基于肿瘤新抗原的晚期肝细胞癌过继免疫细胞治疗相关进展

晚期肝细胞癌恶性程度高, 预后差, 研究发现肝癌进展与肿瘤微环境中的免疫状态存在密切关系。过继免疫细胞治疗可通过给患者输注激活的特异性免疫细胞产生抗肿瘤作用, 改善免疫抑制状态, 是肿瘤治疗的研究热点, 并在多种恶性肿瘤的治疗中展示出较好的效果, 表现出了巨大的应用潜力。在肝细胞癌治疗方面基于肿瘤新抗原的过继免疫细胞治疗成为新的热点, 而其应用方式、安全性与有效性评估、疗效预测及评价成为亟待解决的问题。本文旨在通过介绍晚期肝细胞癌过继免疫细胞治疗相关进展, 并阐述未来需要解决的问题。     

人增生肝外胆管上皮细胞的原代培养及组织学特点

目的 建立人增生胆管上皮细胞(BECs)的原代培养.方法 通过胶原酶消化、机械分离对不同原因引起的扩张人肝外胆管上皮细胞进行分离纯化,建立原代培养;利用免疫细胞化学和免疫荧光染色,对培养的胆管上皮细胞表达CK-19、E-cadherin、Vimentin、α-SMA和S100A4进行特性鉴定.结果 BECs的贴壁成活率高,原代培养细胞生长速度快;免疫细胞化学和免疫荧光染色显示,上皮细胞特异性标志CK-19和E-cadherin表达阳性,间质细胞标志Vimentin表达弱阳性或阴性,α-SMA表达阴性,但上皮间质表型转变标志蛋白S100A4呈阳性表达.结论 本方法经济、简便、易行,在体外成功分离培养增生的人肝外胆管上皮细胞,获得了高纯度的BECs(>98%);发现增生的胆管上皮细胞发生了上皮间质表型转变,可能是参与胆汁性肝纤维化的机制之一.     

APA微囊对免疫细胞和细胞因子隔离效应的研究

目的 测定海藻酸钠－多聚赖氨酸－海藻酸钠（ＡＰＡ）微囊对免疫细胞和细胞因子的隔离效应。方法 将ＮＫ细胞和ＩＬ－２、ＴＮＦ－α的活性测定方法用于微囊免疫隔离效果的评价。结果 ＮＫ细胞对微囊化Ｋ５６２靶细胞的细胞毒实验表明,微囊可有效地保护囊同细胞不受ＮＫ细胞的杀伤作用;ＩＬ－２（１５．４ｋＤ）和ＴＮＦ－α（５１ＫＤ）可通过微囊膜进入囊内,并分别支持囊内ＩＬ－２依赖细胞的生存以及对微囊内的Ｌ９２９靶细     

微波固化和手术切除对肝癌细胞血行性播散的影响

目的　比较和评估手术切除和微波固化两种治疗方法对肝癌细胞血行性播散的影响。方法　应用巢式RT PCR检测治疗前外周血AFP mRNA、MAGE 1 mRNA和MAGE 3 mRNA表达均为阴性的92例TNMⅡ期原发性肝癌(HCC)患者及10例良性肝病患者治疗后外周血上述指标的表达情况。结果　直径≤3cm的TNMⅡ期HCC微波治疗后外周血AFP mRNA、MAGE 1 mR NA和MAGE 3 mRNA表达总阳性率为4 35%(1/23),手术治疗后总阳性率为30 43%(7/23),两组比较差异显著(P<0 05)。直径>3cm的TNMⅡ期HCC微波治疗后外周血AFP mRNA、MAGE 1 mRNA和MAGE 3 mRNA表达总阳性率为21 7%(5/23),手术治疗后总阳性率为34 8%(8/23),两组比较无显著性差异(P>0 05)。对照组三项指标检测均为阴性。结论　手术与微波治疗均可能导致医源性癌细胞血行播散,直径≤3cm的TNMⅡ期HCC微波治疗引起的肝癌细胞血行性播散概率较手术治疗低,但对直径>3cm的TNMⅡ期HCC而言,两种方法无明显差异。     

