慢性心房颤动降低Junctophilin-2在心房中的表达研究

目的 明确在慢性心房颤动(AF)中Junctophilin-2 (JPH2)表达变化及意义.方法 从心脏外科体外循环手术中获取21例窦性心律(SR)患者和30例慢性AF患者右心房肌组织,采用免疫组织化学方法测定心房肌组织JPH2蛋白的分布;实时荧光定量PCR法检测心房肌JPH2 mRNA水平;Western blot测定人心房肌JPH2蛋白水平.结果 免疫组织化学实验发现SR组与AF组心房肌组织上均存在JPH2蛋白表达,SR组着色更明显;AF组心房肌JPH2 mRNA水平和蛋白水平均明显低于SR组(P＜0.01).结论 慢性AF患者心房肌JPH2的表达下调可能与心房肌细胞内钙紊乱密切相关.     

心肌单相动作电位不同引导途径的探讨和评价

本文对应用接触电极引导心外膜MAP的一些可能途径进行了探讨和客观评价。实验结果表明,心外膜上直接引导MAP优于开胸后心包膜上间接引导MAP及经胸穿刺心包膜上间接引导MAP的途径,其记录稳定,结果可靠,可进行多项工作,有利于机制的阐明。     

表达在HEK293细胞上的BKCa通道基本特性与动力学调控研究

目的构建稳定表达人血管平滑肌大电导钙激活钾通道(BKCa)的293细胞系,并研究其基本电生理学特征和动力学模型。方法通过脂质体(lipofectamine 2000)转染法转染BKCa表达质粒pcDNA3.1-BKα和(或)pIRES-BKβ1,筛选稳定表达的单克隆细胞系。使用膜片钳多种记录方式研究其基本电生理学特性,同时建立BKCa动力学研究模型。结果构建稳定转染BKCa通道α和(或)β1亚单位的HEK293细胞系,通过膜片钳能够记录到具有与天然细胞BKCa电生理学特性相似的电流,包括大电导特性[内面向外式构型下单通道电导为(216.38±3.55)pS]、电压依赖性、Ca2+依赖性、钾离子选择性和200nmol/L IbTX(BKCa特异性阻断剂)阻断;联合表达β1亚单位能够明显增加通道的开放时程。采用inside-out宏观电流记录方式可以记录到明显的尾电流。可以用于分析通道激活、去激活等动力学模型及药物动力学作用机制。结论成功构建稳定转染BKCa通道α和(或)β1亚单位的HEK293细胞系。膜片钳实验证明具有典型的BKCa电生理学特性,同时建立的细胞系可以很好的用于BKCa通道功能调控研究和动力学参数分析。     

血管平滑肌钙信号研究进展

钙离子是各型细胞中普遍存在的第二信使,能调节细胞的许多生理过程,其中包括血管平滑肌的收缩过程。血管平滑肌细胞内由兰尼定受体与三磷酸肌醇受体介导产生的胞内钙释放,对胞内钙离子浓度的调节极为重要。     

同步记录在位兔心跨膜动作电位与单相动作电位的对比研究

应用接触电极和悬浮微电极,同步记录比较了在位兔心左室心外膜单相动作电位和跨膜动作电位,发现MAP的复极过程与其相邻近的细胞TAP相类似;两者在心律失常和使用河豚毒索情况下所引起的形态、振幅和时程的变化也是一致的。同步记录MAP和TAP显示:证明MAP和TAP的去极相能指示兴奋到达该处细胞的确切时间。对比心表心电图、TAP、MAP以及和MAP的内在转折相比较,推断MAP的内在转折是由心表心电图的Rs波所引起;单相动作电位是在损伤电位的基础上产生的。     

多非利特与维拉帕米联合应用对豚鼠乳头肌动作电位的影响

目的 研究钾通道拮抗剂多非利特与钙通道拮抗剂维拉帕米联合应用对豚鼠乳头肌动作电位各参数的影响.方法 应用标准微电极技术记录离体豚鼠乳头肌动作电位,观察在不同刺激频率下(0.2,0.5 ,1.0,1 25,2.0 Hz),不同浓度的胺碘酮(1,5,10 μmol/L)、多非利特(10,50,100 nmol/L)或100 nmol/L多非利特与1 μmol/L 维拉帕米联合应用对乳头肌动作电位的影响.结果 胺碘酮浓度依赖性的延长动作电位复极50%(APD50)和90%(APD90)的时程,其作用不表现为频率依赖性;多非利特延长APD具有明显的浓度依赖性,刺激频率增加时,延长APD的作用明显减弱,表现为明显的负性频率依赖性;100 nmol/L多非利特与1 μmol/L维拉帕米联用后,上述频率依赖性得到改善.结论 胺碘酮和多非利特均能浓度依赖性地显著延长动作电位时程,但复合性Ⅲ类抗心律失常药物胺碘酮对频率的依赖性明显低于纯Ⅲ类抗心律失常药物多非利特,而多非利特与维拉帕米联合应用达到一定的平衡状态时可以减少这种负性频率依赖性作用.     

