癌基因治疗中的腺病毒载体的开发和应用(综述Ⅱ)

1.8 Ad载体分析的进展 在众多Ad载体分析方法中,有二种是最关键的:一是用于测定物理纯度,另一是用于评估有复制能力的Ad(RCA)的污染。因此,在Ad载体制备物中检测E1基因的存在就成了合乎逻辑的策略。Southern blotting和PCR方法也被用于该目的。PCR分析法在设计上包括了病毒序列扩增内对照,使用二对引物来同时扩增AdE1片段和载体主链。该对照的灵敏度可达到在10~9PFU中检测出一个PFU的RCA。检测RCA生物学分析的设计则可在病毒及DNA水平上检测出rAd的复制能力~(17)P~(32)     

巨噬细胞的激活及其信号传导机制的研究进展

巨噬细胞广泛存在于全身各组织,一般处于静息状态,活化以后成为具有活跃生物学功能的效应细胞。巨噬细胞激活的刺激因子主要有细菌、细胞因子、植物血凝素、寄生虫等。巨噬细胞激活的信号传导途径主要有LPS信号传导途径、Ca2 信号传导途径、PKC信号传导途径、JAK-STAT信号传导途径、MAPK信号传导途径、PI3K信号传导途径等。通过不同刺激因子和各种信号传导途径激活的巨噬细胞,构成了可以执行不同免疫功能的复杂群体。     

壳寡糖抑制肿瘤作用的实验研究

目的：通过建立H22肝癌荷瘤鼠作为实验动物模型，研究壳寡糖对肿瘤抑制作用的影响。方法：选择小鼠体内注射的方法，将不同浓度壳寡糖注入荷瘤小鼠体内，观察肿瘤生长情况，对其进行免疫功能的测定；同时通过MTT比色法观察壳寡糖对LH-7人肺癌细胞的体外生长抑制作用。结果：壳寡糖对肿瘤的生长有抑制作用；壳寡糖可提高荷瘤小鼠血清的IL-2和IFN-γ含量，增加荷瘤小鼠免疫器官脾脏和胸腺重量；显微镜观察肿瘤组织出现坏死；壳寡糖对LH-7细胞生长有抑制作用，抑瘤率与浓度有关，与时间无关；透射电镜显示细胞有凋亡趋势。结论：壳寡糖可抑制肿瘤生长，提高机体免疫功能；同时壳寡糖可能诱导LH-7肿瘤细胞凋亡。     

重组人粒／巨噬细胞集落刺激因子下游处理研究（Ⅱ）

目的 在成功构建人粒/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）高效表达克隆的基础上对其表达产物进行分离纯化，并对rhGM-CSF在溶液中的构象、稳定性、变复性等进行研究。方法 在纯化研究基础上利用傅里叶变换红外光谱技术（FTIR）对rhGM-CSF的构象进行研究，同时应用聚乙二醇（PEG）和牛肝二硫键异构酶（PDI）对GM-CSF的复性及体外折叠作用进行分析。结果 利用FTIR技术可见GM-CSF在D2O溶液中20℃时含35%a-螺旋，32%β-螺旋，11%转角和20%无规卷曲，适当PEG可使蛋白得率和比活性均达到最高，PDI可以提高蛋白质的正确折叠率。结论 采用FTIR研究蛋白质在溶液中的构象耗时短、重复性好、样品大海怛小，对产品的质量控制及批间产品的稳定性具有指导价值。加入适当比例的PEG和PDI可使蛋白得率和比活性明显提高。     

人T淋巴瘤裸小鼠移植瘤株和细胞系的建立及其生物学特性的研究

一淋巴瘤患者腹水中的瘤细胞在裸小鼠皮下移植成瘤并可传代。以此移植瘤株进行体外培养,建立了一个人T淋巴瘤细胞系,命名H—TL_(90)。此细胞系表现不正常的免疫学标记(CD_3~-,CD_7~ ,CD_4~-,CD_8~),变异的染色体,并有产生自泌生长因子和促淋巴细胞增殖因子的征象。鉴于H-TL_(90)具有上述特点,它可以作为深入研究人T淋巴瘤的一个良好实验模型。     

恶性肿瘤基因治疗的研究进展

由于分子生物学技术的高速发展,基因治疗技术发展的速度比任何领域都快,尤其是肿瘤基因治疗进展更为迅速,走在了基因治疗的前列。在国际批准的100余个基因治疗方案中,肿瘤基因治疗就有70个左右,建     

Effect of Human Lymphokine-Activated Killer Cells on Mitotic Phase Tumor Cell

为提高淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）临床应用的疗效，采用抗肿瘤化疗药物长春新碱诱导人肺腺癌细胞Ａｎｉｐ９７３进入有丝分裂期，研究ＬＡＫ细胞对有丝分裂期肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明，肿瘤细胞进入有丝分裂期后，形态上发生明显的变化，ＬＡＫ细胞对有丝分裂期肿瘤细胞的杀伤作用明显增高。电镜下，ＬＡＫ细胞与有丝分裂期肿瘤细胞以绒毛相接触，呈犬牙交错状，靶细胞死亡形式是溶解坏死和凋亡。     

LAK细胞的抗病毒感染作用

由于缺乏有效的抗病毒治疗措施,病毒性疾病的发生、发展、转归和预后在很大程度上取决于机体免疫功能等自身防病和抗病能力。因此应用免疫学的理论、观点和方法,充分调动和发挥机体的免疫系统功能,成为研究和探     

肿瘤生物治疗新方法的研究

本文简述“九五”攻关项目间“肿瘤生物治疗新方法”且经协作攻关主要完成的研究工作有：重组人TNF、IL－2及B7重组腺病毒表达载体的构建及其包装体系的建立：腺病毒介导的人TNF－α基因转染对人肝癌细胞凋亡和MHC－Ⅰ类分子表达的影响;瘤体内／瘤周注射TNF－α重组腺病毒和（或）IL－2T重组腺病毒对肝癌小鼠的治疗作用及其免疫机理研究。粘附LAK细胞的制备、体外扩增、冻存及复苏;转染B7、IL－2、TNF－α基因重组腺病毒的肿瘤细胞及A－LAK的生物学特性研究;人肝癌组织中MAG基因的表达及MAGE基因修饰树突状细胞体外抗肿瘤作用;转基因瘤苗临床应用安全性的初步性的初步检测,这些研究工作的完成为肿瘤基因治疗的临床应用打下基础。     

B7—1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的实验研究

目的：研究B7-1基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法：通过逆转录病毒载体。将小鼠B7-1基因导入EL-4淋巴瘤细胞中,研究EL-4/B7-1在同系C57BL/6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果：转B7-1基因诱导了CD80的高表达,EL-4/B7-1细胞在小鼠中的成瘤性下降,在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗。基因修饰的瘤苗作用明显增强,EL-4/B7-1细胞能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击,射线灭活的EL-4/B7-1瘤苗作用减弱。结论：B7-1基因修饰的肿瘤疫苗可诱导体内的抗肿瘤免疫反应,导致肿瘤的部分根除,为基因修饰的肿瘤疫苗的临床应用提供了实验依据。