抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制研究

目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响,并对其影响肝癌细胞增殖的机制进行探讨,为STAT5A基因在肝细胞癌中的功能研究提供实验依据。方法:构建针对STAT5A基因的shRNA真核表达载体,脂质体法转染人肝癌细胞HepG2,采用半定量RT-PCR的方法检测细胞中STAT5A mRNA的变化;蛋白质印迹技术检测转染前后细胞中STAT5A蛋白、细胞周期蛋白Cyclin D1蛋白表达的变化;采用MTT法检测细胞增殖的情况。结果:酶切及测序结果显示shRNA表达载体均构建成功,转染HepG2细胞48h后,与对照组相比,RT-PCR结果显示实验组细胞中STAT5A mRNA的抑制率为72.03%(P<0.05),蛋白质印迹法显示STAT5A蛋白的抑制率为66.27%(P<0.05),细胞周期蛋白Cyclin D1蛋白表达下降47.16%(P<0.05),同时MTT法显示细胞生长速度减慢、增殖抑制明显。结论:抑制STAT5A基因的表达可有效抑制HepG2细胞的增殖,其机制可能是通过下调Cyclin D1的表达实现的。     

维生素B12对肝硬化贫血患者血液影响的I临床研究

目的观察维生素B12对肝硬化失代偿期伴中度贫血患者红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、网织红细胞计数的影响。方法将肝硬化失代偿期伴中度贫血患者60例随机分成对照绀30例,治疗组30例,分别给予基础保肝及联合维生素B12综合治疗,观测两组RBC、Hb及网织红细胞数值,分析维生素B12的治疗作用。结果治疗组治疗后RBC、Hb、网织红细胞与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0.01）;治疗组与对照绀治疗后比较RBC、Hb、网织红细胞计数差异有统计学意义（PRBC〈0.05,PHb〈0.01,P网织红细胞〈0.01）。结论维生素B12可有效改善肝硬化失代偿期贫血症状。     

STAT5A基因有效siRNA序列的筛选及其对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响北大核心CSCD

目的筛选针对STAT5A基因有效的siRNA,研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨STAT5A基因在肝癌发生发展中的作用。方法设计并化学合成针对STAT5A基因三个靶点的siRNA,采用脂质体法转染人肝癌细胞HepG2,分别用半定量RT-PCR、Western blot技术检测转染后HepG2细胞STAT5A mRNA和蛋白表达的变化,从中筛选出一段干扰效率最显著的siRNA;用该siRNA转染HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果三段STAT5A基因的siRNA均对HepG2细胞中STAT5A mRNA和蛋白表达产生了不同程度的抑制作用,其中以siRNA-3697的干扰效率最高,STAT5A mRNA和蛋白的表达抑制率分别为72.03%和66.27%(P<0.05);转染后1～4 d细胞生长速度减慢、增殖显著抑制(P<0.05);转染后48 h细胞凋亡率为37.33%(P<0.05)。结论成功筛选出针对STAT5A基因有效的siRNA;该siRNA可特异地阻断HepG2细胞STAT5A基因的表达,抑制细胞生长,诱导细胞凋亡。     

白细胞介素-2受体及一氧化氮水平与慢性乙肝病情的关系研究

目的探讨慢性乙型病毒性肝炎患者血清可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R）及一氧化氮（NO）水平与慢性乙肝病情的关系，为判断慢性乙肝病情提供客观参考依据。方法90例慢性乙型肝炎患者按2000年全国病毒性肝炎诊断标准诊断为慢性乙肝轻度35例，慢性乙肝中度32例，慢性乙肝重度23例。以酶联免疫法检测血清sIL-2R水平，同时以硝酸还原酶法检测血清NO水平。结果sIL-2R及NO水平按轻度、中度、重度依次增高。sIL-2R与NO呈正相关。结论血清可溶性白细胞介素-2受体及一氧化氮含量表达与慢性乙肝病情密切相关，联合检测sIL-2K及NO水平可作为判断慢性乙肝病情的客观依据。     

降脂颗粒防治脂肪肝的实验研究

目的　观察降脂颗粒对大鼠脂肪肝的预防和治疗作用。方法　标准SD大鼠给予高脂饲料、乙醇灌胃、CCl4菜籽油溶液注射 ,联合建立复合脂肪肝动物模型[1] 。随机分为 10组 ,A1,A2 为空白对照组 ,B1,B2 为模型对照组 ,C ,D为降脂颗粒大、小剂量预防组 ,E为东宝肝泰预防组 ,F、G为降脂颗粒大、小剂量治疗组 ,H为东宝肝泰治疗组 ,各组给予相应药物灌胃处理 ,A1,B1,C ,D ,E组于实验第 16天 ,A2 ,B2 ,F ,G ,H组于实验第 4 6天处死动物 ,取血及肝组织做肝功能、血脂、肝脏内脂质及病理组织学检查。结果　①C ,D组与B1组比较 ,F ,G组与B2 组比较 ,各项肝功、血脂指标及病理检查结果均有改善 (P均 <0 .0 1)。②C ,D组与E组比较 ,F ,G组与H组比较 ,各项肝功、血脂指标及病理检查结果均无显著性差异 (P均 >0 .0 5 )。结论　降脂颗粒可预防和治疗脂肪肝 ,尤以高剂量预防及治疗组作用显著。     

STAT5A基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡影响的观察

目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,为其作为肝癌基因治疗的新分子靶点提供实验依据,并对RNAi实验方法的优化进行探讨.方法:构建2个针对STAT5A基因不同位点的RNA干扰(RNAi)真核表达载体,为减少脱靶效应和细胞毒性,采用两载体共转染的方法转染人肝癌细胞HepG2,分别采用半定量RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染前后细胞中STAT5A mRNA和蛋白表达的变化;采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:酶切及测序结果显示,STAT5A基因两位点的shRNA表达载体均构建成功;两载体共转染HepG2细胞48 h后,与对照组相比,RT-PCR结果显示实验组细胞中STAT5A mRNA的抑制率约为66％,P＜0.05;蛋白质印迹法检测结果显示,STAT5A蛋白的抑制率约为58％,P＜0.05;同时MTT法显示实验组较对照组在转染后24～96 h内细胞生长速度减慢、增殖抑制明显(P＜0.05),流式细胞仪检测实验组细胞凋亡率为(34.68±0.78)％,明显高于阴性对照组(5.12±1.09)％和空白组(4.75±1.65)％,P＜0.05.结论:成功构建了针对STAT5A基因的RNA干扰真核表达载体,两载体共转染可有效抑制STAT5A基因的表达,并能抑制细胞生长、诱导细胞凋亡.     

降脂颗粒治疗脂肪肝的临床与实验研究

为探讨燥湿化痰、活血化瘀、健脾益气、补肾益肝法在脂肪肝治疗中的作用,以进一步提高中医药治疗脂肪肝的水平,我们研制了降脂颗粒,并于1998年3月～2002年3月进行临床疗效观察及实验研究,现报道如下:     

护肝解毒汤抗自由基肝损伤的实验研究

目的：观察护肝解毒汤对药物性肝损伤致自由基的清除作用。方法：72只Wistrar大鼠随机分为五组，以四氯化碳菜油液建立肝损伤模型，予以灌胃治疗，分别于末次损伤后次日和第三日检测血清及肝匀浆SOD活力和HDA含量。结果：损伤后HDA呈先低后高的变化；三个治疗组SOD活力高十损伤组，MDA含量低于损伤组。结论：四氯化碳致大鼠肝损伤后SOD、HDA水平呈动态变化过程，护肝解毒汤有显著抗脂质过氧化和保肝作用。