Eicosapentaenoate对软脂酸诱导细胞株INS-1凋亡的保护作用研究

目的探讨eicosapentaenoate（EPA）对软脂酸诱导的大鼠胰岛B细胞瘤株INS．1凋亡的保护作用。方法根据不同干预条件分为空白对照组,EPA干预组,软脂酸干预组,EPA及软脂酸联合干预组,24h、48h后分别应用MTY检测各组细胞生长活力,48h同时应用分光光度法检测Caspase-3,Western blot检测Bax及SREBP1c的表达,ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果EPA及软脂酸联合干预组细胞生长活力较软脂酸干预组显著升高[24h：（37．33±1．15）OD vs（30．79±1．55）OD,P〈0．01;48h：（31．50±1．56）OD vs（23．94±1．10）OD,P〈0．01],但低于空白对照组[24h：（37．33±1．15）OD vs（44．26±0．94）OD;48h：（31．50±1．56）OD vs（40．92±0．60）OD,P〈0．01]及EPA干预组[24h：（37．33±1．15）OD vs（44．37±0．79）OD;48h：（31．50±1．56）ODvs（39．45±3．42）OD,P〈0．01],联合干预组细胞Caspase-3活力及ROS含量（3566．67±305．51）OD显著低于软脂酸干预组（4233．33±416．33）OD,高于空白对照组（2233．33±503．32）OD及EPA干预组（2566．67±321．46）OD。联合干预组较软脂酸干预组下调Bax及SREBP1c表达。结论EPA可以抑制软脂酸诱导的胰岛β细胞凋亡。     

甲状旁腺素受体1表达对高糖状态下INS-1细胞功能影响研究

目的 观察甲状旁腺受体1(PTH1R)的表达对胰岛β细胞胰岛素合成与分泌功能影响.方法 构建出PTH1R基因沉默的细胞模型后,分别应用放射免疫法观察25 mmol/L D-葡萄糖处理后对照组、阴性基因克隆组(siPTH1R-NC)、PTHrP组及阳性基因序列组(siPTH1R)细胞内胰岛素含量、葡萄糖刺激胰岛素分泌能力、应用Fluo-3/AM 检测INS-1细胞内钙离子浓度及应用INS-1细胞2-脱氧-[3H]-葡萄糖摄入率检测INS-1细胞葡萄糖转运能力.结果 PTHrP组胰岛素分泌能力高于其他3组,siPTH1R组则低于对照组及siPTH1R-NC组(均P＜0.01);PTHrP组中细胞内胰岛素含量显著高于对照组、siPTH1R-NC及siPTH1R组(均P＜0.01),其他3组间差异无统计学意义;PTHrP组中钙离子浓度水平高于其他3组,siPTH1R组低于对照组及siPTH1R-NC组.PTHrP组中细胞2-脱氧-[3H]-葡萄糖摄入率高于其他3组.结论 高糖状态下PTH1R表达水平与INS-1细胞胰岛素合成与分泌功能有关,可能为INS-1细胞自我保护的一种作用.

Abstract：

Objective To observe insulin synthesis and secretion in INS-1 under high glucose, and to clarify the effect of PTH1R. Methods After successful construction of recombinant PTH1R-siRNA vectors in INS-1 cell, insulin secretion and intracellular insulin content of control group, siPTH1R-Negative control group, PTHrP group, and siPTH1R group under 25 mmol/L glucose were measured by radioimmunoassay in INS-1 cell. Intracellular calcium were detected by Fluo-3/AM and the capability of glucose transport was calculated by assaying the uptake of [3H]-2-deoxy-D-glucose in cells.Results Compared with control group, and siPTH1R-NC group, PTHrP group showed increased capability of insulin secretion; PTHrP group had higher intracellular insulin levels than others; PTHrP group showed increased intracellular calcium; the uptake of [3H]-2-deoxy-D-glucose under high glucose after 48h of PTHrP group was increased(all P＜0.01). Conclusion There is a close relationship between PTH1R activation and insulin secretion and synthesis, PTH1R activation may be one of the protective mechanisms in maintaining function of β-cell under high glucose.     

高糖状态下甲状旁腺素受体1对乳腺癌的作用机制研究

目的 阐明高糖状态下甲状旁腺受体1(PTH1R)对乳腺癌细胞株SHZ-88的作用机制.方法 应用实时(real time) PCR分别检测0(对照组)、5、15、25 mmol/L葡萄糖浓度下PTH1R mRNA水平;构建出PTH1R基因沉默(siPTH1R)的细胞模型后,分别应用MTT法、TUNEL-FITC/Hoechst33258及Western blot法检测对照组、25 mmol/L葡萄糖处理组(高糖组)、25 mmol/L葡萄糖处理的阴性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R NC组)及高糖阳性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R组)细胞活力、细胞凋亡情况及Bax、Bcb2蛋白的表达.结果 随着葡萄糖浓度升高,PTH1R mRNA水平增高,其中25 mmol/L葡萄糖处理后PTH1R mRNA水平最高(均P＜0.01);高糖siPTH1R组细胞活力(P＜0.05,P＜0.01及P＜0.01)及Bcl-2表达(均P＜0.01)低于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组;高糖siPTH1R组中细胞凋亡水平及Bax表达高于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组(均P＜0.01);与对照组比较,高糖组细胞活力(P＜0.01)及Bcl-2表达(P＜0.01)增高,而Bax表达(P＜0.01)降低.结论 高糖状态下PTH1R表达水平与SHZ-88细胞增殖能力有关,抑制PTH1R表达可能为糖尿病合并乳腺癌治疗有效靶点之一.     

