中药EGb_(24/6)对鼠坐骨神经损伤后神经元保护的实验研究

周围神经损伤后神经元的变性、死亡对周围神经再生及功能的恢复有着重大的影响[1] 。如何保护神经损伤后的神经元 ,减少其死亡 ,促进神经再生及功能恢复已引起重视。中药ＥＧｂ(ＥｘｔｒａｃｔｏｆＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ)通过对抗脑缺血引起的谷胺酸毒性作用 ,来保护神经元[2 ] 。我们用ＥＧｂ对神经损伤后神经元的变化进行了观察。一、材料与方法1.动物和分组 :雄性ＳＤ大鼠 18只 ,体重 180～ 2 2 0ｇ(鼠龄约 8～ 9周 )分成损伤对照组和实验组即ＥＧｂ2 4 / 6组 (ＥＧｂ2 4 / 6由美国ＰＨＡＲＭＡＮＥＸ ,ＩＮＣ公司提供 )。2 .手术方法…     

电刺激对失神经支配骨骼肌超微结构及酶活性的影响

目的研究电刺激对失神经支配骨骼肌萎缩进程的影响.方法选用SD大鼠,建立双下肢失神经支配腓肠肌的实验模型,电刺激右下肢腓肠肌,观察肌细胞直径、截面积、超微结构、Na,K-ATP酶和Ca-ATP酶活性变化.结果电刺激能延缓肌细胞的线粒体、肌质网退变.肌细胞直径及截面积,电刺激侧较对照侧肢体下降速度明显减慢;Na,K-ATP酶活性下降速度,电刺激侧较对照侧慢15.59%和27.38%;Ca-ATP酶活性下降速度,电刺激侧较对照侧慢4.83%和21.64%.结论电刺激对失神经支配骨骼肌具有保护作用,是延缓肌肉萎缩的有效方法.     

脑源性神经营养因子Va166Met多态性与脑出血的关联分析

目的探讨脑源性神经营养因子Va166Met多态性与脑出血的关系。方法采用限制性内切酶片段长度多态性技术检测脑源性神经营养因子Va166Met多态性,在110例脑出血患者和101名健康对照组中的分布;比较病例组、对照组基因型、等位基因分布差异。结果（1）脑出血组和对照组A基因型分布频率分别为0．40和0．20,显著高于对照组,差异具有统计学意义（χ^2=13．81,P=O．001）;（2）两组等位基因分布频率差异也具有统计学意义,差异具有统计学意义（χ^2=13．12,P=0．000）。结论脑源性神经营养因子Va166Met多态性的A等位基因同脑出血相关,可能该病的易感基因。     

颈7神经不同平面切断对神经元影响的实验研究

目的 研究颈7神经不同平面切断及不同时期对神经元逆行性退变的影响,为临床选择合适的时间和方法保护受损神经元提供实验依据.方法 36只SD雌性大鼠随机分为三组:对照组、神经根部切断组和神经支部切断组.利用True Blue逆行示踪技术对各组大鼠背根神经节感觉神经元和脊髓前角运动神经元精确计数,并利用神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)免疫荧光双标技术检验标记神经元的活性.结果 术后1周,神经根部切断组和神经支部切断组较对照组无明显的感觉和运动神经元数量变化.术后16周,神经根部切断组和神经支部切断组较对照组感觉和运动神经元减少,其中神经根部切断组较神经支部切断组减少更明显(P＜0.05).且各组True Blue标记神经元全部被NSE免疫荧光双标.结论 颈7神经根部切断和神经支部切断均发生感觉和运动神经元逆行性退变,且不同平面切断对神经元退变的影响有显著性差异.提示臂丛神经根性损伤后早期修复受损神经有利于防止神经元退变.     

