDIA试剂盒与并殖吸虫病人的交叉反应显著高于 ELISA试剂盒(X2=5．510,P=0．019),DDIA试剂盒检测乙肝病人和健康正常人群的阳性率差异无显著性(X2=0．025,P=0．875),ELISA试剂盒检测乙肝病人的阳性率显著高于健康正常人群(X2 =6．814,P=0．009),其阳性率是健康正常人群的9．36倍。结论在血吸虫病现场筛查和医院门诊检查血吸虫病时,DDIA试剂盒优于ELISA试剂盒。     

CA50时间分辨荧光免疫分析法与免疫放射分析法的对比研究

目的：比较时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）免疫放射分析法（IRMA）检测糖类抗原CA50的优势。方法：用TRFIA和IRMA分别测定肿瘤和正常对照血清标本中CA50含量并对其测定结果和相关性进行分析。结果：160例患者血清TRFIA结果为（20．55±30．82）U／ml，IRMA结果为（31．49±75．59）U／ml，相关系数r=0．928；88例正常对照组TRFIA测定值为（3．12±5．9）U／ml，IRMA测定值为（8．11±9．5）U／ml，r=0．976。结论：TRFIA与IRMA检测CA50两种方法具有较好的相关性。TRFIA试剂稳定性好，有效期长，无放射性污染，更有利于临床大批量检测的需要，值得进一步研究和推广。     

Tfh及IL-2与IL-17在老年2型糖尿病患者外周血中的变化及其临床意义

探讨老年2型糖尿病(type 2diabetes mellitus,T2DM)患者滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell,Tfh)、CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、NK细胞的数量变化以及IL-2和IL-17等细胞因子含量差异并与患者血糖水平做相关性分析。采用流式细胞仪检测100例老年T2DM患者外周血CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、NK细胞水平并与150例老年非糖尿病患者进行比较。分析淋巴细胞亚群与患者空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、餐后2h血糖(2hour plasma glucose,2hPG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1C)、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance,HOMA-IR)及胰岛β细胞功能指数(homeostasis model assessment beta,HOMA-β)之间的相关性;采用ELISA方法检测外周血IL-2和IL-17水平。老年T2DM患者外周血中CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD4~+T细胞/CD8~+T细胞的比值以及NK细胞均低于健康对照组,并与血糖呈负相关。老年T2DM患者外周血Tfh、CD8~+T细胞以及IL-17水平均高于健康对照组。老年T2DM的发病机制可能是随着年龄增高与长期高血糖导致免疫功能异常,外周血CD4~+T细胞/CD8~+T细胞水平下降以及Tfh和IL-17水平增高进一步加剧了细胞和体液免疫调节紊乱,致使胰岛细胞不断被破坏。     

食管癌p53基因甲基化及其表达分析

本文通过检测食管癌组织中p53基因甲基化状态和p53蛋白表达情况,得出结论:p53基因高甲基化状态引起的突变或失活是食管癌发生发展的重要因素之一.     

指端采血对环卵沉淀试验结果影响观察

环卵沉淀试验（简称环试）是诊断血吸虫病应用最广的免疫学方法。以往,由于血清用量大,常采用静脉采血,近年,通过对这一方法的改进,已开始用指端微量采血,使血清用量明显减少。为了解指端采血对环试检查结果的影响,我们采用与静脉采血相比较的方法进行了实验观察,结果报告如下。l材料与方法1．1实验血清采集每个受检者同时接受两种方法：静脉采血1．5ml,常现法分离血清;指端采血用直径2．smm的聚乙烯塑料管,采集指端血12OVI,一端用火焰封口,待管内血样凝固后离心,剪去血球端,保留血清备用。I．2血清的来源①本院肝脏疾病门…     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测的意义

我们收集本院乙型病毒性肝炎患者标本,同时检测pre S1Ag、HBV标志物、HBV-DNA定量、ALT、透明质酸(hyaluronic acid HA),结果如下。     

刚地弓形虫RH株主要表面抗原1的基因克隆及原核表达

目的 从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增出其主要表面抗原1(SAG1)全长的基因编码序列，构建重组原核表达载体并在大肠埃希菌中进行表达，为进一步研制弓形虫病免疫诊断试剂盒打下基础。方法 根据弓形虫RH株主要表面抗原SAG1的cDNA序列设计一对引物，利用聚合酶链反应(PCR)技术从RH株弓形虫基因组中扩增出SAGl的全长基因，将其克隆到载体pGEX-4T-3中，并通过基因测序加以证实；重新设计引物将其亚克隆至原核表达载体pET-32c中，在大肠埃希菌中经IPTG诱导表达。结果 从刚地弓形虫RH株基因组中成功扩增到1030bp的全长SAG1基因，该基因在原核系统中经诱导表达出一分子量约37000大小的融合蛋白，表达产物以包涵体的形式存在。结论 SAG1是弓形虫主要的表面抗原，原核表达的sAG1融合蛋白在弓形虫病的免疫诊断中具有明显的潜在应用价值。     

不良孕产史妇女的弓形虫感染监测

弓形虫病是围产期医学中的一个重要寄生虫病［1～3］。采取积极有效的预防、诊疗措施,深入探讨孕妇弓形虫感染,这对保障母婴健康,提高人口素质,具有重要意义。本文对从大量生殖异常患者中筛选出不明诱因流产、死胎、畸形等130例及206例既往无不良生育史的正常妊娠妇女进行了弓形虫特异性IgM抗体检测,现报告如下。1材料与方法1．1对象1．1．1异常孕产组随机选取我院优生门诊的不良孕产史（包括自然流产、死胎、胎儿畸形等）的妇女130例作为研究组。1．1．2正常妊娠组同期无不良生育史的节育妇女206例作为对照组。全部检查对象年龄最小…