阿霉素诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡及其机制

目的研究阿霉素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法不同时间和不同剂量的阿霉素处理SMMC-7721细胞,以RT-PCR和Western blot法分别分析阿霉素处理后各分子的mRNA和蛋白表达的变化。结果阿霉素处理可以明显抑制细胞生长;使细胞呈明显凋亡改变;诱导多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]水解;诱导caspase-3和caspase-9的转录水平上调。阿霉素处理可诱导人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10,PTEN)的转录和蛋白水平升高,可能使细胞进入凋亡过程。一旦细胞发生凋亡,PTEN转录和蛋白水平下降;随之诱导FAK转录和蛋白表达水平降低。结论阿霉素可以通过涉及caspase-3的途径诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡。阿霉素诱导的凋亡对PTEN、局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)表达及FAK磷酸化均有明显影响。     

纤连蛋白受体分子中N-糖链对其与纤连蛋白结合的影响

研究纤连蛋白受体（FnR）分子中N-糖链对其与纤连蛋白（Fn）结合的影响。利用纤连蛋白片断亲和层析柱和麦胚凝集素亲和层析柱，从人胎盘组织中纯化得到了FnR，经SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳证实为α和β两个亚基所组成。制备嵌合FnR的脂质体后，用糖甘酶处理以获得合不同糖链结构FnR脂质体，研究FnR分子中糖链在受体与配体结合中的作用。结果：用唾液酸酶处理嵌合FnR的脂质体，与Fn的粘附能力保持不变。嵌合FnR的脂质体单用p-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶处理，或用唾液酶，β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，β-半乳糖苷酶三者联合处理，其与Fn的粘附能力均下降50％。结论：FnR上糖链改变确实能影响FnR与Fn的结合，但FnR糖链上末端的唾液酸可能不影响两者的结合，而FnR糖链上末端或平分型N-乙酸氨基葡萄糖（GlcNAc）在两者结合时可能起重要作用。     

细胞信号转导抑制剂介导Th1/Th2免疫偏移对血吸虫虫卵肉芽肿的影响

目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)和磷酯酰肌醇-3-激酶(P13-K)特异性抑制剂(分别为tyrphostin-25、D-sphingosine和wortmannin)对日本血吸虫感染小鼠虫卵肉芽肿病变的影响,并探讨其作用机制。 方法 于小鼠感染日本血吸虫后第35天起,经尾静脉分别注射3种信号转导分子抑制剂,连续5 d。在小鼠感染后6和8wk,观察小鼠肝肉芽肿病变,并用ELISA夹心法和硝酸还原酶法分别测定小鼠血清IFN-γ、IL-4和一氧化氮(NO)水平。结果 感染小鼠应用TPK和PKC抑制剂后均可显著抑制肝肉芽肿病变,PKC抑制剂可使肉芽肿减少率达56.2％～63.4％(P<0.01)。PKC抑制剂主要抑制Th2细胞因子IL-4的表达,其抑制率为34.1％和65.6％(P<0.01),而对NO水平的检测结果进一步证明了PKC抑制剂对IL-4表达的抑制作用。 结论 在日本血吸虫感染早期应用PKC抑制剂干预T淋巴细胞信号转导可显著抑制小鼠肝肉芽肿病变,其机制可能是由于抑制了Th2优势应答并介导Th2向Th1免疫反应偏移。     

高血糖对人红细胞醛糖还原酶活性的影响

目的研究高浓度葡萄糖对人红细胞醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ）活性的影响。方法利用ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ－５２）柱层析法，将正常人、糖尿病患者及体外高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶部分纯化，测定其活性，并对其性质作进一步分析。结果①高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶Ｋｍ值下降约６～７倍；②糖尿病红细胞醛糖还原酶活性明显高于正常人，酶活性升高程度与血糖值正相关；③高糖时醛糖还原酶不仅对多种底物的Ｋｍ值（包括葡萄糖）显著下降，而且对醛糖还原酶抑制剂（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＡＲＩｓ）的抑制不敏感。结论①高血糖时ＡＲＩｓ的用量需加大，才能取得满意的疗效；②（ＤＥ－５２）柱层析法测定红细胞ＡＲ活性准确、方便，可以作为判断糖尿病慢性并发症病情及评估醛糖还原酶抑制剂疗效的一项重要指标     