激活态雪旺细胞信号转导通路的初步研究

目的培养、鉴定激活态的雪旺细胞，探索激活态雪旺细胞信号转导通路。方法用改良成年sD大鼠雪旺细胞培养法激活态的雪旺细胞，S-100染色鉴定，Western Blot法测定ERK1／2水平，初步探索激活态雪旺细胞的信号转导通路。结果光镜下激活态雪旺细胞和正常态的雪旺细胞形态上无差异，S-100染色均为阳性，Western Blot法检测细胞内的ERK1／2水平无明显的差异，但P-ERK1／2水平两者差异有统计学意义（P〈0．01）。这可能是雪旺细胞被激活的一个关键。结论激活态雪旺细胞和正常态雪旺细胞是同一细胞的二种不同存在的状态，有活性的P-ERK1／2水平的升高可能是雪旺细胞激活的关键。对于激活态雪旺细胞完整的信号转导通路尚需要进一步研究。     

银杏酮酯对大鼠坐骨神经损伤后神经生长因子基因表达的影响

目的 观察银杏酮酯（EGb50）对大鼠坐骨神经损伤后神经生长因子（NGF）mRNA表达的影响。方法 取SD大鼠78只，其中72只切断右侧坐骨神经并缝合，随机分成损伤对照组与实验组，另6只为正常对照组。实验组给予EGb50200mg／kg／d溶于1．0ml生理盐水中灌胃，损伤对照组每天给予生理盐水1．0ml灌胃，正常对照组不作任何处理。分别于术后1、3、7、14、21及28d取吻合口远段的神经、相应节段的脊神经节及脊髓，采用逆转录-多聚酶链反应技术检测所取组织中NGFmRNA的表达水平。结果 实验组坐骨神经中NGFmRNA的表达在术后7、14和21d明显高于对照组（P〈0．05）。术后7d和14d，实验组脊神经节及脊髓中NGFmRNA的表达高于对照组（P〈0．05）。结论 大鼠坐骨神经损伤后用银杏酮酯治疗，在早期可促使坐骨神经及相应节段脊神经节和脊髓组织中的NGFmRNA的表达增加。     

激活态许旺细胞在胶原几丁糖膜上的生长规律

背景：新型组织工程材料和许旺细胞扩增后置入生物合成管内去修复周围神经的缺损，是人工生物材料管的两大进展。 目的：以胶原几丁糖为支架，以激活态的许旺细胞为种子细胞，观察二者的亲和性以及激活态的许旺细胞在胶原几丁糖膜上的生长规律，为人工神经的预构做准备。 设计：开放性实验。 单位：复旦大学附属华山医院手外科。 材料：实验于2003-07／2003-12在卫生部手功能重建重点实验室完成。选取清洁级雄性SD大鼠4只。胶原几丁糖膜（上海其胜生物材料技术研究所提供），许旺细胞激活液（自制）。 方法：大鼠麻醉后坐骨神经切断预变性7d，再次麻醉后引颈处死，迅速切取双侧坐骨神经，置于含青霉素和链霉素的D—HANK’S液中，剔除神经外膜，剪碎成1min的小段，移入盛有质量浓度为5g／L的胰蛋白酶和0．6g／L的胶原酶的离心管中，每2mL液体中加入激活液0．5mL，复合酶分步消化法获激活态许旺细胞，以浓度为2&;#215;10^7 L^-1激活态的许旺细胞200μL接种于胶原几丁糖膜上和培养皿上，2周后通过相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长情况，S-100染色鉴定细胞的纯化程度。 主要观察指标：①绘制细胞生长曲线，确定体外倍增时间。②激活态许旺细胞倒置相差显微镜下观察结果。③激活态许旺细胞接种于胶原几丁糖膜上扫描电镜观察结果。 结果：①体外倍增时间的确定：激活态的许旺细胞接种于胶原几丁糖膜和培养皿上时的浓度均是2&;#215;10^7 L^-1，2周后细胞浓度分别达到30&;#215;10^7 L^-1和20&;#215;10^7 L^-1。根据DT=（t-t0）lg 2／（lgn-lgno）算出激活态许旺细胞在胶原几丁糖膜上的倍增时间为4d。②激活态许旺细胞倒置相差显微镜下观察结果：接种于培养皿上的激活态许旺细胞24h后大多数由圆球形变成长梭形，有突起，多为双极，也有的呈三极状；接种于膜上的激活态许旺外形上和培养皿中无明显差异，但膜上的激活态许旺细胞在相差显微镜下犹如“刻在沙地上的文字”一般。S-100染色见激活态许旺细胞成棕色，纯度达95％以上。③激活态许旺细胞接种于胶原几丁糖膜上扫描电镜观察结果：激活态许旺细胞多数生长于胶原几丁糖膜的凹陷中或紧贴膜表面，呈有规律的首尾相接贴附于膜上，胞体呈纺锤形，直径在4-6μm，长度为60-80μm，细胞呈梭形，有许多细小分枝。1周时膜的形态仍然完整。 结论：胶原几丁糖膜和高度纯化的激活态许旺细胞有良好的亲和性，以其为工艺材料制成的组织工程支架很有可能在促进周围神经再生中发挥优势作用。     

