RNA干涉技术抑制骨肉瘤细胞MG63中Survivin基因表达的研究

目的：构建人Survivin基因的si RNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞MG63中Survivin基因表达的干涉作用。方法：应用pSilencer3.0-H1neo构建Survivin特异性RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞。HE染色观察细胞形态学变化,透射电镜观察细胞超微结构。应用RT-PCR、间接免疫荧光和western blot等方法检测Survivin的mRNA和蛋白水平变化。流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：成功构建了Survivin基因si RNA真核表达载体PsvA和PsvB,获得了稳定转染的MG63细胞。与野生型MG63、阴性对照和MG63/PsvA细胞相比,MG63/PsvB细胞增殖反应明显减弱,差异有统计学意义,P〈0.01。MG63/PsvB细胞中Survivin mRNA和蛋白表达减少。与野生型MG63、阴性对照和MG63/PsvA细胞相比,MG63/PsvB凋亡率增加7倍（P〈0.01）。结论：特异性si RNA能够明显抑制Survivin基因在MG63细胞中的表达,为进一步研究survivn在MG63细胞中的生物学功能和作用机制奠定了基础。     

关于在骨科实习教学中实施PBL教学法的思考

为适应现代社会对医学人才的要求,在骨科的实习教学中应注重学生创新能力的培养。打破学科界限,使学生在有限的时间内学到更多的科学知识、解决问题的技能和自主学习的技能。我科通过改变教师的教学观念、调整课程的设置内容及教学方法,把教学活动的主体"以学科为中心"转移到"以学生为中心"的轨道上来,教师的角色发生了转变,由知识传授者转变成为探索者和引领者,学生在主动学习的过程中体会到了探索者的乐趣。     

保留邻椎后方韧带复合体的改良后路椎间融合术临床疗效观察

[目的]比较改良PLIF手术和传统PLIF手术患者术后邻近节段退变发生的差异,探讨后方韧带复合体对预防邻近节段退变发生的意义。[方法]选取本科2010年3月²012年10月间分别行传统PLIF手术和改良PLIF手术的患者(传统组78例,改良组80例),随访122012年10月间分别行传统PLIF手术和改良PLIF手术的患者(传统组78例,改良组80例),随访12³6个月,平均28个月,选取X线评价两组患者术后邻近节段退变的差异,临床疗效采用疼痛视觉模拟评分(VAS)和Oswestry功能指数(ODI)进行评估。[结果]两组患者在性别、年龄、手术节段等一般资料间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术后末次随访时两组患者的VAS评分和ODI功能指数较术前均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),但两组间的比较无统计学意义(P>0.05)。末次随访时,改良组9例出现影像学退变(退变率为11.3%)、3例症状学退变(退变率为3.8%),传统组32例出现影像学退变(退变率为41.0%)、11例症状学退变(退变率为14.1%),两组间差异均有统计学意义。影像学退变与临床疗效间无明显相关性(P>0.05),只有症状学退变与临床疗效相关(P<0.05)。[结论]保留邻椎后方韧带复合体的改良PLIF手术与传统PLIF手术相比,术后邻近节段退变率明显降低,后方韧带复合体在防止邻近节段退变发生中起到重要作用。     

预变性神经移植促进神经再生的动物实验

背景：许多研究均认为预变性神经移植优于新鲜神经移植。 目的：通过兔腓总神经不同时限预变性神经移植，从组织学、免疫组织细胞化学、电生理、超微结构等多方面观察预变性对神经功能恢复的影r响。设计：分组对照实验。单位：解放军第四军医大学唐都医院全军骨科中心，解放军第四军医大学西京医院骨科。 材料：成年家兔42只，体质量2．3-2．6kg，雌雄不拘。 方法：实验于1996年于第四军医大学西京医院全军骨科中心完成。家兔42只分为A，B，C，D，E，F，G7组，A，B，C，D，E，F组分别为预变性0，4，7，14，21，28d，B，C，D，E，F组切断腓总神经；A组动物切开皮肤，暴露但不切断神经。G组只切段右侧腓总神经。B，C，D，E，F组分别于术后4，7，14，21和28d重新暴露已切断的神经，取远段1．5cm变性神经段移植修复对侧神经，双侧交叉移植。A组2周后重新暴露腓总神经，同法切取1．5cm神经段左右交叉移植。G组2周后将右侧预变性神经段移植到左侧新鲜受体床，左侧新鲜神经段移植到右侧预变性受体床。 主要观察指标：①神经再生起初延迟期及生长速度。②神经-肌肉传导速度。③组织学观察、计数轴突通过率。 结果：①D组2周预变性神经移植与新鲜神经移植相比可显著降低轴突再生起初延迟期（由3．04降至0．04d）；提高神经生长速度（由1．73-2．59mm／d）；电生理示：D，C，B组神经-肌肉传导速度最快，其次是A和E组，F组最慢；D组轴突通过率与C组比较无明显差异。②术后6周D组动物大量成熟髓鞘出现．C组动物中等量髓鞘出现，A，B，E及F组偶见髓鞘。 结论：预变性神经移植在降低轴突再生起初延迟期、促进轴突再生速度、增强轴突通过率、提高神经-肌肉传导速度方面优于新鲜神经移植。预变性2周神经移植质量最佳，其次是预变性1周神经移植，预变性4d和3周也有增强神经再生的作用。     

