BBN诱发PLCε基因敲除小鼠膀胱癌发生过程中病变细胞超微结构改变

目的 动态观察诱癌剂N-丁基-N2(4-羟丁基)亚硝胺(BBN)诱发磷脂酶Cε(PLCCε)基因正常(PLCε+/+)小鼠和PLCCε基因敲除(PLCCε+)小鼠膀胱肿瘤超微结构发生发展的过程,研究PLCε在膀胱肿瘤形成中的作用.方法 PLCε+/+和PLCε-/-小鼠各72只随机分成2组,分别给予BBN和自来水喂饲,实验周期为18W,按计划处死大鼠,在电子显微镜下观察不同阶段动物膀胱癌的发生情况.结果 PLCε+/+小鼠和PLCε-/-小鼠膀胱癌的发生经历了3个阶段的形态变化过程:(1)上皮增生期;(2)乳头状瘤形成期;(3)癌变期.电镜显示的各阶段超微结构变化,以膀胱黏膜移行上皮表层细胞的变化最具有形态学意义,其中移行上皮非对称性单位膜的改变、多形性微绒毛形成、梭形小泡形成、微丝及连接复合体减少所致的壳层丧失,胞浆内溶酶体增多及印戒细胞形成、核周纤维层不规则或消失是癌变的重要依据,因此可作为膀胱黏膜上皮早期癌变的超微结构学标志.结论 PLCε-/-鼠的肿瘤形成时间迟于PLCε+/+小鼠,肿瘤发生率也低于PLCε+/+小鼠提示敲除PLCe基因可以抑制膀胱肿瘤的形成.     

PLCε基因敲除小鼠微卫星DNA遗传监测分析

目的利用多态性微卫星DNA位点分析PLCε基因敲除小鼠的遗传特性。方法用所筛选的15个微卫星DNA位点对28只PLCε基因敲除小鼠的DNA进行了PCR扩增,通过基因片段大小来分析群体的遗传多样性。结果 13个微卫星DNA位点中(D1Mit365、D3Mit51、D4Mit235、D6Mit102、D7Mit281、D8Mit113、D9Mit23、D10Mit180、D13Mit88、D16Mit145、D17Mit36、D18Mit94、D19Mit97)每个位点的28只小鼠DNA片段泳动距离一致,呈现单态性,表明该群体符合近交系的遗传特性;而利用Dq(敲基因型)和Dy(野生型)两个位点对28只小鼠的PCR扩增结果进行了鉴别分析,其中敲除基因型小鼠为6只;野生型为7只;杂合型为15只。结论利用微卫星标记技术可以对群体进行遗传质量监测,并能有效地鉴别不同的基因型,为小鼠的遗传质量监测提供了一种可行的方法。     

非气腹无腹壁辅助切口完全腹腔镜直肠癌全直肠系膜切除术35例

目的：探讨非气腹无腹壁辅助切口完全腹腔镜直肠癌全直肠系膜切除术的临床应用价值。方法2010年2月-2013年10月对35例直肠癌行非气腹无腹壁辅助切口完全腹腔镜全直肠系膜切除术。在脐上做1．5-2．0 cm切口,置入腹腔镜后在脐下2 cm、耻骨上5 cm各平行横向置入钢针进行悬吊,用固定于手术床左侧的悬吊装置提拉腹壁,显露手术操作区域。将吻合器钉座自肛门利用引导丝置入肿瘤近侧结肠,自结肠壁戳孔引出吻合器钉座拉杆,腹腔镜下切割闭合器离断距离钉座3 cm结肠,远侧带瘤肠管内翻经肛门拖出、切除,残端缝合后还纳,自肛门插入吻合器杆,腹腔镜下行结直肠或结肠肛管吻合。结果35例手术均成功,无中转开腹。手术时间150-230 min,平均180 min;术中出血量40-110 ml,平均55 ml。术后30-50 h,平均48 h胃肠功能恢复。术后住院5-8 d,平均6 d。术后病理：高分化腺癌12例,中分化腺癌16例,低分化腺癌7例,远近切缘均无肿瘤残留。35例随访7-51个月,平均21个月,无明显排尿困难和性功能障碍,排便习惯正常,1-2次/d,28例CT、MRI检查无复发和转移,trocar口无肿瘤种植,无肠梗阻发生。结论非气腹无腹壁辅助切口完全腹腔镜直肠癌全直肠系膜切除术避免气腹对人体血流动力学的影响,无腹壁辅助切口,是一种安全、可行、经济的手术方法,值得临床推广。     

