基于指纹图谱-网络药理学-分子对接技术的知母质量标志物预测分析

目的:预测知母的质量标志物(Q-Marker)。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法建立不同产地知母指纹图谱特征,色谱柱：InertSustain C₁₈(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相：乙腈-水,梯度洗脱;流速：1.0 ml·min^-1;柱温：30℃;进样量：10μl; N₂流速：3 L·min^-1;漂移管温度：100℃。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》,设定时间为平均值±0.5 min,采用Mark峰匹配,建立其HPLC指纹图谱,并进行相似度评价筛选出Q-Marker候选成分;然后对筛选出的Q-Marker候选成分进行网络药理学分析,构建“知母Q-Marker候选成分-靶点-通路”网络,预测知母的皂苷类Q-marker,再采用分子对接方法验证其Q-Marker生物活性。结果:10批不同产地的知母饮片中共筛选出6个Q-Marker活性成分,分别为芒果苷、知母皂苷E、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷B-Ⅲ、知母皂苷A2、知母皂苷A3,进一步网络药...     

改良型TAT-凋亡素体外抗人膀胱肿瘤活性的研究

目的：探讨改良型TAT-凋亡素 （TAT-VP3） 融合基因在不同人膀胱癌细胞中的表达及诱导凋亡的效应。方法： 利用改良型TAT-VP3原核表达载体pGEX-6p-1-TAT-VP3构建真核表达载体PcDNA3-TAT-VP3, 经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切鉴定和基因测序无误后采用脂质体介导的基因转染法转染人膀胱癌BIU-87及EJ细胞, 利用RT-PCR技术检测改良型TAT-VP3基因在细胞中的表达状况。通过透射电镜扫描观察转染后不同时段肿瘤细胞的超微结构变化, MTT法检测转染重组质粒后对人膀胱癌细胞的增殖活性的影响, 流式细胞术TUNAL法检测转染重组质粒24、 48、 72h后BIU-87及EJ细胞的凋亡率, 对实验结果进行统计学分析。结果： 成功构建重组质粒PcDNA3-TAT-VP3并经测序无误, 转染人膀胱癌细胞后的RT-PCR结果证实改良型TAT-VP3基因在人膀胱癌细胞中获得表达。透射电镜观察到BIU-87及EJ细胞凋亡早期染色质聚集, 线粒体固缩, 凋亡中晚期核固缩及凋亡小体等超微形态学改变。MTT法检测结果显示转染重组质粒PcDNA3-TAT-VP3后的BIU-87及EJ细胞增殖活性明显下降 （P<0.01）。流式细胞术TUNAL法检测显示BIU-87及EJ细胞发生早期凋亡, 其凋亡率随时间的推移呈逐渐上升趋势, 转染72 h后BIU-87和EJ细胞的凋亡率分别为 （30.44±1.47） %、（42.27±2.66） %, 与对照组比较差异有统计学意义 （P<0.01）。结论： 改良型TAT-VP3基因的表达能早期、 高效地诱导不同人膀胱癌细胞发生凋亡, 为纯化改良型TAT-VP3融合蛋白以及将其应用于膀胱灌注治疗膀胱转移肿瘤的研究奠定实验基础。     

基于网络药理学和动物实验探讨黄芪葛根汤治疗糖尿病肾病的作用

目的 基于网络药理学和动物实验探讨黄芪葛根汤治疗糖尿病肾病的作用。方法 分别采用GEO数据库与TCMSP、TCMID、TCMIP数据库筛选DN差异基因和复方有效成分与靶点，构建调控网络，筛选核心基因，进行KEGG和GO富集分析。将大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸二甲双胍组(0.15 g/kg)和黄芪葛根汤低、中、高剂量组(2.5、5、10 g/kg),采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素腹腔注射建立DN大鼠模型，并分别给予相应药物干预。给药8周后测定FBG、BUN、Scr和UA水平，HE染色观察肾组织形态学，ELISA法检测TNF-α、AGEs、VCAM-1、MCP-1水平及肾组织VCAM-1、NF-κB p65水平，免疫组化法检测RAGE蛋白阳性表达率。结果 网络药理学获得黄芪葛根汤活性成分23个，靶点191个；DN差异基因638个；复方与疾病交集基因21个；PPI核心基因为CASP3、VEGFA等；涉及AGE-RAGE通路、HIF-1等信号通路。动物实验显示，与模型组比较，黄芪葛根汤高剂量组大鼠FBG,血清BUN、Scr、UA、AGEs、TNF-α、VCAM-1、MCP-1水平，肾组织V...     

