基于CRISPR/Cas9的PALM基因敲除约氏疟原单克隆虫株的构建

目的：基于CRISPR/Cas9技术构建并鉴定Plasmodium yoelii 17XNL PALM基因敲除单克隆虫株。方法：根据PlasmoDB数据库中的约氏疟原虫P.yoelii 17XNL PALM基因序列信息,设计引物与sgRNA。PCR扩增左、右同源臂,将同源臂和sgRNA与载体pYCm-golden-blue连接,构建用于基因敲除的CRISPR工具质粒pYCm-PALM KO。pYCm-PALM KO CRISPR质粒电转染至P.yoelii 17XNL裂殖体,尾静脉注射感染小鼠,24 h后采血查获疟原虫后,给予小鼠6 mg/mL乙胺嘧啶喂水进行药物压力筛选基因敲除疟原虫。此后每2天鼠尾采血涂片镜检疟原虫,喂药8 d时提取疟原虫基因组DNA进行PCR鉴定,最终经测序确定是否发生PALM基因敲除。将已证实存在PALM基因敲除疟原虫的鼠血采用有限稀释法接种小鼠,8 d后采血镜检疟原虫,PCR鉴定,筛选获取单克隆虫株。将获取的PALM基因敲除的单克隆虫株和P.yoelii 17XNL各接种至6只昆明小鼠体内,每只接种1×10⁵感染疟原虫的红细胞(iRBC)...     

急症闭合性腹部损伤手术的麻醉注意事项

闭合性腹部损伤病情急而复杂,常合并多脏器的损伤和不同程度的休克。现就我院１９９２年以来１０８例急症闭合性损伤腹部手术的麻醉资料和处理分析讨论如下。资料与方法　１０８例中男８５例,女２３例,年龄４～７２岁。致伤原因多为直接暴力。撞击伤６２例,斗欧伤１５例,挤压伤１８例,坠落伤１１例,其它伤２例。伤后４～１２小时送入医院。伴有重度休克３２例,中度休克４１例,轻度休克１５例。肝破裂５４例,脾破裂３０例,肠破裂１１例,肾破裂８例,小肠结肠系膜破裂１例,后腹膜血肿４例,合并颅脑、胸、骨及泌尿系统损伤６８例…     

颅内动脉瘤术后夹闭不全和载瘤动脉闭塞的64层CTA评价

目的 评价颅内动脉瘤术后夹闭不全和载瘤动脉闭塞的CT血管造影(CTA)表现,分析导致夹闭不全和载瘤动脉闭塞的可能原因.方法 回顾性分析118例颅内动脉瘤夹闭术后患者的CTA资料,使用64层螺旋CT扫描和多平面重组(MPR)、最大密度投影(MIP)、容积再现(VR)图像后处理技术,并与数字造影血管造影(DSA)对照,评价术后载瘤动脉的CTA表现,尤其是瘤夹的位置、夹闭不成功时残存瘤体的形态.结果 112例载瘤动脉通畅,6例经DSA证实有动脉瘤夹闭不全(5例)和载瘤动脉闭塞(1例).所有钛夹显示清楚,无伪影.动脉瘤夹闭不全在CTA上表现为瘤夹周围残存小结节状、锥状、泡状或囊袋状动脉瘤影,分别位于前交通动脉处(2例)、右侧大脑中动脉水平段远端分叉处(2例)、左侧大脑中动脉水平段远端分叉处(1例).1例左侧颈内-后交通动脉瘤夹闭术后载瘤动脉闭塞,CTA表现为相应节段的动脉未见显影.结论 64层MSCTA能清晰显示颅内动脉瘤术后钛合金瘤夹的位置与形态、载瘤动脉的通畅情况以及夹闭不全时残存的动脉瘤.     

氟牙症牙本质黏结界面银渗漏的实验研究

目的:研究氟牙症严重程度对牙本质黏结界面银渗漏的影响。方法:选择轻、中、重度(Dean氏分类)人离体有氟牙症的磨牙各4个,充分暴露面牙本质后,在该表面上顺牙体长轴做切槽,将每个牙面均分为近远中两部分,分别用黏结剂Prime&BondNT(NT)和Contax进行黏结。37℃蒸馏水中浸泡24h后,500g/L氨化硝酸银染色。然后将试件进行包埋和切片(垂直于切槽),背散射电子成像观察测量正反两面银染的深度。结果:轻、中、重度氟牙症牙本质黏结界面的银染深度分别为:NT黏结剂(339.33±92.68)μm,(335.06±96.59)μm,(708.16±131.55)μm;Contax黏结剂(264.00±96.32)μm,(401.44±92.34)μm,(618.86±165.95)μm。结论:对同一种黏结剂,重度氟牙症牙本质黏结界面银渗漏程度明显高于其他两组(P<0.05);但对于相同程度的氟牙症,不同黏结剂界面银渗漏程度无统计学差异(P>0.05)。     

口腔颌面部肿瘤分类新进展

肿瘤病理学是病理学的重要组成部分,统一的肿瘤分类有利于肿瘤病理诊断标准化、学术交流术语规范化。WHO肿瘤分类对肿瘤分类规范化起了重要推动作用,从20世纪60年代后期至20世纪末,WHO相继出版了两版肿瘤分类,     

