芦荟多糖对正常细胞株和肿瘤细胞株辐射防护作用的差异性

芦荟多糖(Aloe Polysaccharides, AP)是从中华芦荟提取得到的粗多糖,研究表明其对辐射动物具有显著的保护作用[1],对非瘤细胞辐射后细胞凋亡及凋亡蛋白的表达也有显著调节作用[2].本文观察AP对正常细胞株和肿瘤细胞株的辐射防护作用是否具有差异性.     

shRNA抑制SGC7901胃癌细胞绿色荧光蛋白基因的表达

目的：观察针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹结构RNA(small hairpin RNA，shRNA)表达载体(SHi—pU6-GFP)对SGC7901胃癌细胞中GFP的抑制作用。方法：设计针对GFP基因的shRNA序列．构建SHi—pU6-GFP质粒。采用质粒pCX—GFP(5510bp)和含有鼠U6启动子pU6（3．3kb)质粒，应用Lipofectamine^TM2000将pCX-GFP质粒和SHi—pU6-GFP质粒转染SGC7901细胞。荧光显微镜观察转染效果和不同时间的转染效率。结果：质粒SHi-pU6-GFP经酶切电泳后，出现3．3kh和约350bp条带，与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符。说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHi—pU6-GFP质粒。SGC7901细胞中观察到转染pCX—EGFP质粒和SHi—pU6-GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少：结论：shRNA可以有效地抑制SGC7901细胞中GFP基因的表达。     

血脂水平与脊髓型颈椎病患者椎间盘退变的相关性分析

目的:研究脊髓型颈椎病患者血脂水平与颈椎间盘退变的相关性。方法:收集弋矶山医院骨科44名脊髓型颈椎病患者年龄、高血压史等一般信息,男性18例,女性26例,并收集12例颈部脊髓损伤患者作为对照组。收集患者住院期间所做MRI检查以及空腹血脂参数,根据改良的Pfirmann椎间盘退变分级对患者的致病椎间盘进行评分和记录。结果:脊髓型颈椎病患者年龄和颈椎退变呈正相关(P<0.05)。在患者血脂参数与椎间盘退变的分析中,患者总胆固醇(GHOL)、甘油三脂(TG)水平与患者椎间盘退变呈正相关(P<0.05),而低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)与椎间盘退变相关性无统计学意义(P>0.05)。结论:高龄、高甘油三酯和高总胆固醇能够加重椎间盘退变,是引起颈椎病的危险因素。     

米托蒽醌对肿瘤细胞DNA引物酶-多聚酶α复合体活性的抑制作用

目的进一步探讨米托蒽醌抗癌作用机制，为临床联合用药提供理论指导。方法以小鼠艾氏腹水癌细胞破碎液为材料，通过ＤＥ－５２和Ｐ－１１层析柱，提取ＤＮＡ引物酶－多聚酶α复合体，研究米托蒽醌对ＤＮＡ引物酶－多聚酶α复合体活性的影响以及对引物合成和引物延长活性的作用。结果检测ＤＮＡ引物酶－多聚酶α复合体的比活性为６．０１３３×１０６Ｕｇ－１。米托蒽醌抑制ＤＮＡ引物酶－多聚酶α复合体活性的ＩＣ５０值为（１３．５４±０．８９）μｍｏｌＬ－１，随着药物浓度的增加，对ＤＮＡ引物酶－多聚酶α复合体活性的抑制作用增强。进一步研究米托蒽醌对引物合成或延长影响时发现，其对引物合成几乎无作用，可见是对ＤＮＡ引物酶－多聚酶α复合体的延长活性起抑制作用。结论米托蒽醌对ＤＮＡ复制的影响至少部分是因抑制ＤＮＡ引物酶－多聚酶α复合体的引物延长活性。     

茶多酚对人癌细胞和人体细胞增殖及凋亡的实验研究

目的 选用4种人癌细胞和3种人体正常细胞进行试验，比较茶多酚(TP)对人肝癌细胞Bel—7402等和人体肝细胞CLC增殖周期的影响和诱导凋亡的作用。方法 用MTT法测定TP对人癌细胞和人体正常细胞的细胞毒作用，用流式细胞仪(FCM)观察TP对细胞的周期改变和诱导凋亡作用。结果 TP对人癌细胞Bel—7402，CNEl，KB和H—29的IC50依次为68．2，104．63，119．83和148．61μg／mL；对人体正常细胞CLC，HEK—293和HD—MEC的IC50均＞400μg／mL。150和300μg／mL TP处理Bel-7402细胞12，24和36h，细胞凋亡率分别为13．2％，37．6％，40．7％和17．1％，39．9％，57．7％。表明TP可诱导Bel—7402细胞凋亡，使细胞周期停滞于S—G2／M期，而对CLC细胞无此作用。结论 TP对人癌细胞的细胞毒作用显著高于对人体正常细胞的作用，提示TP对人癌细胞有一定的选择杀伤作用。     

