鸡tie-2受体胞外片段重组蛋白的制备及其抗血管生成作用的研究

目的　设法调控血管的生长发育 ,从而达到治疗疾病的目的。方法　用 PCR方法从既往构建含鸡 tie- 2受体胞外段基因的表达质粒中扩增目的片段 ,构建 p QE质粒原核表达载体并诱导目的蛋白的表达 ;将目的蛋白进一步纯化、复性并免疫小鼠 ,获得抗血清 ,用 EL ISA和 Western印迹检测抗血清中抗体的存在 ;分离纯化抗体 ,用流式细胞仪体外观察其对血管内皮细胞生长情况的影响用体内藻酸盐包裹肿瘤细胞实验和肿瘤内微血管 CD31免疫组化观察其对血管生成情况的影响。结果　经酶切分析及测序鉴定表明获得了鸡 tie- 2受体胞外目的片段的p QE原核表达载体 ,且高效表达目的蛋白 ,其免疫小鼠可产生抗重组蛋白的抗体 ;体外细胞培养结果显示免疫后产生的抗体明显的诱导血管内皮细胞凋亡 ;藻酸盐包裹实验表明此抗体能显著降低肿瘤新生血管的形成 ;CD31微血管计数显示此抗体能明显减少肿瘤内微血管数。结论　用原核表达的方法成功制备了鸡 tie- 2受体胞外片段 (配体结构域 )的蛋白疫苗 ,且此疫苗能明显产生抗血管生成作用。     

多药耐药基因在K562细胞诱导分化过程中的表达

目的　通过组织血浆酶原激活剂 (TPA)诱导K5 6 2细胞分化 ,探讨白血病的多药耐药性。方法　应用体外细胞培养技术 ,通过细胞形态、细胞化学染色观察细胞分化 ;用免疫组化 (IC)、流式细胞术 (FCM )、聚合酶链反应 (RT PCR)等技术检测P 糖蛋白 (P gP)的表达和功能及多药耐药基因 1信使核糖核酸 (mdr1mRNA)的表达。结果　TPA诱导K5 6 2细胞向单核 /巨噬细胞分化 ;在此分化过程中mdr1mRNA表达随作用时间延长而渐增加 ,P gP表达及功能增强。 结论　mdr1mRNA、P gP表达及功能在TPA诱导K5 6 2细胞向单核 /巨噬细胞分化过程中随细胞分化而上调     

405例人体肿瘤细胞DNA含量的流式细胞术检测分析

为探讨不同类型的人体肿瘤细胞周期中 Ｄ Ｎ Ａ 含量与肿瘤组织学间的关系,采用流式细胞术检测了４０５例新鲜肿瘤组织中瘤细胞的 Ｄ Ｎ Ａ 含量,并用光学显微镜观察了肿瘤组织的病理改变。结果显示： ２２例良性肿瘤及３８３例恶性肿瘤中异倍体出现率分别是２７％ 及５２％ ;不同组织类型的恶性肿瘤中异倍体的出现率以腺癌为最高,其中肝癌、肠癌及胃癌异倍体的出现率分别为６１％ 、５５％ 及５１％ ,肉瘤次之,为３７％ ,鳞癌最少,为１７％ ;细胞增殖周期 Ｓ≥１０、 Ｇ２／ Ｍ ≥１０或 Ｓ≥２０、 Ｇ２／ Ｍ ≥５仅在恶性肿瘤中出现,良性肿瘤中无１例达到此值。８例多倍体肿瘤全是恶性。由此提示良性、恶性及不同组织类型的恶性肿瘤异倍体出现率有明显区别（ Ｐ＜ ０．０５）; Ｓ期细胞比率（ Ｓ Ｐ Ｆ）及 Ｇ２／ Ｍ 达到一定数值时,良恶性肿瘤有明显的区别（ Ｐ＜ ０．０１）。     

荧光染料CFSE在实验性葡萄膜炎T细胞增殖研究中的应用

目的 探讨荧光染料CFSE在实验性葡萄膜炎(EAU)抗原特异T细胞增殖研究中的应用价值. 方法 以人类光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)的多肽片段IRBP161-180为抗原,免疫B10RⅢ小鼠使其产生EAU.用CFSE荧光染料标记细胞,结合荧光单抗和流式细胞术,检测T细胞及其亚群在特异抗原刺激下,不同时间点细胞增殖的情况.结果 IRBP161-180刺激4 d后出现T淋巴细胞增殖分裂,表现为CFSE荧光强度的系列减半.使用荧光单抗双标记发现CD4+ T和CD8+ T细胞增殖反应不同步,CD8+ T细胞较CD4+T细胞增殖分裂更活跃,亲代细胞百分率下降更明显(P<0.01).结论 CFSE荧光标记技术是分析EAU抗原特异性T细胞及亚群增殖分裂的有力工具.