剪碎法及匀浆法制备兔肌肉VX2肿瘤单细胞悬液的方法比较

目的:比较剪碎法和匀浆法制备兔肌肉VX2肿瘤单细胞悬液的效果。方法:实验于2006-10-25/2007-04-01在安徽医科大学第一附属医院中心实验室进行。切取兔肌肉VX2肿瘤组织块,分别采用剪碎法和匀浆法制备兔肌肉VX2肿瘤单细胞悬液。经苏木精-伊红染色,光学显微镜观察细胞形态学差异,并行AnnexinV/PI双染法,流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞坏死率的差异。结果:①细胞形态:匀浆法细胞产率高,细胞形态完整,细胞分布均匀,细胞碎片及细胞团较少;而剪碎法所得细胞悬液在光镜视野中有较多的杂质和细胞团,完整的细胞相对较少。②流式细胞仪分析结果:匀浆法制备的单细胞悬液左下象限正常细胞分布较集中,右下象限凋亡细胞较少,左上象限坏死细胞及细胞碎片较少;所得细胞凋亡率和细胞坏死率值明显低于剪碎法[细胞凋亡率:(8.90±1.24)%,(15.75±1.53)%;细胞坏死率(35.22±1.56)%,(40.16±1.68)%,P均<0.01]。结论:用匀浆法制备兔肌肉VX2肿瘤单细胞悬液优于剪碎法。     

接受择期PCI术的急性冠脉综合征患者外周血单核细胞Toll样受体4表达及强化阿托伐他汀治疗对其的影响

目的：探讨接受择期经皮冠状动脉介入治疗( PCI )术的急性冠脉综合征( ACS)患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达水平与ACS发生和冠脉病变严重程度的相关性,同时观察强化阿托伐他汀治疗对TLR4表达的影响。方法选取行择期PCI术的ACS患者75例,随机分为强化组和常规组,强化组入院后予以阿托伐他汀40 mg/d,PCI术后持续,4周后减量至20 mg/d;常规组入院后予以阿托伐他汀20 mg/d,PCI术后持续,4周后仍维持20 mg/d。采用流式细胞仪检测入院时和4周后患者外周血单核细胞 TLR4表达水平的变化,采用Gensini评分反映冠脉病变严重程度。同时选择健康体检者20例作为正常对照组。结果①与正常对照者相比,ACS患者外周血单核细胞TLR4表达明显升高,急性心肌梗死( AMI)患者明显高于不稳定性心绞痛( UP)患者,3支病变者明显高于1支、2支病变者,差异均有统计学意义(P<0．01);相关分析和多元逐步线性回归分析结果显示ACS类型、冠脉狭窄积分、冠脉病变支数与外周血单核细胞TLR4表达水平呈正相关性,对其影响最大( P<0．05)。②阿托伐他汀治疗4周后两组外周血单核细胞TLR4表达、总胆固醇( TCH )、低密度脂蛋白胆固醇( LDL-C)、甘油三脂( TG)明显降低,高密度脂蛋白胆固醇( HDL-C)明显升高,差异均有统计学意义( P<0．01);与常规组相比,强化组外周血单核细胞TLR4表达、TCH、LDL-C降低更显著,HDL-C升高更显著,差异均有统计学意义( P<0．01)。结论外周血单核细胞TLR4表达增加与ACS发生和冠脉病变严重程度密切相关,强化阿托伐他汀治疗明显降低行择期PCI术的ACS患者外周血单核细胞TLR4表达。     

乳腺癌生物标志物CK19、HER2和血清CEA、CA153联合检测的临床意义

目的探讨血清和生物肿瘤标志物CEA、CA153、CK19、HER2检测在乳腺癌诊断中的临床价值。方法选取不同临床分期乳腺癌患者145例,乳腺疾病60例,正常对照50例。应用蛋白芯片法、流式细胞术和荧光原位杂交技术测定其水平和阳性表达率。结果 CEA、CA153水平在不同临床床分期乳腺癌各组中差异均具有统计学意义(P0.05),在HER2表达为阳性的不同临床分期各组中差异均具有统计学意义(P0.01);CEA、CA153、CK19阳性表达率在不同临床床分期乳腺癌各组中差异均具有统计学意义(P0.05),而在HER2表达为阳性的平在不同临床床分期乳腺癌各组中,Ⅰ+Ⅱ期乳腺癌组分别与Ⅲ期、Ⅳ期乳腺癌组相比较,显示出差异具有统计学意义(P0.01),但Ⅲ期与Ⅳ期之间比较则差异无统计学意义(P0.05)。结论 CEA、CA153、CK19为乳腺癌重要的肿瘤标志物,测定其水平和阳性表达率可作为临床病情和疗效监测的辅助手段。     

心肺复苏及复苏后治疗的临床分析

就我院急诊重症加强治疗病房(EICU)心肺复苏(CPR)一个繁重复杂的工作任务情况总结如下.     

