HSVTK/GCV自杀基因系统治疗乳腺癌的研究

 目的　探讨HSV TK/GCV自杀基因系统对小鼠乳腺癌细胞系MA782 / 5S 810 2体外及体内杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法　采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染小鼠乳腺癌细胞MA782 / 5S 810 2 ,得到带有HSV TK基因的MA782 / 5S 810 2 /TK细胞 ,并将其分别用于体外和体内实验。结果　载体HSV TK导入了PA317细胞。体外实验结果显示 ,当MA782 / 5S 810 2 /TK细胞数占混合细胞 10 %时 ,低浓度 (10 μg/ml)的GCV就可将 5 0 %左右的肿瘤细胞杀死。体内实验结果显示GCV可明显抑制MA782 / 5S 810 2 /TK细胞在BALB/C小鼠体内的肿瘤形成。实验组肿瘤组织与对照组相比存在明显的病理学改变。结论　逆转录病毒可介导HSV TK基因转入小鼠乳腺癌细胞MA782 / 5S 810 2并获稳定表达 ,HSV TK/GCV自杀基因系统在体内外对乳腺癌细胞均有杀伤作用 ,且存在明显的旁观者效应。     

两种转染方法介导质粒转染人舌鳞癌细胞的实验研究

目的:比较新型阳离子聚合物交联化聚乙烯亚胺(polyethylenimine-ethyleneglycol dimethacrylate,PEI-EGDMA)与阳离子脂质体TRANSfection转染人舌鳞癌(Tca8113)细胞的转染效率和细胞毒性.方法:将合成的含有绿色荧光蛋白报告基因的靶向血管内皮生长因子RNA干扰质粒,分别通过PEI-EGDMA和TRANSfection转染入Tca8113细胞中,每组设4 种浓度.转染后24 h,荧光显微镜下观察转染效果,计算各组的转染效率.48 h后四甲基偶氮唑盐(MTT)法行细胞毒性检测.结果:PEI-EGDMA与重组质粒质量比(W∶ W)控制在1.5∶ 1时转染效率最高,约为72%,与其余浓度组相比存在显著性差异(P<0.05).TRANSfection与重组质粒质量比控制在2∶ 1时,转染效率最高,约为55%,与其余各浓度组有显著性差异(P<0.05).在各自最佳转染条件下,PEI-EGDMA的转染效率明显提高.MTT结果显示在实验设定的浓度范围内,各组细胞的生长无显著性差异(P>0.05),细胞毒性较小.结论:新型阳离子聚合物PEI-EGDMA与TRANSfection相比转染效率更高,细胞毒性小,有望成为人舌鳞癌细胞基因转染的有效载体.     

Tristetraprolin对体外血管生成的作用

目的：研究tristetraprolin（TTP）在血管生成中的作用。方法：构建可以超表达TTP的重组腺病毒,感染原代内皮细胞后进行体外三维血管生成检测。结果：在体外三维血管生成模型检测中,超表达TTP组从第1天开始就明显地促进血管生成,在之后的几天维持并且加大了这种趋势。进一步的统计分析发现,这种促进作用基本是通过促进血管出芽来实现的,而至少在早期对血管芽的生长基本没有影响。结论：TTP对血管生成的促进作用,更多的是通过促进出芽而不是促进血管芽生长来实现的。在血管生成过程中TTP迅速下调,并维持在一个较低水平上。     

聚乙二醇修饰的胆固醇酯酶在高密度脂蛋白胆固醇均相测定中的作用

目的：对胆固醇酯酶进行修饰,评价修饰酶的反应选择性。方法：采用各种聚乙二醇修饰剂对胆固醇酯酶进行修饰从而获得一系列修饰酶,然后研究这些修饰酶在高密度脂蛋白胆固醇的临床检验中的作用。结果：经双臂聚乙二醇修饰剂修饰的酶比用其他修饰剂修饰的酶具有更好的热稳定性和更高的酶活性,且表现出了较高的对高密度脂蛋白胆固醇的反应选择性。结论：表面活性剂对高密度脂蛋白的选择性解离作用非常重要,这有助于修饰酶发挥其对高密度脂蛋白胆固醇的反应选择性。     

