消减杂交技术在结核病研究中的应用

消减杂交是20世纪80年代应研究真核生物基因差异表达需要而发展起来的一种基因差异筛选方法.抑制性消减杂交是建立在抑制性PCR基础上的一种高效消减杂交技术,最早应用于真核生物mRNA差异表达的研究中.Akopyants等首次将该方法进行改良并用于细菌基因组比较分析.这两种方法在多个领域得以广泛应用.现就其在结核病研究中的应用作一综述.     

LL-37 抑制结核分枝杆菌感染巨噬细胞炎性因子分泌的研究

目的:探讨LL-37 在感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)的巨噬细胞(Macrophage,M渍)中对炎性因子分泌的影响及其抗炎作用。方法:(1)使用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)将THP-1 细胞诱导分化为具有吞噬作用的巨噬细胞(M渍),用Mtb 感染M渍,构建细胞模型,用不同浓度的LL-37 处理感染Mtb 的巨噬细胞,并设置对照组。(2)实验分组:正常对照组:THP-1+生理盐水; Mtb 组:THP-1+Mtb; Mtb+LL-37 5 μg/ ml 组:THP-1+Mtb+5 μg/ ml LL-37; Mtb+ LL-37 10 μg/ ml 组:THP-1+ Mtb+10μg/ ml LL-37; Mtb+ LL-37 20 μg/ ml 组:THP-1+Mtb+20 μg/ ml LL-37。(3)各组培养6、12、24、48 h 后用RT-PCR 检测促炎因子IL-12p40、TNF-α及抗炎因子IL-4、IL-10 mRNA 的表达;ELISA 测定上清中细胞因子IL-12p40、TNF-α、IL-4、IL-10 的分泌量。结果:与正常对照组相比较,Mtb 感染组各时间段IL-12p40、TNF-α、IL- 及IL-10 的mRNA 表达上调,并且其分泌量显著增加(P<0.05);LL-37 刺激组与Mtb 组相比较,各时间段外源性LL-37 降低促炎因子IL-12 p40、TNF-αmRNA 的表达,IL-12p40、TNF-α分泌下降(P<0.05);而IL-4、IL-10 mRNA 的表达升高,抗炎因子IL-4、IL-10 分泌增加(P<0.05)。结论:外源性LL-37 可抑制Mtb 感染的巨噬细胞炎性细胞因子分泌,其效应与LL-37 的浓度、感染Mtb 的时间相关。本研究为结核病的治疗提供了新的见解。     

Toll样受体在结核分枝杆菌致病机制中的作用研究进展

结核分枝杆菌是肺结核的致病菌,它可寄生在细胞内并长期存活.目前结核杆菌的致病机制及机体对其的免疫反应尚未完全阐明.Toll样受体属于模式识别受体,在结核杆菌宿主防御反应中具有极为重要的作用.Toll样受体作为连接天然免疫与获得性免疫的"桥梁",在机体免疫调节中的作用已愈来愈受关注.关于Toll样受体与结核杆菌的相关研究已成为生命科学领域的热点.     

急性呼吸窘迫综合征机械通气时气道冲洗液的选择

目的：提供适用于急性呼吸窘迫综合征（ARDS）机械通气患者的功能较全面的气道冲洗液。方法：采用理化检测并经配伍试验的方法配制组方便，应用于ARDS患者行机械通气时插管的冲洗。观察组方液对气道吸出物黏度、菌落计数及炎性损伤性因子的影响。结果：100mL冲洗液含N-乙酰半胱氨酸（NAC）600mg、肝素100mg(2mL)、生理盐水50mLl5%NaHCO330mL、10% NaCl17mL、沙丁胺醇雾化溶液1mL，其pH值为7.8，渗透压相当于3.2%NaCl溶液，该组方液定时冲洗气道后可明显降低气道吸出物黏度，降低吸出物中活菌比例、降低中性粒细胞（PMN）膜结合弹力酶表达强度。结论:该组方液冲洗气道无明显副反应，可防止痰痂形成，提高抗生素在气道的杀菌效能并抑制炎性损伤过程，具有应用价值。     

活菌H37Ra与灭活菌H37Rv感染小鼠腹腔巨噬细胞的实验研究

目的:探讨小鼠腹腔接种结核分枝杆菌活菌H37Ra、灭活菌H37Rv后,诱导巨噬细胞免疫物质的表达差异,探讨活菌H37Ra及灭活菌H37Rv作为新的结核候选疫苗的可行性。方法:分别培养BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞,用活菌H37Ra,灭活菌H37Rv感染10小时后用抗酸染色方法,观察各组巨噬细胞吞噬情况并计算吞噬率。将活菌H37Ra、灭活菌H37Rv、生理盐水分别接种BALB/c小鼠腹腔,免疫30天后取小鼠腹腔巨噬细胞,RT-PCR法检测小鼠腹腔巨噬细胞IL-12P40、TNFα-、IFNγ-的基因转录水平;ELISA法检测细胞因子IL-12P40、TNFα-、IFNγ-的表达;Griess法、化学法检测小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO、H2O2水平;流式细胞仪检测IFNγ-诱导的CD40L的变化情况。结果:巨噬细胞对活菌H37Ra和灭活菌H37Rv的吞噬率分别为(55.71±8.42)%、(14.82±2.12)%。与灭活菌相比,活菌H37Ra有更强的被吞噬能力(P<0.01)。活菌H37Ra免疫小鼠腹腔巨噬细胞后能显著诱导巨噬细胞的IL-12P40、TNF及IFNγ-基因的转录;细胞因子IL-12P40、TNFα-、IFNγ-、NO及H2O2高水平分泌;同时活菌H37Ra刺激IFNγ-诱导的巨噬细胞表面CD40L的高表达。结论:活的结核分枝杆菌H37Ra能显著诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生更多的保护性免疫物质,有利于免疫应答,有可能作为新的结核候选疫苗,而灭活菌H37Rv不能显著激活小鼠腹腔巨噬细胞分泌保护性免疫物质,不宜作为新的结核候选疫苗。     

