转染反义细胞周期蛋白A的舌癌细胞系的建立与鉴定

目的 :研究反义细胞周期蛋白 (cyclinA)基因对舌癌细胞周期的调控作用 ,为cyclinA在基因治疗方面提供理论基础。方法 :采用阳离子脂质体转染方法将已构建成功含人全长cyclinA(1 77kb)的反义真核表达载体pAS_A导入舌癌细胞系 (Tca8113) ,经G418选择性培养液筛选 ,获得阳性克隆细胞 ,通过细胞原位杂交检测cyclinA基因的稳定转染情况。结果 :pAS_A成功转染进入Tca8113,转染后细胞内cyclinAmRNA的转录和蛋白表达明显降低。结论 :反义cyclinA基因稳定有效的在Tca8113细胞系中表达     

甲状旁腺激素对人牙乳头间充质细胞骨形成蛋白3表达的影响

目的 :观察甲状旁腺激素 (parathyroidhormone ,PTH)对人牙乳头间充质细胞骨形成蛋白 3 (bonemorphogeneticprotein ,BMP)表达的影响 ,探讨PTH对人牙乳头间充质细胞的影响及途径。方法 :细胞培养及原位杂交。结果 :体外培养的人牙乳头间充质细胞BMP3mRNA阳性杂交信号较弱 ;细胞经PTH作用 5d后 ,在细胞质内 ,出现BMP3mRNA阳性杂交信号 ,提示PTH可提高细胞合成BMP3的能力。结论 :在PTH的作用下 ,BMP3基因被激活、表达 ,可能起到类似于牙胚发育早期成釉细胞的作用 ,通过自分泌和旁分泌作用参与牙乳头间充质细胞的诱导和分化 ,促进牙本质和牙本质样基质的形成     

血管内皮细胞生长因子在兔骨髓基质干细胞内的表达及影响

目的:构建血管内皮细胞生长因子pcDNA3/hVEGF165真核表达载体,并用脂质体法转染骨髓基质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),观察血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)转染后对骨髓MSCs的生长、转化的影响。方法:采用贴壁法分离骨髓MSCs,脂质体法转染。100g/L胎牛血清DMEM培养MSCs,计数法绘制生长曲线,特殊染色观察MSCs的转化,免疫组织化学法观察转染后VEGF的表达。结果:转染了pcDNA3/hVEGF165的骨髓MSCs胞浆内出现VEGF阳性颗粒,而转染了pcDNA3组及未转染组中未出现阳性颗粒,生长曲线在3组中无明显差别。特殊染色出现的时间亦无明显差别。而且,注射有转染了pcDNA3/hVEGF165的MSCs的大白兔局部皮下血管数量增加,其他两组未发现。结论:本实验成功构建了pcDNA3/hVEGF165真核表达载体并能够在MSCs细胞内表达VEGF,其表达产物具有血管内皮增殖刺激活性。     

血管内皮细胞生长因子在兔骨髓基质干细胞内的表达及影响

目的：构建血管内皮细胞生长因子pcDNA3／hVEGFl65真核表达载体，并用脂质体法转染骨髓基质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)，观察血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)转染后对骨髓MSCs的生长、转化的影响。方法：采用贴壁法分离骨髓MSCs，脂质体法转染。100t/L胎牛血清DMEM培养MSCs，计数法绘制生长曲线，特殊染色观察MSCs的转化，免疫组织化学法观察转染后VEGF的表达.结果：转染了pcDNA3/hVKGFl65的骨髓MSCs胞浆内出现VEGF阳性颗粒，而转染了pcDNA3组及未转染组中未出现阳性颗粒，生长曲线在3组中无明显差别。特殊染色出现的时间亦无明显差别。而且，注射有转染了pcDNA3/hVEGN65的MSCs的大白兔局部皮下血管数量增加，其他两组未发现。结论：本实验成功构建了pcDNA3／hVEGF165真核表达裁体并能够在MSCs细胞内表达VEGF，其表达产物具有血管内皮增殖刺激活性。     

雪旺细胞标志物S100蛋白在涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭中的意义

目的：对比研究雪旺细胞标志物S100蛋白在腺样囊性癌及粘液表皮样癌中的表达，探讨其与腺样囊性癌嗜神经侵袭间的关系。方法：选取20例腺样囊性癌和18例粘液表皮样癌标本，分别进行S100免疫组化染色。结果：腺样囊性癌嗜神经侵袭的能力明显高于粘液表皮样癌，两者有显著性差异。S100在绝大多数腺样囊性癌中均有表达，而在粘液表皮样癌中则没有表达。两者有显著性差异。结论：腺样囊性癌细胞发生了雪旺细胞分化进而侵袭神经可能是腺样囊性癌嗜神经侵袭的组织学基础。     

