小肠缺血再灌注后氧自由基和肝超微结构改变及凋亡相关基因的表达

目的:研究大鼠小肠缺血再灌注(I/R)后血中氧自由基的改变以及肝组织中bax、bcl-2、p53的表达及肝组织超微结构的变化,以探讨小肠I/R后肝绢织的损伤及其机制.方法:建立小肠I/R模型,分对照组、I/R后0 min、30 min、1 h、2 h、1 d、3 d及7 d共8组,于各时点检测血中一氧化氮(NO)和超氧化物岐化酶(SOD)的浓度,用免疫组织化学SP法观察肝组织中bax、bcl-2及p53的表达情况,透射电镜观察肝组织细胞超微结构变化.结果:大鼠小肠I/R后NO浓度在冉灌注0 min时升高,至冉灌注2 h时明显降低.其后又持续升高,至冉灌注7 d时达高峰.SOD的浓度变化则相反.再灌注0 min时肝组织中bax、bcl-2及p53阳性细胞率增高,再灌注30 min时阳性细胞率升高更为明显,但bcl-2表达高于bax,二者差别显著(P＜0.01).再灌注2 h时3种基因均有所降低,其后又开始升高,至再灌注7 d时阳性细胞率达高峰.bax表达明显高于bcl-2.二者差别显著(P＜0.01).透射电镜显示肝组织细胞超微结构损伤改变.结论:血中NO和SOD浓度的变化及肝组织中超微结构的改变表明,小肠I/R可引起肝组织细胞凋亡和损伤;而I/R后bax、bcl-2及p53阳性细胞在肝组织中的表达明显改变,可能与引起细胞凋亡和损伤有关.     

酪氨酸激酶受体B在膀胱移行细胞癌组织中的表达

目的:用免疫组化技术探讨酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase B,TrkB)在膀胱移行上皮癌(transi-tional cell carcinoma of bladder,TCCB)中的表达水平和与TCCB病理分级、临床病理分期及预后的相关性。方法:选取移行细胞癌标本60例,16例正常膀胱黏膜作为对照,应用免疫组织化学(S-P法)研究TrkB的表达情况,对患者进行随访,随访6-36个月,对患者术后生存时间进行分析。结果:在所选的60例TCCB中,TrkB的阳性率高于正常对照组(P<0.05)。在低分化及浸润性TCCB中,TrkB的表达显著高于高分化及浅表的TCCB。在复发病例中,TrkB的阳性率高于初发病例。结论:TrkB很可能是TCCB发病过程中起重要作用的分子,并有可能作为判断预后的肿瘤标志物。     

抑癌候选基因Ndrg2在结直肠癌组织中的表达特点及意义

目的 探讨抑癌候选基因Ndrg2在不同分化级别结直肠癌组织中的表达特点,分析其调控结直肠癌细胞分化的意义.方法 收集50例不同分化级别结直肠癌组织标本,分别通过免疫组织化学染色及蛋白印迹分析检测Ndrg2的表达;以150点结直肠癌组织芯片大样本分析Ndrg2的表达特点.结合组织芯片相关病例信息进行统计学分析.结果 32例结直肠癌组织Ndrg2表达显著低于其自身癌旁组织及正常组织,癌旁组织中的表达也显著低于正常组织中的表达.组织芯片统计分析显示,不同分化程度结直肠癌组织Ndrg2的表达差异有统计学意义(P=0.005);而Ndrg2表达与患者的年龄、性别、肿瘤部位、结直肠癌浸润深度、淋巴转移及UICC分期无关.结论 Ndrg2可能参与调控结直肠癌细胞的分化过程.     