水芹总酚酸抗四氯化碳所致肝纤维化作用的实验研究

目的探讨水芹总酚酸对四氯化碳所致大鼠慢性肝纤维化模型的保肝和抗肝纤维化作用及其可能机制。方法采用四氯化碳复制慢性肝损伤动物模型（40%四氯化碳橄榄油溶液,皮下注射,首次剂量按0.5ml/100g,以后按0.3ml/100g体质量,3天1次,共42d）。自造模之日开始,灌胃给药,1次/d,连续42d。末次给药后禁食24h,取大鼠血和肝脏,检测血清肝功能（ALT、AST、ALB、ALP、TP、ChE、LDH）指标、肝纤维化指标（HA、LN、Ⅲ-C、Ⅳ-C）和肝组织中SOD活力与MDA含量及免疫组化法测α-SMA、TGF-β1、TIMP-1的表达量和光镜下观察肝脏组织学变化。结果模型组大鼠有明显肝损伤和慢性纤维化表现;各给药组肝功能和肝纤维化均有不同程度的改善,病理组织学检查结果表明其肝脏病变程度均较模型组明显减轻。结论水芹总酚酸对慢性肝纤维化大鼠具有明显的保肝和抗纤维化作用,其机制可能与清除自由基和抗氧化作用以及抑制肝星状细胞的活化有关。     

丙型肝炎高变区1合成肽对免疫小鼠脾淋巴细胞增殖作用的研究

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位7肽(7P)在体外免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞的增殖情况。方法20只小鼠随机分为实验组和对照组(n=10)。实验组小鼠皮下多点注射7P(500μl/只,含量5μg),对照组皮下多点注射等量生理盐水,单溶液细胞增殖法(MTS)检测前一天脾内直接注射7P(200μl/只,含量2.5μg)加强。收集脾淋巴细胞,分别加入不同浓度(6.25、12.50、25.0、50.0、100.0μg/ml)的7P,培养24、48、72h后光镜下观察细胞生长情况,应用MTS法检测小鼠脾淋巴细胞增殖活力,并计算增殖率。结果实验组小鼠脾淋巴细胞加入7P后第2天,镜下观察见细胞生长良好,可见散在的细胞增殖集落,对照组未见明显集落出现。与对照组比较,实验组经不同浓度7P诱导后,脾淋巴细胞的增殖活性均明显增强(P<0.01)。培养72h,7P诱导浓度为12.5μg/ml时,对脾淋巴细胞的增殖具有最佳促进效果,增殖率达到184.92%。在相同诱导浓度下,7P的最佳诱导效应随培养时间的延长而增加。结论合成的HVR1模拟表位7P在体外对免疫小鼠脾淋巴细胞具有一定的增殖作用。     

参麦注射液对LWEIS肺癌小鼠的抗肿瘤及作用机制研究

目的研究参麦注射液对Lweis肺癌小鼠的抗肿瘤作用。方法建立Lweis细胞小鼠移植瘤模型,将荷瘤小鼠随机分为荷瘤对照组,阳性对照组及参麦注射液三个剂量组,另设正常对照组,每日灌胃给药,通过测定抑瘤率,脾脏指数,胸腺指数,TNF-α、Bcl-2、Bax、caspase-9含量,探讨参麦注射液的抗肿瘤作用及作用机制。结果参麦注射液抑制Lweis肺癌小鼠瘤块的生长,降低荷瘤小鼠的脾脏指数,胸腺指数,促进TNF-α,Bax和Caspase-9生成,抑制Bcl-2含量。结论参麦注射液可通过增强荷瘤机体免疫功能及诱导凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