组织工程材料大鼠颅骨缺损修复过程中的磨片三色染色观察

目的:用自体细胞复合含孔磷酸钙陶瓷修复颅骨极量骨缺损的SD大鼠骨组织工程模型标本,制作不脱钙磨片并通过改良Masson氏三色染色以观察新骨形成及其与支架材料的关系。方法:成年雄性SD大鼠 14只,随机分成实验组和对照组,每组 7只。全麻及无菌条件下取其左侧胫、股骨骨髓,体外诱导培养大鼠自体骨髓基质细胞。实验组将已分化的自体成骨细胞与含孔磷酸钙陶瓷复合用于修复同体大鼠颅骨极量骨缺损;对照组颅骨缺损处仅置入无细胞的单纯陶瓷。分别于术后 4、8、12、16、20、24及 28周每组各处死1只动物并取材,制成不脱钙磨片并进行改良Masson氏三色染色,光学显微镜下观察比较颅骨修复情况及其矿化程度。结果:实验组 4周时不脱钙磨片,即可见骨缺损修复中央区陶瓷孔隙内蓝色的新骨形成;随着时间的推移,形成新骨逐渐矿化成为红色的成熟骨组织, 28周时骨缺损修复区可见大片新骨呈岛状或条索状排列,其间的陶瓷支架部分已降解,同时加以墨汁灌注的磨片显示骨组织中已形成大量新生血管网。结论:以含孔磷酸钙陶瓷为支架的组织工程骨缺损修复明显优于单纯生物陶瓷修复法,磨片三色染色方法既可了解新骨形成及其矿化程度,又可观察新骨形成与陶瓷支架之间的关系。     

颌骨骨肉瘤中p~(27)的表达及意义

目的 :分析细胞周期素依赖激酶抑制物 (CKI)p2 7蛋白在颌骨骨肉瘤的表达及意义。方法 :采用免疫组织化学ABC法检测p2 7蛋白在 2 0例颌骨骨肉瘤和 8例骨软骨瘤中的表达。结果 :2 0 % (4 2 0 )的骨肉瘤中p2 7呈阳性表达 ,87 5 % (7 8)的骨软骨瘤呈p2 7阳性 ,阳性表达率与骨肉瘤相比有显著性差异 (p <0 0 5 )。结论 :p2 7在颌骨骨肉瘤中低表达并可作为骨肉瘤发生和发展过程中的一个抑癌基因标志物     

牙周炎动物模型及其翻瓣术的愈合情况(猴牙实验研究)

<正> 牙周翻瓣术是治疗牙周炎的一种常用手术。目前对这种手术的愈合情况论说不一,有人认为术后新附着(New attachment,过去曾称之为重附着或再附着 Reattachment)是可能的,但也有持不同观点者,他们怀疑所谓的附着只不过是炎症消退的组织收缩或仅系袋壁上皮与牙根面的贴合而已。为此,我们进行了动物实验,现将取得的初步组织学结果介绍如下。     

釉质发育不全症致病机制的研究进展

釉质发育不全症 (ａｍｅｌｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｐｅｒｆｅｃｔａ ,ＡＩ)是釉质有机物质功能异常所导致的不同类型釉质结构异常的一组遗传性疾病 ,不涉及全身系统病变[1] 。造成ＡＩ的因素很多 ,如在牙齿发育期间严重的营养障碍、代谢及内分泌系统缺陷、严重的局部因素等[2 ] 。临床可分为三型 :即釉质发育不良型(ｈｙｐｏｐｌａｓｔｉｃＡＩ ,ＨＰＡＩ) ,釉质矿化不良型 (ｈｙｐｏｃａｌｃｉ ｆｉｅｄＡＩ ,ＨＣＡＩ)和釉质未成熟型 (ｈｙｐｏｍａｔｕｒａｔｉｏｎＡＩ ,ＨＭＡＩ)。ＨＰＡＩ是由于釉质基质的合成、分泌或沉积障碍所致 ,釉…     

体内和体外实验观察骨形成蛋白在骨肉瘤中的作用

目的　研究骨形成蛋白 ( bone morphogenetic protein,BMP)在骨肉瘤中的表达及其与肿瘤增殖活性的关系 ,并观察 BMP单抗体外对骨肉瘤细胞作用 ,为骨肉瘤的单抗治疗打下基础。方法　应用 BMP单抗和免疫组化方法检测骨肉瘤中 BMP蛋白的表达 ;并应用增殖细胞核抗原 ( proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的单抗对骨肉瘤的增殖活性进行检测 ;体外实验观察 BMP单抗对骨肉瘤细胞 OS-73 2的作用。结果　 2 4例标本中有 18例有 BMP蛋白的表达 ;有 BMP表达的骨肉瘤有较高的增殖活性 ;应用 BMP单抗体外可以对骨肉瘤细胞系 OS-73 2细胞产生生长抑制。结论　 BMP有可能在肿瘤的发生和发展过程中起一定作用 ,可以作为估计骨肉瘤预后的参考指标 ,BMP单抗对骨肉瘤细胞的抑制作用为其临床应用于骨肉瘤的单抗治疗打下基础