大鼠小肠转化生长因子β1重组腺病毒载体的构建和表达

目的 构建可调控性大鼠小肠TGF-β1表达的重组腺病毒载体.方法 按RNA提取试剂(TRIzol Reagent)说明书步骤从大鼠小肠组织抽提总RNA,克隆TGF-β1基因;经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接,鉴定后在HEK293细胞包装.获得高滴度病毒后,取上清检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,观察目的 基因的表达情况.结果 扩增出与预期大小一致的cDNA片段,其中TGF-β1大小为1173 bp;其基因序列与GenBank登录的大鼠TGF-β1基因序列完全一致.重组TGF-β1腺病毒获得的滴度约为1012 PFU/ml;病毒包装后绿色荧光蛋白表达的检测结果显示,绿色荧光蛋白随着时间的延长,表达量逐渐增高;与预期结果一致.结论 构建的可调控性大鼠小肠TGF-β1重组腺病毒载体得到了正确表达,为进一步研究TGF-β1干扰树突状细胞分化成熟诱导小肠移植免疫耐受提供了依据.     

多基因编辑猪-猴心脏、肝脏、肾脏移植临床前研究初步报道

目的  探讨目前国际上基因改造程度最大的基因编辑猪在临床前异种器官移植中的应用前景。方法  将1只猪内源性逆转录病毒（PERV）敲除联合3种主要异种抗原基因敲除以及抑制补体活化、调节凝血紊乱、抗炎抗吞噬的9种人源化基因转入猪（PERV-KO/3-KO/9-TG）作为供体,获取其心脏、肝脏和肾脏,分别移植给3只恒河猴受体,建立猪-猴异种器官移植临床前研究模型。观察血流重建后各移植物的功能状态并总结受体存活情况;监测移植物的血流动力学情况;比较各器官移植受体的血液学指标变化;观察移植物组织病理学表现。结果  血流重建后各移植器官颜色红润、质地柔软、血流灌注状态良好。术后1 d,移植心脏、肝脏和肾脏均表现为动、静脉血流状态充盈,灌注情况良好。心脏、肝脏和肾脏移植受体的术后存活时间分别为7 d、26 d和1 d。心脏移植受体术后1 d肌酸激酶、肌酸激酶同工酶以及乳酸脱氢酶水平均升高,至术后6 d逐渐恢复至接近正常水平。术后7 d各项指标均急剧升高。肝脏移植受体术后2 d天冬氨酸转氨酶水平升高,术后10 d转氨酶基本恢复正常,但总胆红素持续升高。术后12 d天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶水平均出现升高,至术后15 d达到高峰。肾脏移植受体术后1 d出现轻微蛋白尿,后因突发严重心律失常死亡。组织病理学显示心脏和肾脏移植物组织结构接近正常,移植肝脏表现为片状坏死,肝组织结构出现紊乱,并伴有炎症损伤、间质出血和血栓性微血管病形成。结论  PERV-KO/3-KO/9-TG猪在克服超急性排斥反应、缓解体液性排斥反应及凝血紊乱方面具有一定优势,但其能否作为临床异种器官移植潜在供体需进一步评估。     

可切除胃癌患者脉管侵犯的危险因素分析

目的分析可切除胃癌患者的临床病理特征,探讨其发生脉管转移的相关危险因素及对患者预后的影响。方法回顾性分析接受手术切除的1 077例Ⅰ~Ⅲ期胃癌患者资料,根据是否发生脉管转移分为LVI阳性组(672例)与LVI阴性组(405例)。Logistic单因素和多因素分析患者临床病理特征与LVI的关系。利用生存分析研究Ⅰ期胃癌患者脉管侵犯与生存率之间的关系。结果单因素分析结果显示,肿瘤大小、分化类型、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、Lauren分型、神经侵犯以及CEA、CA125、CA199的升高是发生脉管侵犯的危险因素(P<0.05)。多因素分析结果显示,肿瘤分化不良、浸润程度深、有淋巴结转移、侵犯神经、CA724升高是发生脉管侵犯的独立风险因素。有脉管侵犯的Ⅰ期胃癌患者5年生存率明显低于无脉管侵犯的患者,两者差异有统计学意义(P<0.01)。结论肿瘤分化不良、浸润程度深、有淋巴结转移、侵犯神经、CA724升高的胃癌患者更容易发生脉管侵犯。对于有可能发生脉管侵犯的Ⅰ期胃癌患者,应采取更积极的治疗手段。     