延迟整流钾通道阻断药物与维拉帕米联合应用对豚鼠心室乳头肌动作电位的影响

目的:研究IKs特异性阻断剂Chromanol 293B、IKr特异性阻断剂多非利特与L-型钙通道阻断剂维拉帕米联合应用对豚鼠心室乳头肌动作电位的作用,探讨Ⅲ类和Ⅳ类抗心律失常药物相互作用的机制。方法:用标准玻璃微电极技术记录豚鼠乳头肌的动作电位,观察不同刺激频率(0.2,0.5,1,1.25,2 Hz)对动作电位各参数的影响。结果:(1)Chromanol 293B(1,5,10μmol.L-1)能剂量依赖性的延长APD,在不同刺激频率下,Chromanol 293B 10μmol.L-1延长APD不具有频率依赖性;(2)Chromanol293B 10μmol.L-1能延长APD90,当加入多非利特0.1μmol.L-1后,显著延长APD90,增强了在低频率时的作用,表现为负性频率依赖性。(3)在结果(2)的基础上加入维拉帕米(0.1、1、2.5μmol.L-1),使APD90有一定程度的缩短,减弱了慢心率时APD90的延长作用。结论:Chromanol 293B是选择性作用于IKs的Ⅲ类抗心律失常药物,非频率依赖性的延长APD:Chromanol 293B与多非利特联合应用明显增强了延长APD的作用,表现为明显的负性频率依赖性。钙通道阻断剂维拉帕米改善了Ⅲ类抗心律失常药物的作用特性,钾和钙通道阻断剂的联合应用减弱了纯Ⅲ类抗心律失常药物导致的负性作用。     

在inside-out膜片上caffeine对猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通道的调节作用及ryanodine的影响

目的:利用膜片钳技术,研究咖啡因对钙激活钾通道(calcium-activated potassium channel,KCa)的作用机制,及咖啡因存在时兰尼定(ryanodine)对KCa的影响以阐明冠状动脉平滑肌的调控机制。方法:采用急性酶分离方法,应用膜片钳单通道电流记录技术记录猪冠状动脉平滑肌钿胞上KCa电流活动。电流信号经放大、滤波及A/D、D/A转换后输入微机进行采样和储存。应用PCLAMP9.0软件系统进行数据采集及分析。结果:在内面向外式(inside-out)膜片下,咖啡因(0.1、0.5、1.0、5.0mmol/L)可浓度依赖性地增加通道开放概率,而对电流幅值无明显影响,开放概率增加是通过明显缩短平均关闭时间实现的(n=8,P0.01);洗去药物后通道活性可以恢复到对照水平;5.0mmol/L咖啡因对KCa激活作用最大(P0.01)。在细胞贴附式(cell-attached)膜片上,咖啡因激活KCa后,ryanodine(10-40μmol/L)浓度依赖性地抑制通道开放概率,开放时间缩短,关闭时间延长,对电流幅度无明显影响。结论:在inside-out膜片下,咖啡因能够直接激活猪冠状动脉平滑肌细胞KCa通道。在cell-atta-ched构型上,ryanodine可通过胞内一定的信号通路浓度依赖性间接抑制咖啡因对KCa激活。     

心房颤动药物治疗研究新进展

心房颤动（arial fibrillation,AF）简称房颤,是最常见的持续性心律失常之一。房颤发病率较高,平均为0．15％-1％,随年龄的增加而升高,60岁患者发病率达3．8％,80岁患者可高达9．0％。Heeringa研究发现,55岁以上的男性房颤患者死亡率约23．8％,女性约为22．2％,且与患者本身的心脏疾病有密切关系。Schumacher等研究表明,房颤合并快速心室率可使心输出量减少30％,其中15％是由于心房失去泵功能所致,15％是由心室律不齐所致。     

阴虚证五心烦热与TNF-α IL-1β IL-6相关性的临床观察

目的：观察阴虚五心烦热与TNF-α、IL-1β、IL-6的相关性。方法：采用临床流调方法,选取慢性肾炎、糖尿病两种疾病的阴虚证有五心烦热组为研究对象,设阴虚无五心烦热组与非阴虚证有五心烦热组及无五心烦热组患者为对照组。结果：①血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量改变,阴虚证有五心烦热组最高,与该证无五心烦热组、非阴虚证有五心烦热组分别比较均有差异（P〈0.05、P〈0.05）,与非阴虚证无五心烦热组差异最显著（P〈0.01）;阴虚证无五心烦热组含量升高,与非阴虚证有五心烦热组和无五心烦热组比较均有差异（均P〈0.05）;非阴虚证有五心烦热组与非阴虚证无五心烦热症组比较有差异（P〈0.05）。②TNF-α、IL-1β、IL-6含量与阴虚证积分呈正相关（r=0.685,P〈0.05;r=0.573,P〈0.05;r=0.693,P〈0.05）。结论：TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高与阴虚证密切相关,对阴虚证辨证具有重要意义;TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高与阴虚证积分呈正相关,随阴虚发热程度的加重,IL-1水平也随之升高。说明TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高也可作为阴虚证轻重鉴别的参考指标;TNF-α、IL-1β、IL-6升高与五心烦热症具有相关性。