左归降糖清肝方通过改善肠道菌群稳态促进2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病小鼠肠黏膜屏障的修复

研究左归降糖清肝方对高脂饮食诱导的2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的肠道菌群稳态调节及肠黏膜屏障的修复作用。以MKR转基因小鼠(T2DM小鼠)为研究对象，使用高脂饮食(HFD)来诱导NAFLD,然后用左归降糖清肝方(7.5、15 g·kg^-1)、二甲双胍(0.067 g·kg^-1)对小鼠进行8周的治疗。取血清进行肝功能、甘油三酯的检测分析；肝脏组织行HE、Masson染色，肠组织进行HE、AB-PAS染色；利用16S rRNA测序观察各组小鼠肠道菌群的变化；采用免疫荧光、PCR法检测小鼠肠道黏膜屏障关键蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1及其基因(mRNA)的表达水平。结果显示，左归降糖清肝方可改善T2DM合并NAFLD小鼠体质量，降低肝脏指数，下调肝功能及血脂异常的血清生物标志物ALT、AST、TG,增加胰岛素敏感性，并改善葡萄糖耐受的情况。16S rRNA测序结果表明，左归降糖清肝方的治疗改变了肠道微生物群的组成和丰度，增加了Muribaculaceae、Lactobacillaceae、Lacto...     

甘油三酯-葡萄糖指数与胆石病患病风险关联——多中心健康体检人群研究

目的 探索甘油三酯-葡萄糖指数（triglyceride-glucose,TyG index）与胆石病（gallstone disease, GSD)患病风险之间的关联性。方法 基于全国多中心健康体检人群队列中来自天津、山东、重庆地区5家医院2015—2020年期间参加健康体检人群，收集研究对象健康体检人口学、血生化检测、腹部超声检查结果。利用空腹血糖水平和空腹甘油三酯水平计算TyG指数，并利用四分位数对指标进行描述。在每家中心利用多因素logistic回归探讨TyG指数与胆石病患病风险之间的关联性，最后利用meta分析方法对5家中心的研究结果进行合并。结果 本研究共纳入585 071名研究对象，其中41 852人被诊断为胆石病。各中心合并研究结果汇总分析显示，与Q25相比，Q50、Q75、Q100人群胆结石患病风险分别为2.66(95%CI:0.78～9.06; P=0.117)、2.10(95%CI:1.95～2.26; P<0.001)和2.46(95%CI:2.08～2.92; P<0.001)。TyG指数每上升1个单位和每改变1个标准差，胆石症患病风险分别上升0....     

温胆汤对改善慢粒并发精神分裂症患者化疗后不良反应及精神症状的疗效研究

目的 探讨温胆汤对改善慢性粒细胞性白血病(慢粒)并发精神分裂症患者化疗后不良反应及精神症状改良方面的效果。方法 回顾性分析了2018年7月—2021年9月的5例慢粒患者，在服药治疗期间被诊断为精神分裂症。患者在接受羟基脲治疗慢粒的过程中，服用利培酮控制精神症状，由于不良反应较大，采用温胆汤进行治疗，期间监测病人的血相变化，对患者不良反应利用量化表进行评分，以阳性与阴性症状量表(PANSS)评分作为患者精神状态的评估标准。结果 服用温胆汤后，患者由于服药产生的恶心、干呕、头痛等症状明显减轻，量化评分下降明显。在相同利培酮服用量的情况下，患者的精神症状有进一步改善，PANSS评分有继续下降的趋势，在利培酮药量减半的情况下，服用温胆汤也可以较好地维持患者的精神症状。结论 温胆汤联合羟基脲，对于慢粒并发精神分裂症患者由于服药产生的不良反应具有很好的疗效，可减少利培酮的用药量，提高患者的生活质量。     

基于Wnt/β-catenin通路探讨尪痹片促进去势后胶原诱导性关节炎大鼠骨形成的机制

目的 基于果蝇无翅基因/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路，研究尪痹片（WBT）干预去势后胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的骨形成机制。方法 48只雌性SD大鼠经随机数字表法分为空白对照组、去势组、CIA组、去势CIA组、去势+WBT组、CIA+WBT组、CIA+甲氨蝶呤（MTX）组、去势CIA+WBT组，每组6只。去势法制备肾虚证模型，CIA法制备类风湿关节炎模型，WBT采用每日0.63 g/kg灌胃，MTX采用每周1.05 mg/kg结合生理盐水灌胃，其余组均予生理盐水灌胃，56日后取材。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）水平，蛋白质免疫印迹（Western Blot）检测Wnt3a、Wnt10b、β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、Dickkopf相关蛋白-1 (DKK-1)、Runt相关转录核心因子2(Runx2)、碱性磷酸酶（ALP）、核酸内切酶Dicer蛋白表达量，逆转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测DKK-1、微小RNA(miR)-335-5p mRNA表达量。结果 去势后大鼠逐渐...