乙型肝炎病毒preS/S蛋白对人PCNA基因启动子激活作用的研究

目的：研究乙型肝炎病毒preS/S蛋白对人增殖细胞核抗原（PCNA）基因启动子的激活作用。方法：利用荧光素酶报告基因，用共转染方法研究该整合片段对人PCNA启动子的作用。用免疫组织化学法确定preS/S蛋白细胞中的定位。结果：在人肝细胞L02中，含有上述HBV整合片段的质粒pKSH7C-Hpa I能以剂量依赖方式激活PCNA启动子，使PCNA启动子活性提高0.5倍；免疫组化分析表明，其蛋白定位于细胞质中。结论：preS/S蛋白对PCNA启动子有激活作用，但作用并非直接，可能是通过细胞信号传导途径来影响PCNA活性。     

β肽及其多聚物对人肝癌细胞株与基质黏附的抑制作用

目的研究β肽及其多聚物对肝癌细胞株与基质黏附的抑制作用.方法观察化学合成的β肽（β肽）、化学合成的二聚β肽（β2肽）、化学合成的三聚β肽（β3肽）、用大肠杆菌表达系统表达的表达β3肽及GRGDS对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞及人肝癌高转移细胞株HCCLM6细胞与纤连蛋白（fibronectin,FN）的黏附作用的影响.结果各种多肽对细胞与FN的黏附均具有特异的抑制作用,呈现剂量效应相关关系和时间效应相关关系（P〈0.05）.且随着多肽重复次数的增多,对细胞与FN黏附的抑制作用越强,表达β3肽和β3肽的抑制肿瘤细胞黏附的作用最强,β2肽和GRGDS的作用次之,β肽的抑制作用最弱.各种多肽对HCCLM6细胞与FN黏附的抑制作用强于对SMMC-7721细胞的黏附抑制作用.结论表达β3肽对肝癌细胞株与基质的黏附具有强大的抑制作用,可能成为抗肿瘤转移的新的药物手段.     

“以器官学为中心”的基础医学相关课程教学改革的尝试

本介绍了对基础医学专业《理科基地班》学习实施“以器官学为中心”的相关课程改革的具体做法,其中包括成立了由相关课程骨干教师所组成的教学改革领导小组,制定了涉及３个学期整合式课程的教学计划,编写了相关课程内容的教学大纲,组织了各章节内容的备课小组;实施全程导师制等,经过两届学生的试行,初步发现该班与同年级临床医学专业班级的学生比较,他们在解答综合分析性试题的能力上有明显提高,我们认为这一教学改革是符合第二届全国教学工作会议精神及高等教育法所制定的培养目标的。     

杧果叶中杧果苷的提取与鉴定

目的 :探讨从本地漆树科植物果树叶中提取鉴定果苷的方法。方法 :使用乙醇渗漉等一系列步骤从果树叶中提取和纯化果苷 ,用聚酰胺薄层色谱、吸收光谱检测、红外光谱测定、高效液相色谱、高效毛细管电泳等方法进行鉴定。结果 :提取的果苷外观呈金黄色 ,显微镜下呈针状结晶 ;熔点 (mp)为 2 71～ 2 73℃ ;三氯化铁、二氯化锶反应阳性 ;聚酰胺薄层色谱Rf=0 .4 6 ;吸收光谱扫描、高效液相色谱、高效毛细管电泳、红外光谱分析结果等均与对照品相似。结论 :从果树叶中提取的果苷经上述方法鉴定后证明其纯度已和对照品相同 ,可用于药理实验     

凝集素染色分析胆汁成核活性蛋白的研究

目的：探讨促成核蛋白中糖链的结构与类型及其在胆石形成中的作用。方法：凝集素探针介导的点印迹法分析相对分子质量为33500的泡蛋白糖链组成与结构，筛选出最强结合凝集素，并借助透射电镜观察泡蛋白参与模拟胆汁泡聚集，融合的微观过程。通过结晶生长试验检测33500泡蛋白及其脱糖其产物的促成核活性。结果：33500泡蛋白糖链为DSA强结合，ConA(-),属复杂型多天线聚糖。HRP－DSA标记泡蛋白糖链可直接反映泡蛋白促胆汁泡聚集，融合及胆固醇单水结晶析出的动态过程。33500泡蛋白具有明显的促成核活性，其成核时间指数，结晶生长速度指数及结晶最终浓度指数分别为0．57，1．52及1．63（P＜0．05），脱基后其成核活性几乎完全丧失。结论：糖链影响33500泡蛋白促成核活性，提示其可能参与成核效应蛋白的致石作用过程。