对梭子蟹过敏患者血清特异性IgE抗体针对的过敏原的异质性分析

目的分析梭子蟹过敏患者血清特异性IgE(sIgE)抗体所针对过敏原的异质性。方法提取梭子蟹蛋白质溶液,经酶免疫印迹技术,分析50例梭子蟹过敏患者血清sIgE与梭子蟹蛋白质发生特异性结合的不同区带,并分析个体间的差异。结果针对分子量(Mr)36 000蛋白质的sIgE在患者人群中出现的频率高达80%(40/50),针对Mr 48 000、43 000蛋白质的sIgE分别达62%(31/50)和50%(25/50)。反应条带为3条及3条以上的患者总数占92%(46/50),6条反应条带的患者达30%(15/50)。结论对梭子蟹过敏患者血清中sIgE所针对的过敏原组分存在明显异质性。     

卵巢癌患者TH1／TH2型细胞因子的测定

[目的]探讨THl／TH2型细胞因子水平与卵巢癌患者发生、发展之间的关系。[方法]采用夹心酶联免疫吸附实验和逆转录PCR法,对36例卵巢癌及32例健康对照组外周血淋巴细胞中TH1／TH2型细胞因子的蛋白水平及其mRNA水平进行了测定。[结果]与健康对照组相比,卵巢癌患者外周血淋巴细胞培养上清中的IL-2、IFN-v水平显著降低,而IL-4、IL-6和IL-10则显著增高,具有统计学意义。相应的外周血淋巴细胞mRNA水平与蛋白水平相同。(结论]卵巢癌患者异常分泌的TH1／TH2型细胞因子水平与卵巢癌的发生、发展密切相关。     

抗人抗凝血酶Ⅲ单克隆抗体的制备

抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)是血浆中抑制凝血的关键物质,约占血浆总抗凝血酶活性的50%～70%,它可直接抑制凝血酶,也可与凝血酶形成复合物(TAT),抑制多种凝血因子的活性[1].动物实验显示,在内毒素休克、弥散性血管内凝血(DIC)鼠动物模型中,DIC早期血清AT-Ⅲ水平下降较其它DIC指标出现早,而且在DIC发病后1小时内注射AT-Ⅲ,结果证实有预防或延缓DIC的治疗作用[2].     

新型食物不耐受sIgG定量检测方法的构建

【摘要】目的以检测鸡蛋特异性免疫球蛋白G（sIgG）为例,探讨新型食物不耐受的定量检测方法。方法选择行食物过敏原sIgG检测的患者173例,另择健康体检者78例为阴性对照。制备生物素化牛血清白蛋白-链酶亲和素酶标反应板,同时加入生物素化鸡蛋抗原和待检血清,洗涤后再加入酶标记抗人IgG,建立一种抗原间接包被-液相反应模式的酶联免疫方法;优化生物素化过敏原和酶标记抗体的浓度,确定反应条件。应用此方法检测血清标本中的sIgG。结果选用生物素化蛋清作为抗原,其最适稀释比例是1∶2000,酶标抗体的最适稀释比例是1∶12000。此方法批内及批间变异系数分别为4.83%~8.55%,4.88%~7.93%;与蟹、牛奶、羊奶等的交叉反应率均<10%;与临床现用食物不耐受sIgG检测法有较好的相关性（=0.977X+8.45,r=0.961, P<0.05）。结论本检测方法可用于检测鸡蛋不耐受患者血清sIgG,操作简便,具有较高的准确性和特异性,重复性好,并显示较好灵活性潜能,为今后研制“个性化”随机组合食物品种的检测试剂盒奠定基础。     