国内实验动物微卫星DNA标记的研究进展

近年来由于传染性疾病的大量流行,相关研究已成为许多专家关注的热点,特别是实验动物传染性疾病,如HBV和HIV感染的模型动物研究已取得了重大的进展。通过转基因和基因打靶技术建立的许多动物模型,如小鼠的基因敲除肝癌动物模型、小鼠转基因乙型肝炎动物模型和猕猴的HIV动物模型等,为各种传染性疾病的研究打下了坚实的基础,但这些模型是否能够再次复制,基因敲除后对于模型动物的遗传背景是否发生改变以及改变的程度等,还须要进行遗传背景的监测。     

大鼠模型中糖尿病导致氯吡格雷治疗后血小板高反应性的机制研究

目的在大鼠模型中探讨糖尿病对氯吡格雷治疗后血小板高反应性(HTPR)的影响及其可能的影响机制。方法造模成功的雄性SD大鼠45只,随机分为空白组11只、氯吡格雷组11只、糖尿病组11只和糖尿病+氯吡格雷组(实验组)12只,普通饲料饲养8周,采用灌胃法给予氯吡格雷,糖尿病模型采用链脲佐菌素(STZ)一次性注射法建立。流式细胞术检测CD62P水平和细胞质内Ca2+水平,ELISA法检测同型半胱氨酸(Hcy)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血栓素A2(TXA2)、前列环素(PGI2)及NO等水平,RT-PCR和Westernblot检测细胞色素450(CYP450)、蛋白激酶C(PKC)及P2Y12受体基因和蛋白表达。结果糖尿病组和实验组血糖、Hcy、MDA、TXA2、hs-CRP水平、P2Y12基因和蛋白及PKC蛋白表达显著高于空白组和氯吡格雷组(P<0.01);PGI2、SOD及NO、ADP诱导的血小板聚集抑制率(ADP-IR)、CYP450蛋白表达显著低于空白组和氯吡格雷组(P<0.01)。实验组ADP-IR显著低于糖尿病组[(45.64±13.31)%vs(80.14±4.30)%,P<0.01]。糖尿病组CD62P、细胞质内Ca2+水平明显高于其他组(P<0.01);且实验组明显高于空白组和氯吡格雷组(P<0.05,P<0.01);氯吡格雷组细胞质内Ca2+水平显著低于空白组(P<0.05)。各组PKC和CYP450基因表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ADP-IR与SOD和TXA2水平呈负相关(P<0.05,P<0.01);CD62P水平与细胞质内Ca2+水平呈正相关(P<0.01)。ADP-IR与CD62P水平呈负相关(r=-0.3567,P=0.015)。结论糖尿病导致氯吡格雷HTPR的机制为血小板功能异常、血小板表面受体表达上调及氯吡格雷活化相关酶系表达减少。     

HPLC法测定不同产地凤仙花饮片中山奈素的含量

目的:建立测定不同产地凤仙花饮片中山奈素含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C18(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(35∶65,V/V),检测波长为360 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为40℃,进样量为5μl。结果:山奈素的质量浓度在8.16⁸1.60μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 6);精密度、重复性、稳定性试验的RSD<2%;平均加样回收率为99.68%,RSD=1.9%(n=9)。结论:湖北宜昌所产的凤仙花饮片中的山奈素含量最高。该方法操作简便,结果准确、可靠,可用于凤仙花饮片的质量控制。     

参芪扶正注射液对肝癌细胞株H22的抑制作用及机制研究

目的研究参芪扶正注射液体内外对肝癌H22细胞的抑制作用及其机制。方法 MTT法检测参芪扶正注射液体外对H22细胞增殖的影响;利用H22小鼠模型进行体内抗肿瘤作用试验,计算抑瘤率;酶联免疫ELISA法测荷瘤小鼠血清IFN-γ含量;双抗体夹心ABC-ELSA法测荷瘤小鼠血清TNF-α的含量。结果参芪扶正注射液体内外均能抑制H22细胞的生长,具有浓度和时间依赖性;促进荷瘤小鼠血清中IFN-γ和TNF-α的表达。结论参芪扶正注射液体内外均能抑制肝癌H22的生长,其抗肿瘤作用与调节荷瘤小鼠的免疫功能有关。