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目的:建立从人的脐带组织中分离和培养脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的方法,并探讨UC-MSCs的生物学特性。方法:分别采用原代贴壁培养法和酶消化法(胶原酶Ⅱ和胰酶)分离培养UC-MSCs,瑞氏染色观察细胞形态,流式细胞术检测第3代以后的UC-MSCs表面特异标志物表达,MTT法检测P7细胞增殖情况。UC-MSCs同外周血单个核细胞共培养后,用MTT法测定细胞增殖率,Hoechst与PI双染色,观察UC-MSCs对健康人淋巴细胞增殖的影响。结果:原代贴壁培养法1周左右可见成纤维样细胞从组织块边缘爬出,成簇生长;酶消化法3~5天可见成纤维样细胞均匀生长。传代培养后,UC-MSCs均呈长梭形、旋涡状生长;细胞核大,核仁清晰;免疫表型:CD29阳性率为(95.71±2.23)%,CD31和CD34阳性率分别为(2.47±0.54)%和(3.24±0.34)%;第7代UC-MSCs仍具有较强的分裂增殖能力。UC-MSCs对淋巴细胞的增殖反应具有抑制作用,呈细胞数量剂量依赖性,而淋巴细胞对UC-MSCs的生长未见影响。结论:从人脐带中成功分离培养的细胞具有UC-MSCs生物学特性。 相似文献
27.
目的: 探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对HL-60细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9表达的影响。方法: 以HL-60细胞为对象,加入0.0、2.5、5.0、7.5 μmol/L As2O3干预48 h。RT-PCR检测MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果: HL-60细胞MMP-2、MMP-9 mRNA的表达随着As2O3浓度的增加而减少,5.0和7.5 μmol/L As2O3组与对照组差异均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01)。As2O3呈剂量依赖性抑制HL-60细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达,As2O3各组与对照组差异均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01)。结论: As2O3可抑制HL-60细胞MMP-2、MMP-9的表达,这一效应可能是As2O3治疗白血病的分子机制之一。 相似文献
28.
目的 探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对体外培养K562细胞mTOR信号通路相关分子表达及活性的影响.方法 不同浓度的PNS(50~800 μ,g/mL)干预体外培养K562细胞24 ~ 72 h后,MTT比色法检测PNS对K562细胞增殖的抑制作用;AO/EB双荧光染色法观察细胞死亡及凋亡状况;RT-PCR检测mTOR、p70S6K、4E-BP1 mRNA表达变化;Western blot检测mTOR、p70S6K、4E-BP1及p-mTOR、p-p70S6K、p-4E-BP1蛋白表达量的变化.结果 与对照组相比,浓度为100~ 800 μg/mL的PNS能够抑制K562细胞增殖(P<0.05),促进K562细胞凋亡及死亡(P<0.05),PNS对K562细胞72 h的IC50为(229.07±2.36) μg/mL;100、200、400 μg/mL PNS作用于K562细胞72 h后mTOR蛋白表达量及mRNA表达量降低(P<0.05),且磷酸化蛋白p-mTOR (Ser2448)、p-p70S6K (Thr229/389)及p-4E-BP1(Thr37/46)表达水平也随着药物浓度的增加而降低(P<0.05).结论 PNS能够抑制K562细胞mTOR信号通路的活性,这可能是PNS抑制K562细胞增殖的机制之一. 相似文献
29.
目的:通过对外周血CD4+CD25+ T细胞的检测,初步探讨CD4+CD25+ T细胞水平与再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)发病和预后的关系。方法:流式细胞术分别检测20例正常对照、30例初发AA患者、10例治疗有效AA患者和10例治疗无效AA患者的CD4+CD25+ T细胞和CD4+CD25highT细胞水平。结果:4组患者CD4+CD25+ T细胞比例差异无统计学意义(P>0.05);初发AA和治疗无效组AA患者CD4+CD25highT细胞比例均低于正常对照组(P<0.01和P<0.05),但与治疗有效AA患者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CD4+CD25highT细胞比例下降是造成AA患者免疫耐受破坏的原因之一,CD4+CD25+ T细胞比例可能并不能反映AA患者的预后状况。 相似文献
30.
目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,构建Fas基因的siRNA慢病毒表达载体,建立Fas基因稳定干扰的人脐带间充质
干细胞(UC-MSCs)株,为下一步使用低表达Fas 基因的UC-MSCs治疗再生障碍性贫血奠定实验基础。方法以人Fas 基因
mRNA序列作为干扰靶点,设计4组靶向Fas的shRNA序列,合成寡核苷酸,与经过BamHI、EcoRI双酶切后的LV3载体连接获
得重组慢病毒,通过感染293T 细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养人UC-MSCs,使用包装好的慢病毒感染
UC-MSCs,应用Real time- PCR和Western blotting检测感染后细胞中Fas mRNA及蛋白的表达情况。结果经酶切以及基因测
序鉴定证明慢病毒载体构建成功,病毒悬液滴度为3×108 TU/ml。Real time-PCR和Western blotting结果显示干扰组细胞的Fas
表达水平较对照组显著降低。结论慢病毒介导的SiRNA能有效沉默UC-MSCs中Fas基因的表达。
相似文献
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