TRFIA检测胃蛋白酶原在溃疡型胃癌筛查中的价值

目的探讨时间分辨荧光分析法(TRFIA)检测血浆胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、PGⅡ和胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ比值(PGR)在溃疡型胃癌筛查中的价值。方法选取行胃镜检查的患者547例,根据胃镜和病理检查结果分为非萎缩性胃炎72例、非萎缩性胃炎伴有其他病理病变232例、萎缩性胃炎42例、消化性溃疡82例、上皮内瘤变15例、胃癌104例(溃疡型胃癌43例,其他型胃癌61例)。采用TRFIA和化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)分别检测其中447名胃病患者血浆PGⅠ、PGⅡ水平,并计算PGR值。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价PGR诊断溃疡型胃癌的效能。结果 TRFIA与CMIA检测PGⅠ和PGⅡ的结果均呈正相关(r值分别为0.894、0.982,P0.05)。TRFIA与CMIA检测PGⅠ高值(TRFIA检测PGⅠ的结果≥240 ng/mL)样本的一致性较差。与消化性溃疡组比较,胃癌组血浆PGⅠ水平及PGR显著降低(P0.05),溃疡型胃癌组PGR显著降低(P0.05),其他型胃癌组血浆PGⅠ水平显著降低(P0.05)。溃疡型胃癌组血浆PGⅡ水平及PGR显著高于其他型胃癌组(P0.05)。PGR诊断溃疡型胃癌的曲线下面积(AUC)为0.711,最佳临界值为18.20,敏感性为72.1%,特异性为70.8%;诊断胃癌的AUC为0.797,最佳临界值为18.37,敏感性为79.8%,特异性为70.8%。结论 TRFIA与CMIA检测PGⅠ、PGⅡ的结果相关性较好,TRFIA检测上限高于CMIA。PGR对溃疡型胃癌有一定的诊断价值。     

CTLA4-Ig抑制异种混合淋巴细胞反应

目的：研究共刺激分子细胞毒性T细胞抗原4（CTLA4）对人－猪异种移植反应中，T细胞活化的抑制作用。方法：用转染CTLA4－Ig融合基因的猪血管内皮细胞系（PIEC）和CTLA4－Ig融合蛋白抑制T细胞增殖反应，结果：B7／CD28共刺激信号途径在异种细胞排斥反应中起重要作用，CTLA4－Ig的抑制效应没有对同种细胞反应的影响强。结论：上述结果的机制可能是因 种间分子不相容性降低协同分子的匹配性，或者异种移植反应中其它协同分子“替代性”参与了辅佐信号的传导。     

类风湿性关节炎滑液刺激T细胞表达GADD45β机制的研究

目的 研究GADD45β在类风湿性关节炎病灶局部组织细胞中的表达、与炎症因子间的关系以及对Th1细胞活化的作用,以探讨GADD45β在RA等自身免疫病发病机制中的作用.方法 用Real-Time PCR检测RA患者滑膜组织单个核细胞(SFMC)、滑膜液单个核细胞(STMC)和外周血单个核细胞(PBMC)以及SFMC、PBMC中CD4/CD8 T细胞(磁珠法分离)中GADD45β的表达格局;用RA患者滑膜液(RA SF)刺激体外培养的健康人PBMC,用Real-Time PCR检测GADD45β和IFN-γ mRNA表达情况;SiRNA感染GADD45β基因表达.流式细胞仪检测T细胞亚群.ELISA检测细胞因子.结果 RA SFMC中GADD45β的表达水平明显高于其STMC和PBMC及健康人PBMC,且以SF中浸润的CD4 T细胞为主;RA SF可以上调健康人PBMC(主要是CD4 T细胞)中GADD45β和IFN-γ表达;用SiRNA干扰GADD45β基因转录后IFN-γ分泌减少.结论 GADD45β在RA患者滑膜组织和滑液单个核细胞中表达明显上调,并且参与SF刺激的T细胞产生IFN-γ.     

两种人乳头瘤病毒分型检测方法的比较

目的通过比较PCR联合地高辛标记探针杂交法与实时荧光定量PCR法检测宫颈液标本中人乳头瘤病毒(HPV)感染的一致性,评价PCR联合地高辛标记探针杂交法的临床应用价值。方法将4型HPV(16、51、54和56)探针3′端加尾地高辛标记,检测标记探针的灵敏度和特异性。收集63例第二代杂交捕获(HC-Ⅱ)阳性和18例HC-Ⅱ阴性的宫颈液标本,采用HPV通用引物MY11/09对所有标本L1区基因序列进行PCR扩增,利用地高辛标记探针杂交法对PCR产物进行检测分型;同时利用实时荧光定量PCR对这81例标本进行检测,将两者的检测结果进行比较。结果地高辛标记探针杂交法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型40例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,分别占HC-Ⅱ阳性标本的63.5%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;实时荧光定量PCR法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型39例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,占HC-Ⅱ阳性标本的61.9%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;重复性检测显示两种方法检测4型HPV感染的变异系数(CV)为0~1.45%和0~1.50%,检测标本中4型感染的符合率为97.5%~100%。结论PCR联合地高辛标记探针杂交法具有较好的灵敏度和特异性,可能对于临床HPV分型检测有应用价值。     

