鼻咽癌抗独特型抗体诱导的体液和细胞免疫应答

目的 探讨抗独特抗体２Ｈ４和５Ｄ３模拟抗原诱导免疫应答的能力。方法 用Ａｂ２免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠获得抗血清,以ＥＬＩＳＡ检测其Ａｂ３,Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ分析其识别抗原的分子质量。用迟发型超敏反应（ＤＴＨ）和淋巴细胞增殖试验,检测Ａｂ２诱发细胞免疫反应的能力。结果 ２Ｈ４,５Ｄ３免疫同系动物产生的含有抗抗蚀特型抗体（Ａｂ３）的抗血清,可特异性地与靶细胞结合。ＦＣ２（Ａｂｌ）和经２Ｈ４免疫的Ａｂ     

从人源单链抗体库中筛出具有抗原结合活性的重链可变区和更小抗体片段

目的：用噬菌体呈现技术结合体外致敏法构建了人源单链抗体库,并用大肠癌相关抗原ＣＡＨｂ３筛选出抗大肠癌噬菌体抗体克隆ＥＬ５Ｄ、ＥＬ６Ｄ和Ｃａ１２,测定３个克隆的核苷酸序列,并研究其免疫活性。方法：采用抗体克隆扩增、测序分析、免疫组化法测定活性。结果：抗体基因插入片段分别为２２０、５００、５００ｂｐ。测序结果表明,ＥＬ６Ｄ和Ｃａ１２属ＶＨ５ＤＪＨ４,仅为ＶＨ结构亚单位,而ＥＬ５Ｄ属Ｖκ的Ｊκ１,仅为ＦＲ３ＣＤＲ３ＦＲ４结构。三者均能与人结直肠癌细胞和组织反应,与其亲本鼠源单抗Ｈｂ３的结合特性一致。３个抗体克隆已列入国际基因库,序号为ＡＦ０５１１６５ＡＦ０５１１６７。结论：短的人源抗体片段具有潜在临床应用价值。     

大肠癌相关抗原基因CRC-L-10的生物信息学分析

目的探讨推测CRC-L-10基因的生物学功能与特性。方法应用美国国家生物信息中心(NCB I)的核酸数据库、EST数据库和相应软件对大肠癌相关抗原基因CRC-L-10的组织分布情况及其基因和蛋白质序列进行分析。结果大肠癌相关基因CRC-L-10定位于15q25.2,最长开放阅读框为579 bp,编码192个氨基酸,广泛表达于许多正常组织如前列腺、肌肉、皮肤等,但在肝癌、卵巢癌、睾丸癌、结肠癌等肿瘤组织中表达明显上调,而在相应正常组织中低表达。结论大肠癌相关抗原基因CRC-L-10编码的抗原可能与人类多种肿瘤的发生发展密切相关。     

人新型干扰素κ的基因克隆、表达、纯化及其抗病毒活性的初步研究

目的制备人干扰素κ(hIFNκ)并初步研究其生物学活性。方法克隆hIFNκ的cDNA并根据大肠埃希菌的密码子偏好性人工合成了hIFNκ基因,在大肠埃希菌DH5α中高效表达、纯化后测定了rhIFNκ的多种生物学活性,包括抗病毒活性、抗细胞增殖活性、种属特异性以及NK细胞调节活性。结果成功地获得了高纯度的rhIFNκ,纯度在90%以上。利用WISHVSV系统检测rhIFNκ的抗病毒活力为2.0×106IU/mg。与rhIFNα2b的比较发现,rhIFNκ无论在抗病毒活性、细胞生长抑制,还是在促NK细胞活性方面均弱于前者。结论rhIFNκ在不同种属来源细胞上的抗病毒活性因种属来源而异,不同的病毒对rhIFNκ的敏感性是不同的。     

具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型抗体研究

用抗人鼻咽癌单抗FC2,HNL5(Ab1)分别免疫Balb／C小鼠,制备了两株抗独特型抗体2H4和5D3(Ab2)。结果显示：2H4和5D3分别与FC2和HNL5特异性结合,抑制Ab1与靶细胞的反应,诱导产生能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体(Ab3);并能诱发特异性迟发型超敏反应(DTH)和细胞增殖反应。表明2H4和5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像(Ab2β),能模拟鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫反应。     

