病原微生物实验室生物安全管理的规范化

病原微生物实验室生物安全是国际研究的热点.近年来,病原微生物实验室生物安全管理越来越得到国家、企事业单位及实验室工作人员的重视.该文围绕如何规范实验室生物安全管理进行了初步闸述.     

大肠埃希菌表达的恶性疟原虫裂殖子表面蛋白MSP1-42的免疫原性

目的纯化大肠埃希菌Rosettagami（DE3）表达的可溶性裂殖子表面蛋白1C末端蛋白（MSP1-42,3D7株）,检测其体外抑制恶性疟原虫生长的效果。方法利用大肠埃希菌Rosettagami（DE3）为宿主菌诱导表达MSP1-42,用带组氨酸标签的镍柱纯化可溶性的MSP1-42。6只新西兰白兔随机分为免疫组和对照组,每组3只。用MSP142与弗氏佐剂乳化后,皮下注射,抗原免疫剂量每次为200“g／只,共免疫4次,每次间隔2周。佐剂对照组以PBS代替抗原同法免疫。免疫前及末次免疫2周后取血,用酶联免疫吸附试验和间接荧光抗体试验检测血清中特异性抗体及其与天然抗原的反应,用含10％和20％免疫血清的培养基体外培养恶性疟原虫（海南分离株,Fcc1／HN）,检测免疫血清体外抑制恶性疟原虫生长的效果。结果经镍柱纯化后获得纯度为95％以上的MSP1-42蛋白;免疫组个体在第4次免疫后血清特异性抗体的滴度依次为1：640000、1：640000、1：160000,间接荧光抗体试验检测表明MSP1-42免疫兔血清与恶性疟原虫表面蛋白有阳性反应;免疫血清能抑制恶性疟原虫在体外生长,在10％浓度时,3只免疫兔血清的抑制率依次为（51．94-24．2）％、（29．4±8．6）％和（86．7±7．4）％,在20％浓度时,抑制率分别为（93．3±7．5）％、（65．3±10．6）％和（96．4±1．0）％。结论大肠埃希菌Rosettagami（DE3）表达的MSP142蛋白免疫血清能识别恶性疟原虫天然抗原,体外培养能抑制恶性疟原虫的生长。     

环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫的研究

目的 用环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫.方法 提取牛粪中隐孢子虫卵囊DNA.根据隐孢子虫18S rRNA序列及环介导等温扩增(100p-mediated isothermal amplification,LAMP)技术的原理,设计4条隐孢子虫特异引物,利用LAMP检测牛粪中隐孢子虫卵囊DNA和蓝氏贾第鞭毛虫DNA,以正常牛粪DNA为阴性对照.LAMP产物经SYBR Green I显色及电泳后观察结果,绿色判为阳性,棕色判为阴性,对LAMP产物进行电泳分析,观察其特征条带的情况.结果隐孢子虫卵囊DNA检测管经显色后时不再呈绿色,阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA呈棕色.隐孢子虫LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA无扩增产物.结论 LAMP方法敏感、特异、简便,可用于检测牛粪中的隐孢子虫.     

贾第虫病免疫学诊断方法及其应用研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)是一种重要的肠道致病原虫,人体感染后可引起腹泻等症状。目前,贾第虫感染诊断主要有病原学、免疫学及分子生物学等方法;其中免疫学诊断技术因快速、简便、敏感性高、特异性强等优点,具有良好的应用前景。本文主要就常用贾第虫感染免疫学诊断技术及其应用情况作一综述。     

隐孢子虫病常用病原学诊断方法的探讨

隐孢子虫 (Cryptosporidium)是一种危害广泛的人兽共患寄生原虫。隐孢子虫病 (cryptosporidiosis)是由寄生于人或其他动物胃肠道和呼吸道的隐孢子虫所引起的 ,可造成哺乳动物尤其是反刍动物和人的严重腹泻[1] 。对于人体 ,隐孢子虫病已被列为世界最常见 6种腹泻病之一 ,在婴幼儿、营养不良者、器官移植者、化疗的癌症患者、长期住院治疗病人等免疫低下者和免疫缺陷患者中感染率高且危害严重 ,是公认的引起人类腹泻的重要原因 ,其引起的腹泻是艾滋病 (AIDS)患者主要死亡因素之一。我国首例病例是由韩范 1 987年在南京地区发现的[2 ] 。为进…     