长时间冷缺血对供肝胆管细胞原纤毛结构及功能的影响

目的研究长时间冷缺血对供肝胆管细胞原纤毛结构及功能的影响及其与移植肝胆管病的相关性。方法选取6～8周龄雄性同基因近交系Wistar大鼠60只,随机分为实验组(供肝冷缺血时间为12h)与对照组(供肝冷缺血时间为1h),每组30只。两袖套法建立大鼠肝移植模型,采用改良Gao支架法重建肝动脉血供,支架法重建胆管。术后2、8、16周分别活杀5只大鼠,抽静脉血查血生化指标,切取肝脏标本分别用福尔马林、2.5%戊二醛及液氮固定,观察肝组织形态学改变及肝内胆管细胞及原纤毛的变化,免疫荧光法和免疫印迹分析法检测胆管细胞原纤毛α-tubulin、膜蛋白(PC-1、TRPV4及P2Y12)的表达。结果与对照组相比较,实验组汇管区胆管结构模糊或胆管消失,小叶间胆管部分上皮细胞脱落,胆管壁内胶原暴露,周围有较多的胶原沉积和炎细胞浸润,胆管壁内胶原暴露,部分胆管上皮细胞变形、坏死,原纤毛及微绒毛减少或消失。原纤毛α-tubulin、PC-1、TRPV4及P2Y12的表达逐渐减少。结论供肝长时间冷缺血可导致胆管细胞原纤毛结构及功能的缺损,与移植肝胆管病的发生具有显著的相关性。     

Study on the nuclear translocation mechanism in the inhibition of nuclear factor-κB activation in bacterial lipoprotein-tolerant THP-1 cells

Objective To approach the nuclear factor-κB (NF-κB) nuclear translocation mechanism in bacterial lipoprotein (BLP) tolerance. Methods Human monocytic THP-1 cells were first pretreated with 10, 100, 1 000 ng/ml BLP for 20 hours to induce BLP tolerance. Then THP-1 cells without BLP pretreatment (control group) or with BLP pretreatment (tolerance group) were stimulated with 0, 10, 100,1 000 ng/ml BLP again for 6 hours. The tumor necrosis factor-α (TNF-α) content in culture medium was measured by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) in order to determine the most suitable BLP pretreatment and stimulation concentration. Western blotting was used to detect the protein level, nuclear translocation and phosphorylation of NF-ΚB p50 and p65 in the cells of control and tolerance groups treated with respective conditions for 0, 0.5, 1, 2 and 6 hours. Results In control group BLP stimulation (10,100, 1 000 ng/ml) could induce THP-1 activation and TNF-α production (pg/ml: 184.86 ± 32. 51,3 215. 88±167. 09, 6 042. 96±245. 37) in a dose-dependent manner. In tolerance group, 100 ng/ml BLP pretreatment resulted in almost complete inhibition of TNF-α production as induced by 10-1 000 ng/ml BLP stimulation. Therefore, 100 ng/ml BLP pretreatment and 1 000 ng/ml stimulation were selected for following cell treatment. Western blotting analysts showed that there was an increase of p50 protein level in BLP-tolerant cells comparing with control group (0 hour: 542. 9±15. 6 vs. 272. 8±13. 2, 0. 5 hour: 558. 0±16. 9 vs. 236. 4±11.8, 1 hour: 524. 7±17. 5 vs. 211. 6±9. 8, 2 hours: 584. 9±15. 6 vs. 222. 4±12. 3, all P＜0. 01), whereas the p65 protein level was similar between the two groups. BLP stimulation also induced the nuclear translocation of p50 and p65 in control group (1-hour p50: 344. 2±13. 6 vs. 79. 0±5. 2, p65:78. 4 ±4.5 vs. 0, both P＜0. 05), but not in tolerance group. In addition, the phosphorylation of p65 at serine 536 was induced after BLP stimulation in control THP-1 cells (0. 5 hour: 0. 67±0. 08 vs. 0. 04±0. 01,1 hour: 0.71±0.11 vs. 0.04±0.01, both P＜0.05), but this change was not detected in BLP-tolerant cells. Conclusion It was found that in BLP-tolerant cells, the expression of inhibitory subunit p50 was increased and the nuclear translocation and phosphorylation of p65 with trans-activation ability was inhibited.These changes are likely responsible for the reduced gene expression of NF-ΚB dependent genes in BLP-tolerant cells.     