人类端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白在嗜铬细胞瘤中的表达及其意义

目的研究人类端粒酶逆转录酶（hTERT）在嗜铬细胞瘤中的表达及其作为预测生物学行为标志物的价值。方法采用原位杂交方法测定hTERT mRNA在45例嗜铬细胞瘤和副神经节瘤和9例正常肾上腺髓质中的表达；免疫组织化学方法检测hTERT蛋白的表达水平。结果hTERT mRNA在5例恶性（5／7）和5例可疑恶性（5／7）肿瘤中表达，表达均高于良性肿瘤（3／31），差异有统计学意义（P〈0．01）；hTERT蛋白的表达在良性（3／31）和可疑恶性（6／7）以及恶性（5／7）差异有统计学意义（P〈0．01）；9例正常肾上腺髓质细胞中未发现hTERT mRNA和蛋白的表达；肿瘤组织hTERT蛋白和mRNA的表达存在正相关性（r=0．951，P〈0．01）；hTERT蛋白和mRNA的表达与临床因素，如性别、肿瘤大小和血压无关联。结论hTERT mRNA和蛋白检测对良、恶性嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的鉴别诊断有重要临床意义。     

原发性甲状腺滤泡癌远处转移中病理标记物的诊断价值

原发性甲状腺滤泡癌（thyroid follcular carcinoma，TFC）常见的远处转移，主要由于血行转移到其他器官，少见淋巴转移。TFC临床诊断远处转移多依赖于影像学，而发现时常常是晚期，耽误了相关诊治［1］。既往本课题组进行了系列性TFC的研究，发现了个别病理标记物具有相关远处转移提示作用［2］，因此，我们分析35例 TFC 组织中PTTG等7种病理标记物的表达情况，旨在探讨它们在TFC是否存在远处转移的作用及其意义，寻找在该病变中有诊断意义的客观指标。     

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因siRNA表达载体构建及鉴定

目的:构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体及鉴定。方法:根据Genbank筛选甲状旁腺激素受体1基因3个阳性克隆及1个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至胰岛素-1细胞中,Westernblot观察甲状旁腺激素受体1基因表达,鉴定其转染效率。结果:菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确,并能成功转染到胰岛素-1细胞株中,Western blot筛选最佳抑制基因。结论:成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,为深入探讨大鼠甲状旁腺激素受体1基因的抗凋亡作用奠定了试验基础。     

甲状腺乳头状癌组织PTTG及PTTGmRNA表达研究

目的:检测PTTG在甲状腺乳头状癌组织中的表达,探讨其与甲状腺乳头状癌的关系.方法:在52例甲状腺乳头状癌组织及其癌旁组织中分别应用原位细胞凋亡检测(TuNEL)试剂盒测定原位细胞凋亡指数(apoptosis index,AI),应用免疫组化方法检测PTTG,应用原位杂交方法检测PTTG mRNA表达.结果: PTTG及PTTG mRNA在甲状腺乳头状癌组织中表达比相应癌旁组织显著升高(P＝0.0091,P＝0.0012):PTTG及PTTG mRNA灰度值与AI正相关(r＝0.447,P＝0.003;r＝0.564,P＝0.000).结论: PTTG及PTTG mRNA表达升高可能参与甲状腺乳头状癌的发生发展,检测PTTG及PTTG mRNA对于甲状腺乳头状癌与良性组织鉴别诊断具有临床参考意义.     

PPARγ与内分泌肿瘤关系的研究进展

核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome Proliferator—Activated Receptorγ，PPART）与内分泌肿瘤的相关性研究是目前研究热点，PPAR7在内分泌肿瘤调节中具有重要作用。现将PPAR7与内分泌肿瘤相关进展综述如下。     

核内蛋白P8与内分泌肿瘤的研究进展

核内蛋白P8是一种应激蛋白,其分子结构及生化功能与羟甲戊二酸单酰CoA（HMG）-I／Y蛋白类似,参与甲状腺癌、垂体瘤等的发生、发展及转移。P8可通过上调转化生长因子（TcF）β1、下调P27蛋白等作用促进肿瘤生长,同时促进肿瘤种植、转移。对于P8的深入研究,有助于阐明内分泌肿瘤发病机理及抗肿瘤新药的研发。     

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因SiRNA表达载体的构建、鉴定及对高糖状态下INS-1细胞周期的影响

目的 构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因(PTH1R)的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体以及鉴定及观测高糖下对INS-1细胞周期的影响.方法 根据Genbank筛选PTH1R三个阳性克隆及一个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至INS-1细胞中,Westernblotting观察PTH1R表达,鉴定其转染效率,筛选出最佳抑制基因后,应用流式细胞仪检测25mmol/LD-葡萄糖处理INS-1细胞周期.结果 菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确.并能成功转染到INS-1细胞株中,Westernblot筛选最佳抑制基因.细胞周期检测提示PTHIR沉默后抑制INS-1细胞从G0/G1期进入S期.结论 成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,高糖状态下PTH1R表达可能为INS-1细胞自我保护的一种作用.