大鼠小肠转化生长因子β1重组腺病毒载体的构建和表达

目的构建可调控性大鼠小肠TGF-β1表达的重组腺病毒载体。方法按RNA提取试剂（TRIzol Reagent）说明书步骤从大鼠小肠组织抽提总RNA，克隆TGF-β1基因；经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接，鉴定后在HEK293细胞包装。获得高滴度病毒后。取上清检测绿色荧光蛋白（GFP）的表达，观察目的基因的表达情况。结果扩增出与预期大小一致的cDNA片段，其中TGF-β1大小为1173bp；其基因序列与GenBank登录的大鼠TGF-β1基因序列完全一致。重组TGF-β1腺病毒获得的滴度约为10nPFU／ml；病毒包装后绿色荧光蛋白表达的检测结果显示，绿色荧光蛋白随着时间的延长，表达量逐渐增高；与预期结果一致。结论构建的可调控性大鼠小肠TGF-β1重组腺病毒载体得到了正确表达，为进一步研究TGF-β1干扰树突状细胞分化成熟诱导小肠移植免疫耐受提供了依据。     

腹腔镜辅助胃癌D2根治性全胃切除术

目的 探讨腹腔镜辅助下D2淋巴结清扫全胃切除术的手术要点.方法根据我院2005年7月至2007年4月期间61例腹腔镜辅助下D2淋巴结清扫全胃切除术患者的临床资料,对腹腔镜辅助下D2淋巴结清扫全胃切除的手术要点进行归纳分析. 结果 本组61例接受腹腔镜辅助下D2淋巴结清扫全胃切除术的患者均无中转开腹,无手术死亡,无严重的手术并发症.手术中应着重遵循以下几点:(1)避免损伤横结肠;(2)避免损伤胰头下缘;(3)先离断胃左静脉,清扫完第7、8a、9、11p组淋巴结后,最后离断胃左动脉;(4)准确无误离断胃右动脉;(5)避免清扫腹腔动脉旁淋巴结时出血;(6)避免分离脾胃韧带时出血;(7)找对间隙,分离贲门及胃底.结论了解进展期腹腔镜辅助胃癌D2淋巴结清扫全胃切除的手术要点,对顺利开展腹腔镜辅助下胃癌D2淋巴结清扫全胃切除术有益.     

会阴疝2例报道

内脏自盆腔底部的肌肉与筋膜间脱出称为会阴疝，依其疝内容物脱出的部位对会阴横肌的关系，可分为前会阴疝与后会阴疝两种，临床极为少见，女性多于男性，近年我院收治2例报道如下：     

大鼠小肠移植后LFA-1的表达和FK506的抑制作用

目的　探讨大鼠移植小肠组织内淋巴细胞相关抗原- 1(L FA- 1)的异常表达与急性排斥反应之间的关系 ,及FK5 0 6对其的抑制作用 .方法　选用近交系封闭群 SD和Wistar/ A大鼠进行全小肠异位移植 .实验分 4组 :非手术对照组 (Wistar/ A) ;同基因移植组 (Wistar/ A→ Wistar/ A) ;异基因移植组 (SD→Wistar/ A) ;异基因移植加用 FK5 0 6治疗组[SD→ Wistar/ A+FK5 0 6 (2 mg· Kg- 1 · d- 1 ,im) ],每组 18个样本 .分别于术后 3,5 ,7d采集移植小肠标本进行组织病理学和免疫组织化学检查 .结果　异基因移植组肠组织中L FA- 1表达增高 ,与相应对照组比较差异显著 (P<0 .0 5 ) ;检测 L FA- 1可以比组织病理切片 HE染色早 2～ 3d发现排斥反应 ;经 FK5 0 6治疗组中 L FA- 1表达最弱 .结论　 L FA- 1的表达水平和排斥反应的发生、发展有关 ;FK5 0 6可以明显地抑制 L FA- 1的表达