不同部位骨骼肌失神经支配后超微结构变化的实验研究

目的：探讨长期失神经支配后萎缩骨骼肌神经修复手术疗效欠佳的机制。方法：12例臂丛神经损伤后1、2、3、6、12和18个月患者，术中切取小指展肌和肱二头肌的失神经骨骼肌，以相同部位的正常骨骼肌作对照，观察失神经骨骼肌超微结构和计数肌卫星细胞数量变化。结果：失神经支配后2个月，骨骼肌细胞的超微结构基本正常，肌纤维周围无明显增生的胶原纤维，可见到运动终板，肌卫星细胞数量多；6个月，肌丝断裂，排列紊乱现象明显增多，细胞核体积变小，染色加深，细胞核固缩，肌纤维周边出现较多的成纤维细胞和脂肪细胞以及增生的胶原纤维；12个月后，未见类似运动终板的结构，肌卫星细胞体积缩小，数量减少，小指展肌较肱二头肌中肌卫星细胞含量下降速度快。结论：失神经经支配晚期骨骼肌纤维中运动终板消失和胶原增生以及肌卫星细胞含量的迅速下降可能是影响疗效的主要因素之一。     

肢体制动对失神经支配骨骼肌超微结构及酶组织化学影响

目的：研究肢体制动对失神经支配骨骼肌超微结构及酶组织化学影响。方法：用SD大鼠，建立左下肢失神经支配腓肠肌及右下肢制动加失神经支配腓肠肌的实验模型，观察肌细胞直径、截面积，超微结构及Na^ 、K^ —ATP酶和Ca^2 -ATP酶活性变化。结果：制动例肌细胞直径及截面积较对照例下降速度明显加快；肢体制动加速了肌细胞的线粒体，肌质网退变Na^ 、K^ —ATP酶活性制动例较对照例下降速度快18．24％；而Ca^2 -ATP酶活性在术后2周无明显差异，术后4周制动例较对照例下降速度快13．99％。结论：肢体制动加速了失神经支配骨骼肌萎缩的发生与发展。因此，临床上神经损伤合并有肌膜、骨折等复合损伤情况下，肢体制动范围及时间尽可能予以减少。     

比较经胸与锁骨上膈神经移位治疗臂丛损伤疗效的实验研究

目的　比较经胸膈神经移位与锁骨上移位治疗臂丛损伤的手术疗效。方法　SD大鼠 48只 ,按手术不同随机分为两组 ,每组 2 4只。实验组 :开胸切断左侧膈神经远端后从第二肋间抽出 ,与左侧正中神经的指深屈肌肌支缝接。对照组 :锁骨上切断左侧膈神经 ,用同侧隐神经桥接后与左侧正中神经的指深屈肌肌支缝合。术后 1、2、3、4个月行肉眼观察并作肌电、组织学检测和图像分析。结果　实验组大鼠于术后 2 1～ 3 5d起出现与呼吸同步的屈腕、屈指动作 ,而对照组则在术后 3 6～ 49d出现。实验组指深屈肌的复合运动动作电位 (CMAP)潜伏期的延迟率和波幅恢复率均优于对照组 ,差异有显著性意义(F =6.84、3 2 .43 ,P <0 .0 5、 <0 .0 1)。肌肉截面积恢复率、有髓神经纤维通过率和有髓神经纤维截面积 ,实验组均优于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　经胸切取膈神经移位的疗效优于锁骨上切取膈神经移位治疗臂丛神经损伤