内皮祖细胞与肝脏损伤修复

内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）是一种能分化为成熟血管内皮细胞的祖细胞,参与出生后血管的再生以及受损内皮的修复过程。近年来,围绕以内皮祖细胞为种子细胞用于促进血管新生、维持内皮功能完整、参与心血管疾病与肿瘤治疗以及组织工程及基因治疗等展开了大量的研究。本文就内皮祖细胞参与肝脏的损伤修复研究进展作一综述。     

部分门静脉动脉化对大鼠肝门部胆管的影响

目的探讨部分门静脉动脉化重建胆管血流后对大鼠肝门部胆管、肝功能及胆管上皮细胞凋亡的影响。方法 45只大鼠随机分为对照组（A组）、肝动脉结扎组（B组）和部分门静脉动脉化组（C组）,每组15只,分别于术后3d、7d和1月应用HE染色观察胆管病理学改变,检测血清ALP、GGT变化、肝门部胆管上皮细胞的凋亡情况。结果 A组各时间点肝门部胆管未见明显改变,B组术后3d,可见部分胆管上皮细胞胞质空泡化,7d胆管壁增厚,伴腺体增生,仍可见少量上皮细胞胞质空泡化,1个月胆管壁恢复正常;C组仅3d时出现胆管上皮细胞轻度水肿,无胞质空泡化及腺体增生。血清ALP、GGT均值B组最高,但无统计学意义。各组肝门部胆管上皮细胞均未检测到阳性凋亡。结论部分门静脉动脉化明显减轻肝总动脉结扎后对大鼠肝门部胆管的损害。     

Liver targeting characteristics of galactosyl poly L lysine

以还原胺化法合成了半乳糖多聚－Ｌ－赖氨酸（ＧａｌＰＬＬ）,并首次利用放射性示踪实验测定了ＧａｌＰＬＬ在小鼠体内的肝靶向特征．结果表明,ＧａｌＰＬＬ具有较高的肝靶向性,其在体内的分布形式与肝细胞去唾液酸糖蛋白受体（ＡＳＧＰＲ）的内源性配体去唾液酸胎球蛋白（ＡＳＦ）相似．１２５Ｉ标记的ＧａｌＰＬＬ经静脉注入小鼠体内后,主要被肝脏吸收,在注射后５ｍｉｎ时肝脏的最大吸收为注射总量的３８．９％,比人血清白蛋白高５．７倍．肝脏对ＧａｌＰＬＬ的吸收可特异地被ＡＳＦ及非标记的ＧａｌＰＬＬ抑制,但不能被未半乳糖基化的多聚－Ｌ－赖氨酸抑制,证明ＧａｌＰＬＬ是通过肝细胞ＡＳＧＰＲ介导的内吞作用特异地被肝脏吸收的．由于ＧａｌＰＬＬ不但具有较高的肝靶向性,而且与ＡＳＧＰＲ的天然配体相比在合成和应用方面均具有许多优势,因此有望成为进行药物或基因肝靶向运送的良好载体．     

腹腔镜胆囊切除术后选择性腹腔引流患者延长引流时间的危险因素分析

目的:探讨腹腔镜胆囊切除术后选择性腹腔引流患者引流时间大于1 d的危险因素。方法:回顾性分析2009年11月至2019年11月在解放军总医院行腹腔镜胆囊切除术后选择性放置腹腔引流管患者的临床资料。共纳入233例患者,其中男性147例,女性86例,中位年龄59.0(47.5,65.5)岁。根据术后引流时间分为引流时间1 ...