人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定

【目的】构建表达人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段,克隆到pGEM-Teasy载体上。测序鉴定后切下相应的片段,连接到表达载体pET-22b(+)上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DL3),使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白D1及CDK4。SDS-PAGE电泳及Westernblotting鉴定表达蛋白。【结果】用PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成pET-cyclinD1和pET-CDK4两个原核表达载体。将其转化大肠杆菌,Westernblot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。【结论】本研究成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4原核表达载体,后两者在细胞内能正确表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。     

DNA引物酶抑制剂筛选方法的建立及应用

目的：建立ＤＮＡ引物酶抑制剂的筛选方法，并应用于大量筛选，找出对ＤＮＡ引物酶有抑制作用的抗癌药物或先导化合物。方法：以小鼠艾氏腹水癌细胞破碎液为材料，过ＤＥ－５２和Ｐ－１１层析柱，提取分离ＤＮＡ引物酶，用大肠杆菌大片段ＤＮＡ多聚酶延长引物法检测ＤＮＡ引物酶的活性。并在此反应液中加入化合物检测时ＤＮＡ引物酶活性的抑制人和用，以激活的小牛胸腺ＤＮＡ为模板排除化合物对大片断ＤＮＡ多聚酶Ｉ的抑制作用。结果     

腺病毒介导的p53抑制肝癌生长的实验研究

目的探讨外源性野生型Ｐ５３（Ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｐ５３, ＷＴ－ｐ５３）基因对肝癌细胞生长的影响。方法通过表达ＷＴ－ｐ５３的重组腺病毒载体（Ａｄ－ｐ５３）,将ｐ５３基因导入肝癌细胞株中,用ＭＴＴ法检测Ａｄ－ｐ５３对各细胞株生长特性的影响,流式细胞仪分析各组细胞中ＤＮＡ含量及凋亡的比例。建立裸小鼠移植瘤模型后,瘤内注射Ａｄ－ｐ５３。最后处死动物,移植瘤称重, ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测ｐ５３和ｐ２１蛋白的表达情况。结果外源性ｐ５３基因的导入可导致肝癌细胞生长的明显抑制,表现为既诱导细胞凋亡,又诱导细胞周期阻滞。瘤内注射Ａｄ－ｐ５３后移植瘤生长明显受抑制,并出现瘤组织中ｐ５３和ｐ２１蛋白表达的上调。结论腺病毒介导的ｐ５３基因治疗能有效控制肝癌的生长。     

酪氨酸激酶受体的信号转导途径与肿瘤治疗

许多肿瘤中可见不同酪氨酸激酶受体的过度表达或过度激活 ,如上皮细胞肿瘤中常见ＥＧＦＲ家族受体的过度表达 ,胶质瘤中常见ＰＤＧＦＲ家族受体的过度表达等。这些受体或生长因子的过度表达导致受体的过度激活 ,从而导致其下游信号途径的激活 ,最终导致细胞的转化、增殖和抵抗细胞凋亡、促进细胞生存 ,与肿瘤的发生、发展密切相关。因此 ,许多学者致力于从阻断酪氨酸激酶受体信号转导途径角度来研究新的抗肿瘤药物 ,并已取得巨大突破 ,如针对ＨＥＲ2受体人源化的抗体ＨｅｒｃｅｐｔｉｎＴＭ 已被美国ＦＤＡ批准用于ＨＥＲ2过表达的乳腺癌的…     

p14ARF增强顺铂诱导的骨肉瘤U20S细胞凋亡的研究

目的探讨p14ARF对顺铂诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡的影响及其机制,为提高骨肉瘤化疗敏感性提供依据。方法在不表达p14ARF的U2OS细胞中稳定转染pcDNA3.1-p14ARF质粒,构建稳定表达株;采用RT-PCR和Western blot法鉴定其表达;台盼蓝拒染法测定生长抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测凋亡;Western blot法检测Caspase-3,9和PARP的表达和活化。结果 mRNA和蛋白水平,U2OS和U2OS-vec细胞未见p14ARF表达,U2OS-ARF细胞可见p14ARF的高表达;p14ARF单独对U2OS细胞的生长无影响,但顺铂（5μM）处理72小时后,U2OS-ARF细胞的生长抑制率明显高于U2OS和U2OS-vec细胞,相对于U2OS和U2OS-vec细胞,U2OS-ARF细胞不仅表现更为明显的凋亡形态学变化,还明显出现了Caspase-3,9和PARP的活化裂解。结论 p14ARF能够增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞毒作用和凋亡,通过激活Caspase-PARP级联活化,提高骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性。