Skp2靶向RNA干扰质粒的构建及其对人舌鳞癌Tca8113细胞的影响

目的运用RNA干扰技术阻断人舌鳞状细胞癌Tea8113细胞中Skp2基因的表达，观察Skp2基因沉默后对Tea8113细胞的影响。方法采用真核转录质粒pRNAT-U6．1／Neo构建针对Skp2基因的重组转染质粒。经聚乙烯亚胺法将其转染Tea8113细胞，通过反转录聚合酶链反应（reverse transcrip-tase polymerase chain reaction，RT-PCR）、Western blot检测Skp2、p27表达的变化；流式细胞仪、甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl terrazolium，MTT）法检测转染后Tea8113细胞的细胞周期、生长速度的变化。结果转染重组质粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3后，Tea8113细胞内Skp2基因在mRNA和蛋白水平上均下调表达（P〈0．01），p27基因蛋白水平上调表达（P〈0．01）；而各重组质粒转染后p27基因的mRNA水平无明显变化。重组质粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3转染Tea8113细胞后，与对照组相比，G1～G0期细胞增加了约22％（P〈0．01），G2～M期和S期细胞减少了约10％和12％（P〈0．01），细胞的生长速度明显变慢（P〈0．01）。结论初步证明了Skp2、p27基因在口腔鳞状细胞癌细胞分化增殖中所扮演的重要角色；筛选出了高效RNA干扰重组质粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3，为进一步研究以Skp2基因为靶点的人舌鳞状细胞癌基因治疗奠定了基础。     

含HSVtk基因重组逆转录病毒包装细胞PA317/TK的建立

目的 :研究肿瘤的自杀基因疗法 ,建立含单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSVtk)基因重组逆转录病毒包装细胞PA317/TK。　方法 :应用脂质体转移方法将逆转录病毒载体GINaTK导入PA317,经G4 18筛选阳性克隆细胞后分别用PCR和扫描电镜检测HSVtk基因整合和病毒颗粒分泌情况。　结果 :逆转录病毒载体GINaTK导入PA317,G4 18后筛选得到阳性克隆细胞 ,命名为PA317/TK。PCR检测PA317/TK细胞出现一特异性 4 0 4bp阳性条带 ,而PA317细胞没有扩增出相应条带。PA317/TK细胞经扫描电镜检测见其表面有颗粒状突起 ,其周围有许多呈团状的病毒颗粒。证实含HSVtk基因重组逆转录病毒存在于包装细胞中。　结论 :成功建立含HSVtk基因重组逆转录病毒包装细胞     

CDKN2／p16基因在四种原发恶性肿瘤中存在状态的研究

目的：研究CDKN2/16基因缺失和蛋白丢失在非小细胞肺癌，食管癌、胃癌、乳腺癌4种原发恶性肿瘤中的作用。方法：采用免疫组织化学和多重PCR技术对68例（非小细胞肺癌31例，食管癌15例，胃癌13例，乳腺癌9例）原发肿瘤组织标本进行CDKN2/p16基因第一，第二外显子纯合缺失和p16蛋白表达丢失分析研究，结果：第一或（和）第二外显子总缺失率为13．2％（9／68），蛋白丢失率为44％（30／68），不同肿瘤组织标本的p16基因缺失率和蛋白丢失率差别很大。结论：CDKN2/[16基因是重要的多肿瘤抑制基因，在不同肿瘤组织中其失活方式不完全相同。     

体外冲击波碎石术治疗输尿管上中段结石的疗效观察

目的:探讨如何提高体外冲击波碎石术(ESWL)治疗输尿管上中段结石的疗效.方法:采用深圳科达NE-VB型B超定位电磁波碎石机,俯卧位治疗输尿管上中段结石2 528例.结果:经过首次、复次ESWL治疗后2 480例结石全部排出,48例治疗失败.结论:ESWL治疗输尿管上中段结石是安全、有效、可行的,但必须严格掌握适应证和术中、术后注意事项,才能取得更满意的疗效.     

耳疳散治疗慢性脓耳60例

耳疳散治疗慢性脓耳６０例李淑锋孙希尧主题词耳炎，慢性／外治法笔者自１９８６年以来，用耳疳散治疗慢性脓耳６０例，收到了较好的疗效，现报道如下。１临床资料６０例患者中，男３９例，女２１例；年龄最小者１０个月，最大者４３岁；病程最短者半个月，最长者...     

壳聚糖纳米颗粒的制备及其质粒转染研究

目的:研究壳聚糖纳米颗粒在体外和体内实验中的转染能力.方法:用亚硝酸钠降解壳聚糖的方法制得低分子质量壳聚糖,用zeta电位仪测定粒径、多分散度、zeta电位,并使用乌式黏度计法测定其相对分子质量;通过静电吸附复合绿色荧光蛋白表达质粒pIRES-eGFP(报告基因),采用琼脂糖凝胶电泳分析载体与DNA结合能力;用体外和体内基因转染实验,评价纳米颗粒的转染能力.结果:制得的壳聚糖粒径200～600nm,多分散度最好的达到0.005,zeta电位0.89mV,相对分子质量7.7×107 ,粒径250nm.体外对3T3细胞的转染实验显示,该壳聚糖具有一定的转染效率;体内对Balbc57/BL6小鼠的股四头肌肌肉的转染实验显示,肌肉组织中有大量绿色荧光蛋白的表达,并且在炎症部位尤为明显.结论:本研究制备的壳聚糖,能够在体外和体内均实现有效转染,为基因治疗提供了一种潜在的载体.