姜黄素对人多发性骨髓瘤ARH-77细胞外源性凋亡通路的影响

目的：探讨姜黄素（curcumin,Cur）对人多发性骨髓瘤ARH-77细胞外源性凋亡通路的影响。方法：ARH-77细胞经6.25、12.5、25、50、100、200 μmol/L Cur处理12、24、48 h,MTT法检测Cur对ARH-77细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33258染色法观察Cur处理24 h后ARH-77细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测ARH-77细胞周期和Fas/FasL、TRAIL/TRAIL-R的表达,分光光度法检测ARH-77细胞caspase-8的活性。结果：Cur对ARH-77细胞的增殖有时间和剂量依赖的抑制作用。25 μmol/L Cur处理ARH-77细胞可观察到凋亡小体,Cur阻滞细胞周期于G0/G1期,并且有凋亡峰。其促凋亡作用呈浓度依赖性,6.25、12.5、25 μmol/L Cur作用24 h后,ARH-77细胞凋亡率均显著高于对照组\[（10.35±0.35）%、（14.35±1.34）%、（36.65±1.06）% vs（3.83±0.32）%,F=500.432, P=0.000\];实验组细胞内caspase 8的活化程度均显著高于对照组\[（0223±0.018）、（0.263±0.019）、（0.240±0.035） vs （0.154±0.007）;F=9.059,P=20.03\]。12.5 μmol/L Cur作用24 h后,ARH-77细胞表面Fas\[（99.05±0.49）% vs（92.10±0.70）%,t=15.404, P=0.000\]、FasL \[（9.05±0.78）% vs（1.73±119）%,t=9.487, P=0.008\]、TRAIL\[（1.35±0.07）% vs（0.55±0.07）%,t=-11.317, P=0.008\]、DR4、DcR1和DcR2的表达均显著升高,DR5表达显著降低\[（0.95±0.07）% vs（7.70±0.29）%,t=32.742, P=0.001\];进一步提升Cur浓度至25 μmol/L,却降低了DcR1\[（4.35±120）% vs （14.25±021）%;t=5.692, P=0.008\]及DcR2\[（0.75±0.21）% vs （1.65±071）%;t=11.470, P=0.03\]的表达。结论：Cur能明显抑制人多发性骨髓瘤ARH-77细胞的增殖,其机制可能与激活外源性凋亡通路从而诱导细胞凋亡有关。     

人骨髓间充质干细胞输注对辐射损伤小鼠造血器官的保护作用

本研究探讨人骨髓间充质干细胞(MSC)对辐射损伤小鼠造血器官的保护作用。培养人骨髓MSC,并进行细胞学鉴定。BALB/c雌性小鼠经6 Gy60Coγ射线照射后,分别通过尾静脉注射不同剂量的人MSC、MSC裂解物或等体积生理盐水。每天记录小鼠存活情况,并于处理后的第9天和16天取小鼠股骨和脾脏进行病理学分析,观察造血组织容量,并进行细胞增生程度评分。结果表明,与对照组比较,MSC及细胞裂解物处理组小鼠生存期无明显延长,但第9天高剂量(5×106)MSC及裂解物组小鼠骨髓造血即部分恢复,造血组织容量显著改善,(43.50±12.08)%和(42.80±13.11)%vs(24.33±9.50)%(P<0.05),增生程度积分明显增高(P<0.05),脾脏出现增生结节。第16天高剂量MSC和裂解物处理组小鼠骨髓和脾脏细胞明显活跃,脾脏和骨髓结构接近正常小鼠。此外,两个时间点MSC与细胞裂解物处理组小鼠骨髓增生积分无明显差异。结论:骨髓MSC可促进辐射损伤小鼠的造血功能恢复,这种作用可能与细胞内固有的活性物质有关。     

HPLC法测定华山参滴丸中东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的含量

目的:建立HPLC法测定华山参滴丸中东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的含量。方法:采用资生堂CAPCELL-PAK C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-甲醇-磷酸氢二钠缓冲液(15∶4∶81)为流动相,流速1.0 mL·min-1,东莨菪碱、阿托品检测波长210 nm(0～15 min),东莨菪内酯检测波长为344 nm(15.1～30 min),柱温30℃。结果:东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的线性范围分别为0.04～3.95,0.04～4.10,0.05～0.54μg(r=0.9999);平均回收率(n=6)分别为97.58%(RSD=1.3%),98.65%(RSD=1.3%),98.42%(RSD=1.8%)。结论:本文方法简便、准确,可以用于华山参滴丸中东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的含量测定。     

汉族人周期节律基因period3基因型频率的研究

目的 调查中国汉族人的节律基因period3的基因型频率.方法 采集普通健康汉族人血液样本240份.提取基因组DNA,PCR扩增per3基因的可变数目串联重复(variable-number tandem-repeat,VNTR)序列,鉴定个体的per3基因型.结果 确定汉族人中per34等位基因频率为0.883,per35的等位基因频率为0.117;per3基因型频率:PER34/4为78.33%,PER34/5为20.00%;PER35/5为1.67%.与高加索人、非裔美国人和意大利人的per3基因型频率比较差异有统计学意义(χ2=85.61,P<0.01).结论 汉族人的per3基因型频率与高加索人、非裔美国人和意大利人的基因型频率不同.     