17β-雌二醇对神经干细胞分裂分化作用的观察

目的　探讨雌激素对神经干细胞分裂分化的作用。方法　大鼠神经干细胞培养模型加入剂量为 10mg/L 17β 雌二醇和 10mmol/LBrdU ,分别在培养 4、12h取出细胞 ,进行免疫细胞化学标记。结果　培养 4h ,雌二醇组单位面积细胞总数和BrdU标记细胞与对照组比较差别无显著性 (P=0 2 5 9,P =0 0 6 7) ,培养 12h ,雌二醇组细胞BrdU胞核着色变浅 ,胞浆有着色 ,有 4 0 %的细胞可见明显突起 ,单位面积的细胞总数较对照组无显著性改变 (P =0 0 6 ) ,BrdU标记细胞数目减少 (P =0 0 0 3) ,提示分裂细胞减少。另一方面 ,培养 12h时的雌二醇处理组BrdU免疫荧光阳性细胞的光密度 (OD)显著高于对照组 (P <0 0 1)。结论　 17β 雌二醇可以抑制大鼠神经干细胞分裂 ,促进神经干细胞分化。     

日本斑点热立克次体近缘株重组OmpB蛋白抗原性研究

目的 探讨关于斑点热立克次体的临床诊断及流行病学调查而进行的诊断方法学研究.方法 构建R.Japonica Anhui 120 strain OmpB原核表达质粒,表达、鉴定并纯化重组蛋白,用其作为抗原建立间接ELISA检测方法,检测120份临床样本中日本斑点热立克次体特异性IgG抗体,并评价方法的敏感性和特异性.结果 获得了高表达、高纯度的OmpB重组蛋白,建立的间接ELISA方法体系与美国食品和药物管理局认可的诊断试剂盒相比有良好的特异性和敏感性,两者的特异性为100％,敏感性为96.7％,符合率为99.2％,Kappa值为0.98.结论 OmpB重组蛋白具有很好的免疫反应性,能特异地检出斑点热立克次体IgG抗体,间接ELISA方法可作为临床诊断的技术储备及流行病调查和科学研究.     

发热伴血小板减少综合征病例血细胞胞内病毒含量的检测方法研究

目的拟构建发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome, SFTS)病例外周血各群白细胞中发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV)感染率的流式细胞检测方法, 为临床评估病例预后, 靶细胞和相关机制研究提供新工具。方法建立检测非洲绿猴肾细胞系(VERO-E6)和人单核白血病细胞系(THP-1)细胞SFTSV感染率的流式方法, 并与定量反转录PCR(qRT-PCR)方法比较验证。应用流式细胞术检测SFTS病例外周血各亚群白细胞胞内SFTSV含量, 并与单细胞测序比较验证, 流式细胞检测结果与病例相关临床数据进行独立样本t检验。结果 qRT-PCR和流式细胞检测结果一致, SFTSV感染后3 d内VERO-E6内病毒含量显著梯度升高, 而THP-1内病毒含量变化不明显。流式细胞技术在部分SFTS病例的B淋巴细胞检测出SFTSV阳性, 与单细胞测序结果一致。结论流式细胞检测胞内SFTSV, 相对于qRT-PCR更适用于混合细胞样...     

不同年龄段慢性肝衰竭患者自体骨髓干细胞体外增殖能力观察

目的观察不同年龄段慢性肝衰竭患者自体骨髓间充质干细胞体外增殖能力的特点。方法在慢性肝衰竭患者30例和非肝病患者30例,各分3个组,即A组为20～35岁,B组为35～55岁和c组为〉55岁。取骨髓血50毫升,采用密度梯度离心法分离出单个核细胞,接种于56．7cm2培养皿内,观察细胞生长情况,并在第7天计数集落形成单位;当贴壁细胞融合后进行传代,计算增至治疗所需细胞数量的传代时间和细胞增殖率。结果在慢性肝衰竭患者,A组为6例,B组为18例,C组为6例;在非肝病组,分别为7、12和11例;在肝衰竭患者A组、B组和C组每皿细胞集落单位分别为15.3±8．7×10^6、8．6±5．2×10^6和4．2±3．6×10^6,而在非肝病患者则分别为14．7±7．1×10^6、13．5±7．4×10^6和10-3±4．9×10^6（P〈0．05）;第一代细胞倍增时间比较,肝衰竭患者A组、B组和C组分别为178．7±79．6h、264．1±102．3h和457．7±155．6h,而非肝病患者则分别为1563±62．5h,192．7±88．6h和311．6±142．8h（P〈0．05）;第二代细胞倍增时间比较,肝衰竭患者也明显比非肝病患者延长。结论大于55岁的慢性肝衰竭患者自体骨髓十细胞体外增殖能力明显降低。在选择千细胞移植治疗时,宜选择其他来源的细胞。     

机械通气在急性心肌梗死中的应用体会

机械通气治疗急性心肌梗死（AMI）所致心搏骤停及心力衰竭（心衰）的研究已取得了很大进展。现将我科应用情况报告如下。