人新型干扰素K的基因克隆、表达、纯化及其抗病毒活性的初步研究

目的制备人干扰素κ(hIFN-κ)并初步研究其生物学活性.方法克隆hIFN-κ的cDNA并根据大肠埃希菌的密码子偏好性人工合成了hIFN-κ基因,在大肠埃希菌DH5α中高效表达、纯化后测定了rhIFN-κ的多种生物学活性,包括抗病毒活性、抗细胞增殖活性、种属特异性以及NK细胞调节活性.结果成功地获得了高纯度的rhIFN-κ,纯度在90%以上.利用WISH-VSV系统检测rhIFN-κ的抗病毒活力为2.0×106 IU/mg.与rhIFN-α2b的比较发现,rhIFN-κ无论在抗病毒活性、细胞生长抑制,还是在促NK细胞活性方面均弱于前者.结论rhIFN-κ在不同种属来源细胞上的抗病毒活性因种属来源而异,不同的病毒对rhIFN-κ的敏感性是不同的.     

趋化因子MCP-3基因和B7基因共转染诱导抗大肠癌主动免疫

目的：探讨趋化因子MCP－3（monocyte chemotactic protein-3）和B7基因共转染诱导抗大肠癌主动免疫的可能性。方法：用脂质体将小鼠MCP－3和B7（B7．1）基因导入小鼠大肠癌CMT93细胞，G418筛选抗性克隆，RT－PCR检测B7和MCP－3的表达，趋化实验检测MCP－3的功能。体内实验观察基因修饰瘤细胞（CMT93／B7＋MCP－3）的成瘤性、免疫小鼠后所诱导的针对CMT93的免疫保护及其作为疫苗治疗已形成肿瘤的疗效。结果；RT－PCR检测发现CMT93／B7＋MCP－3瘤细胞有B7和MCP－3的表达，而且所表达的MCP－3有良好的趋化活性。CMT93-/B＋MCP－3的成瘤性显著下降（P＜0．01）。经CMT93／B7＋MCP－3免疫的小鼠获得对CMT93的免疫保护（P＜0．05）。作为疫苗CMT93／B7＋MCP-3能抑制接种早期肿瘤的生长。结论：共转染MCP－3和B7基因能有效诱导抗大肠癌主动免疫，共转染的细胞作为疫苗治疗已形成的肿瘤有一定的疗效。     

大肠癌相关抗原CA-Hb3的提取、亲和层析纯化及其生物学特性

方法：应用ＴｒｉｔｏｎＸ１００和正丁醇分别提取了大肠癌组织粗提抗原和大肠癌细胞株ＨＲＴ－１８的ＣＢＥ（正丁醇提取物），二者均有抗原活性。抗原经抗大肠癌单抗Ｈｂ３－亲和层析进一步纯化，获得纯大肠癌相关抗原ＣＡ－Ｈｂ３。结果：经鉴定，ＣＡ－Ｈｂ３为糖蛋白，其抗原活性与糖链有关。其分子量随变性程度而异，变性完全（１００℃巯基乙醇作用５ｍｉｎ）时为５０ｋＤ，而变性不完全（１００℃３ｍｉｎ）约２７ｋＤ，故推测该抗原是由两个亚基（约２７ｋＤ）组成的同源二聚体。结论：在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定蛋白质分子量时，使用不同变性时间处理样品可研究其亚基组成     

噬菌体抗体库的筛选策略

自从噬菌体抗体库技术建立以来 ,该技术已成为筛选特异抗体的强有力工具 ,噬菌体通过其表面的抗体与相应的抗原特异性结合作亲和性选择 ,非常罕见的克隆能被有效地选择。噬菌体抗体库技术为快速选择特异性抗体提供了简便而高效的可操作系统 ,在制备人源化抗体方面已经显示其强大的生命力     

具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型抗体研究

用抗人鼻咽癌单抗FC2 ,HNL5 (Ab1)分别免疫Balb/C小鼠 ,制备了两株抗独特型抗体 2H4和 5D3(Ab2 )。结果显示 :2H4和 5D3分别与FC2和HNL5特异性结合 ,抑制Ab1与靶细胞的反应 ,诱导产生能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体 (Ab3) ;并能诱发特异性迟发型超敏反应 (DTH)和细胞增殖反应。表明 2H4和 5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 (Ab2 β) ,能模拟鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫反应。