镧,铈,氟离子对胶原酶分解牙骨质胶原作用的影响

作者对在胶原酶分解人离体睡根面胶原的过程中微量元素镧（Ｌａ＾３＋），铈（Ｃｅ＾３＋）及氟（Ｆ＾－）等对溶组织梭状芽胞杆菌胶原酶（ＣＨＣ）活性的影响进行了研究，结果表明Ｌａ＾３＋较Ｃｅ＾３＋Ｆ＾－具有更明显地抑制ＣＨＣ活性的作用，提示在根龋防治中Ｌａ＾３＋不失为一种有应用前景的微量元素，文中还对Ｌａ＾３＋，Ｃｅ＾３＋等对胶原酶的作用机制进行了探讨。     

双侧下颌骨肿块

1病例报告男,50岁,半年前发现下颌前部膨隆,有一黄豆大小肿块,逐渐增大。查体:下颌骨颏部可及一5cm×3cm膨隆,未及乒乓球样感,下前牙松动Ⅱ～Ⅲ度,双侧下颌下可触及多个肿大淋巴结,大小0．5～1．0cm不等,光滑,可活动,无压痛。全景片示左下颌第一磨牙至右下颌第二前磨牙之间骨密度减低影。无家族性疾病史。临床诊断为“下颌骨囊肿”。于局麻下行“下颌骨囊肿刮治术”。     

含镧制剂对根面抗龋作用的最低有效浓度的研究

目的 :比较不同浓度的含镧 (La)漱口水和凝胶对根面的防龋作用 ,并确定这两种剂型的最低有效浓度。方法 :在体外模拟口腔 pH循环变化的环境中 ,采用不同浓度的含La漱口水 ( 10 0× 10 -6-2 0 0 0× 10 -6mmol/L)及凝胶 ( 5 0 0 0× 10 -6 10 0 0 0× 10 -6mmol/L) ,对离体人牙根面进行抑制脱钙的实验研究 ,并借助偏光显微镜、电子探针及能谱分析手段 ,对不同浓度的La3 在根面的抑制脱矿作用进行定性和定量分析。结果 :5 0 0× 10 -6mmol/L以上含La3 漱口水及 10 0 0 0× 10 -6mmol/L以上含La3 凝胶均具有防龋作用 ,且其脱矿深度无显著差别 .结论 :5 0 0× 10 -6mmol/L和 10 0 0 0× 10 -6mmol/L的La3 含量分别是这两种制剂防治根龋的最低有效浓度 ,而使用含镧漱口水制剂可能更适合老年人根龋的防治。     

人下颌骨骨肉瘤细胞系HMOS-99的生物学特性研究

目的:检测人下颌骨骨肉瘤细胞系HMOS-99的细胞生物学特征。方法:通过生长曲线计算倍增时间、测定集落形成率、分析细胞周期等探讨细胞生长增殖特性;分析染色体核型;免疫组化方法检测CKpan、Vim、BMP-2、COⅠ、OC、BSP、OPN的表达;细胞化学染色试剂盒检测ALP的表达;皮下接种免疫缺陷小鼠,检测HMOS-99细胞的成瘤性。结果:HMOS-99细胞倍增时间为42.98h,平板集落形成率为58.5%;细胞周期测定S期细胞占28.44%,并表现为异倍体细胞;核型分析显示细胞呈亚三倍体核型;CKpan(-)、Vim( )、BMP-2( )、COⅠ( )、OC( )、BSP( )、OPN( )、ALP( );免疫缺陷小鼠皮下接种未见肿瘤形成。结论:人下颌骨骨肉瘤细胞系HMOS-99的生物学特性符合骨肉瘤细胞,接种免疫缺陷小鼠无肿瘤生成。     

人工合成小干扰RNA抑制涎腺腺样囊性癌DNA甲基转移酶1的表达

目的通过筛选针对涎腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma，ACC）DNA甲基转移酶1（DNA methyhransferase 1，DNMT-1）基因有效的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）序列和分析RNA干扰（RNA interference，RNAi）作用的时效、量效关系，为建立ACC稳定抑制DNMT-1的表达载体，深入了解DNMT在ACC抑癌基因甲基化过程中的作用。方法设计并人工合成4对siRNA，脂质体介导分别转染ACC细胞系ACC-2、ACC-3和ACC-M细胞，分别于转染后24、48和72h，采用PCR、RT-PCR和Western blot方法检测各细胞系DNMT-1的mRNA和蛋白表达，筛选有效的siRNA干扰序列，同时设置siRNA不同浓度转染组，分析RNAi作用的量效关系。以Cy3标记甘油醛-3-磷酸脱氢酶siRNA作为阳性对照组。结果2对siRNA对3株ACC细胞系细胞DNMT-1的mRNA表达产生了抑制作用，它们分别使ACC-2、ACC-3、ACC-M DNMT-1表达抑制67％、86％、92％和76％、76％、86％，抑制作用出现的时间为转染后24～48h，维持24～48h，与siRNA浓度成正比，Western blot检测符合mRNA的检测结果。结论得到了2对针对ACCDNMT-1基因有效的siRNA干扰序列。它们能显著抑制涎腺ACC细胞系DNMT-1的mRNA和蛋白表达，该抑制作用具有时间依赖性和浓度相关性。