新的肝细胞生长因子HPPCn的人多组织表达谱分析

目的观察新型肝细胞生长因子肝细胞生成素Cn（HPPCn）在人不同组织和细胞中的表达谱。方法采用Northen印迹和多组织芯片点杂交的方法,在mRNA水平上观察HPPCn在18种人肝源细胞系和非肝源细胞系中的表达水平,以及60种成人和7种胚胎组织中的分布。结果 HPPCn在脑、心、肝和肾中表达水平较高,而在肺、胸腺、横纹肌、结肠等组织中低表达,成年组织中的表达水平高于胚胎组织。HPPCn在肿瘤细胞中表达水平较高,在4种肝癌细胞系中的转录水平是正常肝细胞系L02的2～4倍。结论 HPPCn呈多细胞、多组织分布,在肝癌细胞中的表达水平高于正常肝细胞。     

食管鳞癌中clusterin的糖基化修饰和表达定位改变

目的:通过分析clusterin的糖基化翻译后修饰状态和定位改变,探讨clusterin在食管鳞癌发生过程中可能的分子机制.方法:对23例食管鳞癌组织及其配对正常食管上皮标本,采用蛋白去糖基化和免疫印迹方法分析不同clusterin蛋白异构体的糖基化修饰状态;采用免疫组化方法分析食管鳞癌组织clusterin异构体定位改变.结果:通常成熟型clusterin在还原状态下相对分子质量为40 000,是一种糖基化的蛋白质,定位于正常食管上皮基底膜下食管黏膜层的疏松结缔组织中并经食管腺分泌到食管黏膜表面和血浆中.23例食管鳞癌组织中clusterin蛋白糖基化修饰均异常,未成熟的clusterin前体和核型clusterin聚集在癌细胞内,而糖化的成熟型clusterin在食管黏膜基质层减少并消失.结论:食管鳞癌中clusterin蛋白的去糖基化修饰及其定位改变可能与肿瘤发生发展密切相关.     

CDR3突变提高抗TNF-α Fab段的亲和力

目的通过抗体库技术在CDR3区引入限定性突变以提高抗TNF-α抗体Fab的亲和力。方法首先合成含CDR3区突变的寡核苷酸,限定突变率以保持50%~70%的亲本序列,通过重叠延伸PCR的方法引入突变,构建突变库,再以硫氰酸铵溶液作洗涤液,筛选亲和力得到提高的特异性克隆,用非竞争性ELISA法测定亲和常数。结果从轻链突变库中筛选得到1个活性提高的特异性克隆K8,在第93位发生N→R突变,其亲和常数为2.8×108L/mol,较亲本抗体(0.1×108L/mol)提高了近28倍;从重链突变库中筛选得到多个活性增高的克隆,部分克隆测序显示96、97和100d位置发生R→K、Y→Q、M→L突变的几率最高,且对亲和力提高贡献大。测定了10个变种的亲和常数,分别为0.2×108、0.22×108、1.8×108、3.2×108、3.3×108、3.5×108、3.7×108、4.0×108、6.3×108和6.5×108L/mol,最大的提高了近65倍。结论CDR3区的限定性突变可显著提高抗体亲和力。     

医院船海外人道主义救援不确定性的情景分析探讨

目的通过研究,找到医院船海外人道主义救援过程中的风险因素,提出对策,提升救援效率。方法通过对医院船执行海外人道主义救援任务人员总结的294篇文献的回顾,对海外人道主义救援所处内外部环境与救治流程的不同环节进行分析,在此基础上,运用情景分析方法,发现和识别可能影响救治效率的风险因子。结果根据对风险因子产生影响的因素作为情景分析的关键纬度,确定信息因素、技术因素、病源因素和语言因素为关键维度,依次构建不同情景,找出薄弱环节。结论提出采用智能化方法应对技术不确定性,构建一体化数字平台应对信息不确定性的策略。     

再生障碍性贫血进展为急性髓系白血病1例报告并文献复习

目的:探讨再生障碍性贫血进展为急性髓系白血病的特点及危险因素。方法:对再生障碍性贫血进展为急性髓系白血病病例的临床资料进行分析,并复习相关文献。结果:1例获得性重型老年再生障碍性贫血经过治疗后病情缓解,此后出现EB病毒持续感染,AA病程36个月进展为急性髓系白血病。结论:再生障碍性贫血有进展为急性髓系白血病风险,危险因素可能包括老年、染色体异常、端粒长度缩短、对IST疗效欠佳、长期G-CSF应用、EB病毒感染。     

通过随机突变提高抗TNF-α单链抗体的亲和力

目的:提高抗TNFα单链抗体(scFv)的亲和力。方法:应用错配PCR技术在抗TNFαscFv基因中引入随机突变,再通过DNA交换(shuffling)使引入的点突变进一步重排组合,构建突变噬菌体抗体库。采用硫氰酸盐洗脱法对抗体库进行淘筛。挑选活性得到改良的克隆,用斑点ELISA法及硫氰酸盐洗脱ELISA法评估其亲和力的改善。结果:对PCR错配的突变库筛选未得到亲和力明显改善的抗体变种,经DNA交换进一步构建变种库后,筛选获得1个亲和力提高的克隆,其相对亲和指数为1.37mol/L,较亲本抗体的相对亲和指数0.48mol/L有明显提高。结论:通过错配PCR和DNA交换引入随机突变构建抗体库,可有效地提高scFv的亲和力。