编读往来

尊敬的编辑老师: 你们好,我是西安市周至县马召镇的一位医务工作者,也是《中国初级卫生保健》的忠实读者,之所以连续几年订阅贵刊,还有段特殊的情况与经历。 2000年3月间,我从未想到的是,作为长期给患者治病的自己,却不幸患上了糖尿病。经自治,又在省城等几家大医院治疗将近1年,花费3万多元,但病情始终反反复复未能治愈。面对债台高筑的家境、日渐消瘦的身体与无法工作的现     

组织工程化骺板的研究进展

<正>近年来,组织工程技术的飞速发展给骺板损伤的治疗带来了新的机遇。近年来国内外学者对组织工程骺板的研究取得了一些进展。现就组织工程化骺板种子细胞和支架材料的研     

临床骨科见习教学浅见

见习教学是临床医学教学工作的重要组成部分,骨科见习又是外科见习的重点与难点之一。通过多年的教学实践,结合当前的医疗现状,我们以医德教育、素质教育为本,启发学生正确的临床思维,锻炼学生良好的临床基本工作能力,取得了较好的效果。本文对此进行总结归纳,以期为进一步提高骨科临床教学工作质量提供参考。     

椎管内肿瘤的临床诊断及手术效果

目的:总结椎管内肿瘤诊断重点、评价手术疗效并解析相关注意事项.方法:回顾性分析我科2006年10月-2014年10月收治的164例经手术治疗椎管内肿瘤患者的临床资料,总结诊断重点、评析手术疗效及相关注意事项.结果:椎管内肿瘤临床症状迥异多变,主要表现为疼痛、感觉及运动障碍,且症状与肿瘤所处节段、部位、大小密切相关.MRI诊断肿瘤及定位准确率100％,其中122例术前MRI定性诊断与术后病理诊断相符合,占74.4％.肿瘤复发8例.末次随访时ASIA分级除10例患者无改变和4例患者加重外,余150例患者均有1-2级改善,与术前比较差异有统计学意义(Z=-12.617,P=0.000).行脊柱椎弓根螺钉内固定57例(颈椎11例,胸椎3例,腰椎43例),164例患者术后脊柱均稳定.4例并发脑脊液漏,2例并发术后血肿,经处理治愈.结论:椎管内肿瘤临床表现复杂多变,MRI有肿瘤定位、定性、判断脊髓神经受压、缺血状态、指导手术等意义.后路手术显露范围及脊柱稳定重建与否应据肿瘤所处节段、节段脊柱结构缺失程度、功能需要等综合决定.手术及神经功能风险预估应与患者良好沟通.     

反义RNA抑制Survivin在人骨肉瘤细胞系MG63中表达的实验研究

[目的]研究人骨肉瘤细胞MG63中反义RNA对Survivin表达的抑制作用。[方法]培养骨肉瘤细胞MG63，采用RT—PCR的方法克隆人Survivin基因编码区cDNA。构建Survivin的反义诱导表达载体。转染MG63细胞，G418筛选稳定转染的细胞系。稳定转染的细胞系，以ZnSO4 120μmol／L诱导，HE染色、Survivin免疫细胞化学染色透射电镜等形态学观察。绘制生长曲线。RT—PCR检测各组细胞Survivin的表达。Annexin V法检测细胞凋亡。[结果]RT—PCR从MG63细胞mRNA扩增了Survivin编码区cDNA，约420bp。构建了pMDNA3-anti—Survivin重组质粒。转染MG63细胞，G4181000μg/ml筛选4周后，建成稳定转染细胞系。通过ZnSO4 120μmol／L诱导，电子显微镜观察可见MG63／pMDNA3-anti—Survivin细胞出现凋亡。免疫细胞化学染色可见诱导后的MG63／pMDNA3-anti—Survivin Survivin蛋白表达明显降低。AnnexinV染色后发现pMDNA3-anti—Survivin细胞，在ZnSO4诱导48h后凋亡率达到11％，较对照组高出3倍。[结论]Survivin的反义RNA能够有效的抑制Survivin的表达，从而抑制肿瘤生长，并促进肿瘤细胞凋亡．