125例老年肺结核误诊原因分析

目的分析老年肺结核误诊原因,以提高诊断水平,减少老年肺结核误诊率。方法对老年肺结核125例误诊病例进行回顾性分析。结果误诊为慢性支气管炎53例,肺炎17例,支气管扩张15例,冠心病7例,肺心病5例,肺癌10例,间质性肺炎4例,发热5例,贫血2例,矽肺2例,其它疾病5例;误诊率为36%。结论医生对老年肺结核缺乏警惕性、老年肺结核临床症状不典型、胸片表现不典型、合并疾病多是老年肺结核误诊的常见原因;全面收集患者临床资料,充分利用相关检查,积极寻求病原学及组织学是减少老年肺结核误诊的关键。     

巨噬细胞与结核分枝杆菌的免疫反应的研究进展

巨噬细胞是结核分枝杆菌在机体内的主要宿主细胞.细胞介导的免疫反应是机体抗结核分枝杆菌的主要免疫保护机制,巨噬细胞可通过吞噬、溶酶体融合,提呈结核分枝杆菌抗原,产生多种细胞因子、反应氧中间产物和反应氮中间产物,以及细胞凋亡等多种途径来杀灭结核分枝杆菌;同时,结核分枝杆菌也可采取各种方式来逃逸巨噬细胞的免疫作用.本文就巨噬细胞与结核分枝杆菌的免疫反应的研究进展作一综述.     

结核分枝杆菌相关毒力基因的研究进展

在结核病的发生过程中,毒力起着重要的作用,因为只有毒力菌株才可致病.结核菌的毒力可以理解为其引起结核病的能力,而致病性与毒力因子总是联系在一起的.结核菌是典型的胞内寄生菌,但只有有毒株才能在细胞内存活和繁殖.毒力因子在毒力株的巨噬细胞复制中起关键作用,目前对毒力相关基因及毒力因子作用机制知之甚少.本文将对几个研究较多的毒力相关基因作一综述.     

维生素D诱导自噬对巨噬细胞清除结核分枝杆菌的作用

目的:探讨维生素D诱导巨噬细胞产生自噬并清除巨噬细胞内结核分枝杆菌(Mtb)的作用。方法:使用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)诱导U937细胞分化使之具有吞噬能力,分化后的U937细胞随机分为阴性对照组、维生素D组、自噬抑制剂(3-MA)+维生素D组、阳性对照(雷帕霉素)组,以Mtb感染U937细胞6 h。感染后第4天,利用半定量RT-PCR检测自噬相关基因ATG5、Beclin-1及LL-37、LC3B mRNA的表达,流式细胞术检测LC3B-Ⅱ+和/或结核分枝杆菌抗原85A+(Ag85A+)的细胞。结果:与对照组相比,维生素D组ATG5、Beclin-1、LL-37、LC3B mRNA的表达增强(P<0.01),LC3B-Ⅱ+-细胞增多,Ag85A+-细胞减少,且LC3B-Ⅱ+-Ag85A--细胞增加(维生素D组38.0%比阴性对照组1.08%)。与维生素D组相比,在自噬抑制剂3-MA+维生素D组中,不但ATG5、Beclin-1、LC3B的mRNA表达受到抑制,LL-37的mRNA表达较维生素D组减少,而且3-MA抑制了细胞LC3B-Ⅱ的表达,同时抑制了1,25(OH)2D3对LC3B-Ⅱ+-Ag85A--细胞增加的作用。结论:维生素D能够诱导巨噬细胞产生自噬作用,并进一步有助于巨噬细胞清除结核分枝杆菌。     

重庆市五家教学医院收治弥漫性肺间质疾病的回顾性分析

目的 分析重庆市弥漫性间质性肺疾病(DILD)住院患者的临床特征.方法 收集2002～2006年重庆市5家教学医院收治住院的DILD病例资料,统计分析DILD住院患者占呼吸内科、全院住院患者的构成比,以及各临床表现、肺功能、血气分析、病理学等检查项目结果 .结果 重庆地区DILD住院患者男女比例约为1.83∶1,平均年龄(61.65±13.31)岁.2002年DILD住院患者占呼吸科住院人数的2.83%0,占全院住院人数0.30‰,2006年分别为8.29%e和0.48%0.影像学以网格状改变为主的占62.2%,以毛玻璃改变为主的占11.3%,伴有蜂窝样改变的占24.5%.47.55%为限制性通气功能障碍,51.05%为混合性通气功能障碍.大多数患者存在低氧血症,动脉血PaO2为(71±25.2)mm Hg.病理学检查以普通型间质性肺炎最为多见,81.82%的患者通过病理学检查资料也不能明确分类.结论 DILD住院患者占呼吸科和医院住院患者构成比均呈上升趋势.确诊需要有经验的临床、放射和病理科医生共同参与.