日本血吸虫HGPRT编码基因的克隆与表达

目的 克隆和表达日本血吸虫大陆株次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)编码基因。方法依据GenBank日本血吸虫HGPRT开放阅读框(ORF)设计一对引物，上游和下游引物分别引入BamH I和Sal I酶切位点。以日本血吸虫大陆株（安徽株，简称Sjc-A）成虫总RNA为模板，反转录PCR (RT-PCR)扩增日本血吸虫大陆株HGPRT(SjcHGPRT)全长编码基因。经双酶切纯化的PCR产物与同样双酶切纯化的pET28a质粒DNA片段用T4 DNA连接酶连接，构建重组质粒pET28a-SjcHGPRT，转化感受态E．coli BL21，并大量扩增。重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切、PCR、琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列测定进行鉴定。pET28a-SjcHGPRT/E．coli BL21I程菌用IPTG诱导表达，重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot分析。结果 SjcHGPRT编码基因RT-PCR产物约700 bp，构建的pET28a-SjcHGPRT重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切和PCR扩增产物于琼脂糖凝胶电泳均观察到相同大小的基因片段，根据核苷酸序列测序结果推导的氨基酸序列与报道的日本血吸虫大陆株（湖南株，简称Sjc-H）及曼氏血吸虫HGPRT分别有99%和83%的同源性。获得的重组蛋白(reSjcHGPRT)经SDS-PAGE和Western blot分析，分子量约30 kDa，并能被抗His-G-HRP抗体、日本血吸虫感染小鼠血清和日本血吸虫病人血清识别。结论 日本血吸虫大陆株(安徽株)HGPRT表达获得成功，并获得了纯化重组蛋白，为开展该分子功能和免疫原性研究奠定了基础。     

结膜吸吮线虫基因组序列特征研究

目的 阐明结膜吸吮线虫（Thelazia callipaeda）基因组的序列特征。方法 采用GeneMark、GeneID和GeMoMa软件对结膜吸吮线虫基因组组装数据进行从头预测及同源预测,利用EVM软件对预测结果进行整合,以预测其基因组全部基因;将得到的基因序列分别在公共数据库及3个专有数据库（CAZyme、TCDB和PHI）中进行注释。结果 对结膜吸吮线虫基因组（79.34 Mb）的Scaffolds和Contigs基因结构进行分析,共得到了6 333个基因;通过公共数据库中BLAST比对,发现97.85%的基因可以得到注释,其中NR数据库中注释的基因最多（98.69%）,可以富集到KEGG途径的基因最少（50.50%）。通过KOG数据库分析功能基因,共发现4 517个功能基因。在3个专有数据库（CAZyme、TCDB和PHI）中比对,分别注释得到136、139个和1 498个基因,其中PHI数据库中注释基因数目最多（1 498）。此外,还通过细胞色素酶的专有数据库预测到了238个细胞色素P450基因。结论 本研究初步揭示了结膜吸吮线虫基因组结构特征和注释信息,共得到了6 333个基因。     

吲哚胺2,3-双加氧酶参与调控寄生虫与宿主免疫互作关系的研究进展

吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)是一种重要的免疫调节酶,主要通过耗竭色氨酸(tryp-tophan,Trp)和产生多种代谢产物来调节免疫效应.近年来,对IDO免疫功能的研究大多局限在肿瘤、自身免疫性疾病等领域,而在寄生虫病中的研究相对较少,尤其是寄生虫与宿主免疫互...     

可乐定麻醉镇痛应用及机制

可乐定作为中枢性降压药早为人们认识，但其在临床麻醉镇痛的应用则起步不久。本文就其在围术期的应用和副作用，特别是镇痛应用及其机制进行综述。     

42617例新生儿筛查苯丙酮尿症分析

目的调查我市苯丙酮尿症(PKU)的发病率.方法采用时间分辨荧光法检测干血片中苯丙氨酸浓度.结果2002年9月～2005年9月筛查新生儿42617例,发现PKU患儿4例,发病率为1/10654.结论开展新生儿疾病筛查,能及早发现PKU并及早治疗,对降低智力低下儿的发病率有极其重要的意义.