过敏原特异性IgE抗体实验室检测及其临床应用

摘要：过敏原特异性IgE(sIgE)抗体检测对过敏性疾病的诊断和治疗具有重要价值。从待检抗体角度分析，sIgE抗体检测分为sIgE抗体物质含量检测和sIgE抗体病理活性检测，前者采用免疫化学(血清学)方法，后者采用细胞生物学方法。血清学检测为临床实验室常用方法，涉及斑点-酶免疫吸附试验(Dot-ELISA)、ELISA和荧光酶免疫分析(FEIA)等标记免疫技术。从已知抗原角度分析，sIgE抗体检测分为混合组分诊断(MRD)和单一组分诊断(CRD)。CRD可获得sIgE抗体谱结果，为临床提供更丰富的诊断信息。无论采用何种标记免疫技术，sIgE抗体实验室检测已从定性分析发展到定量分析，且分析灵敏度不断提升，这将逐渐满足临床诊断的需求，提高过敏性疾病的诊断和治疗水平。     

血清促红细胞生成素的双抗体夹心ELISA法和ELISA试剂盒的建立及其方法学研究

目的建立血清促红细胞生成素（EPO）的EUSA试剂盒及一种检测血清EPO的双抗体夹心ELISA方法,并对其临床检测方法学进行研究。方法EPO抗体用缓冲液稀释,150μL/孔滴加到96孔板,用以包被。以正常人血清和临床血清为标本,用ELISA法观察其灵敏度、回收率、线性试验、稳定性。结果最佳包被抗体浓度为1：600,最佳抗原工作浓度为1：100,酶标抗体工作浓度为1：5000。标准曲线的回归方程为：y=0．017x＋0．3002,r=0．9710,P〈0．05。灵敏度为0．46U／L,高、低浓度样品平均回收率分别为106．74％、104．78％。血清标本20、80U/L批内变异分别为3.044％、7．964％,批间变异分别为1．379％、12．915％。结论双抗体夹心ELISA法检测血清EPO,其敏感性、特异性、准确度均良好,为临床快速、准确、方便检测EPO提供了实验依据．     

酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402细胞的抑制作用及对NK细胞杀伤活性的影响

[目的]研究三肽化合物酪丝亮肽(tyroserleutide,YSL)对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤的抑制作用及对自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性的影响。[方法]建立人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤模型,观察YSL对肿瘤生长的抑制作用;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测YSL对正常小鼠及人肝癌BEL-7402荷瘤鼠的NK细胞杀伤活性的影响。[结果]YSL[160μg(/kg·d)]能抑制BEL-7402的生长,肿瘤抑制率为72.23%,且能增强BEL-7402荷瘤裸鼠及正常小鼠NK细胞杀伤活性,与生理盐水组相比均具有显著性差异(P<0.05)。[结论]YSL对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤有抑制作用,并具有增强正常及荷瘤小鼠NK细胞杀伤肿瘤细胞活性的作用。     

虾有效致敏组分的提取及在sIgE检测中的初步应用*

目的 通过改善虾类包被抗原质量,提高血清sIgE检测的敏感性。方法 制备中华对虾蛋白溶液,经葡聚糖凝胶层析初步分离大于55KD蛋白组分,经SDS-PAGE技术分析其蛋白组成,采用酶免疫印迹和酶联免疫法初步评价纯化后抗原是否能够提高血清sIgE检测结果的敏感性。结果：葡聚糖凝胶层析法可初步分离>55kD的蛋白组分,其中主要包含10条明显蛋白条带;如以纯化后蛋白作为包被抗原,斑点酶免疫印迹显示,可提高弱阳性血清斑点光密度。同时,两种包被抗原的酶联免疫吸附试验结果显示,虾有效致敏成分作为包被抗原时,92.9%的虾过敏患者血清sIgE检测值升高。结论 采用中华对虾有效致敏原组分作为虾过敏检测抗原,有望提高血清sIgE检测结果的敏感性。     

大黄素对大鼠腹腔巨噬细胞产生的TNFα、IL-1、IL-6及细胞[Ca2+]i的影响

目的 研究中药大黄有效成分大黄素对不同状态下的巨噬细胞分泌TNFα、IL-1、IL-6和[Ca^2 ]i的方法。利用脂多糖（lipopolysacchride,LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞作为过度炎症反应的体外模型,用生物学方法和荧光分光光度法测定巨噬细胞合成分泌的TNFα、IL-1、IL-6和[Ca^2 ]i。结果 大黄素对TNFα的分泌和[Ca^2 ]i有双向调节作用。结论 大黄素可能具有免疫双向调节功能。