多巴胺对大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡的影响

目的研究帕金森病（ＰＤ）黑质多巴胺神经元的死亡机理。方法用脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）标记法，借助流式细胞仪和荧光显微镜观察多巴胺（ＤＡ）对大鼠嗜铬细胞瘤（ＰＣ１２）细胞凋亡的影响。结果ＤＡ可诱发ＰＣ１２细胞凋亡，适中浓度（０．４５ｍｍｏｌ／Ｌ）时ＰＣ１２细胞凋亡数最多（凋亡率为４８．７％±６．３％）；抗氧化剂二硫苏糖醇（ＤＴＴ）可部分阻止ＤＡ诱发的ＰＣ１２细胞凋亡（Ｐ＜０．０１）。结论细胞凋亡参与了ＰＤ的病变过程，采用适当的抗氧化剂可能有益于ＰＤ的治疗     

可溶性Fas,可溶性Fas配体与细胞因子在1型糖尿病发病中的意义

目的　研究可溶性Fas(sFas)和可溶性Fas配体(sFasL)与细胞因子在1型糖尿病发病中的作用。方法　32名1型糖尿病患者和20名正常人的血清,采用夹心BAS-ELISA法分别检测sFas,sFasL,γ干扰素(IFN-γ)及白细胞介素-1(IL-1)含量。结果　1型糖尿病血清中sFas,IFN-γ及IL-1含量分别为(1　　546±685,1　　074±451与1　　406±721)ng/L,显著高于正常组;sFasL为(211±73)mg/L,低于正常组但差异无显著性。在1型糖尿病患者中高浓度sFas伴高IFN-γ者共12例,低浓度sFas伴低IFN-γ者共9例。结论　1型糖尿病患者血清中的sFas,IFN-γ及IL-1高于正常人,sFas与IFN-γ浓度呈正相关(r=0.79,P＜0.05)。对1型糖尿病患者血清进行sFas,IFN-γ及IL-1等检测可作为反映胰岛细胞病变的辅助指标,有助于对疾病的诊断与治疗。     

SLE患者外周血Tc1/Tc2与CD_4/CD_(25)双阳性细胞关联性分析

目的　分析SLE患者外周血CD8淋巴细胞分泌的细胞因子与CD4/CD2 5双阳性细胞反应格局与疾病的关联性。方法　用三色免疫荧光单细胞染色法检测了 11例SLE患者外周血CD8T细胞分泌的细胞因子与CD4/CD2 5双阳性细胞的表达。结果　所检测 11例SLE患者中有 3例表现为Tc0 ,即同时分泌IFN γ和IL 4的Tc细胞。 4例以分泌IFN γ为主 ,为Tc1,4例以分泌IL 4为主 ,为Tc2。同时测定了SLE病人与正常对照组CD4/CD2 5双阳性细胞群发现CD4/CD2 5双阳性细胞群在活动期SLE中显著低下〔(17.5 4± 4 .11% ) % ,而对照组为 (35 .4 2± 3.30 ) %〕。结论　SLE患者外周血中CD8亚群表现为异质性 ,且与CD4/CD2 5双阳性细胞有关。至于其在SLE发病中的意义正在进一步研究中。     

TRAIL分子胞外区基因工程蛋白的制备与鉴定

目的 制备人TRAIL配体胞外区基因工程蛋白。方法 应用RT-PCR技术从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中扩增TRAIL配体胞外区cDNA，克隆入PCR^21载体，测序验证后用基因重组法构建了TRAIL配体胞外区和组氨酸盒的原核表达质粒pQE-hTRAIL。将重组质粒转人大肠杆菌M15中表达，经1mmol／L IPTG在37℃条件下诱导4h，亲和层析柱纯化。用SDS—PAGE电泳和Western blot鉴定表达产物。结果 所表达融合蛋白为人TRAIL配体胞外区分子，分子量30kD。表达量约为2mg／ml。结论 人TRAIL配体胞外区在大肠杆菌中得到良好表达，为深入研究TRAIL配体分子在肿瘤与自身免疫病中的可能应用提供了材料。     

Th1、Th2T细胞及其细胞因子在自身免疫性糖尿病中的作用

Ⅰ型糖尿病是T细胞介导的自身免疫性疾病,Th细胞亚群在疾病的发生过程中起了一定的作用。其中致病性免疫过程是由T细胞亚群Th1介导的,而TH2细胞亚群则是介导保护性免疫反应的。Th1型细胞因子(IL-2.IFN)通过直接促进细胞凋亡和/或上调选择性粘附分子的表达,以及Th1细胞因子可促进自身反应性T细胞在胰腺的浸润,二者均导致β细胞的破坏;Th1细胞介导的针对谷氨酸脱羧酶(GAD)的自身免疫反应增强,并通过分子内和分子间传导的机制转导至其他β细胞。Th1和Th2亚群实质上是机体在特异性抗原刺激下,Th细胞发生相对优势转化的结果。Th细胞的优势转化具有可塑性,对Th1或Th2型细胞因子或抗细胞因子单抗的研究,将为临床上自身免疫性糖尿病的治疗开辟新的途径。     

CD40L(CD154)及CD40研究进展

CD40L-CD40为体内特异性免疫反应系统重要的一对共刺激分子，参与机体的体液免疫和细胞免疫反应。在B细胞的活化与增殖分化、抗体产生及同种类型转换中起关键作用，在T细胞活化以及效应性细胞因子的分泌过程中也起重要凋节作用。CD40L-CD40信号转导途径的异常可导致机体产生免疫病理反应，应用抗CD40L的单抗(mAb)则可调控疾病的进程：我们就CD40L—CD40的研究进展进行了综述。