基于转运体的何首乌致肝损伤作用机制探讨

目的：阐明长期给药何首乌醇提物 (PME) 和水提物 (PMW) 致大鼠肝损伤的可能机制。方法：分别制备 PME 和 PMW。雄性 SD 大鼠随机分为对照组、阳性对照异硫氰酸 α-萘酯 (ANIT 100 mg·kg^–1) 组、PMW组 (15 g·kg^–1)、PME 组 (12 g·kg^–1)。PME、PMW 组大鼠给药剂量相当于 60 g·kg^–1生药量,约为临床最大量的110 倍,灌胃给药 42 d,每日给药 1 次。ANIT 组于第 40 天灌胃给药 1 次。采用试剂盒方法检测大鼠血清生化指标丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、总胆汁酸 (TBA)、碱性磷酸酶 (ALP)、总胆红素(TBIL) 水平;采用苏木素-伊红 (HE) 染色法检测大鼠肝脏病理变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应 (qRT-PCR) 测 定 给 药 后 大 鼠 肝 脏 组 织 中 胆 汁 酸 、 胆 红 素 代 谢 相 关 转 运 体 有 机 阴 离 子 转 运 多 肽 1a1 (OATP1a...     

金橙Ⅱ及金胺O的体外遗传毒性评价

目的 使用基于鼠伤寒沙门氏菌的Ames波动试验和小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y)的体外微核试验评价2种染料金橙Ⅱ和金胺O的遗传毒性风险。方法 在-/+S9处理下,不同质量浓度的金橙Ⅱ和金胺O(0.625～10.000μg·mL^-1)分别与鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型菌株TA98和TA100混合后接种于96孔板中,37℃下孵育72 h后判断其对细菌回复突变的影响;在体外微核试验中,在-/+S9处理下,金橙Ⅱ(10～50μg·mL^-1)和金胺O(0.6～1.2μg·mL^-1)分别与L5178Y细胞作用4 h或24 h,并在给药后24 h收集细胞进行流式细胞术检测。结果 金橙Ⅱ自2.50μg·mL^-1起可引起-S9和+S9处理组的TA98回复性突变孔数显著增加(P<0.05、0.01),代谢活化后增加幅度更为明显;自5μg·mL^-1起可引起-S9处理组的TA100回复性突变孔数显著性增加(P<0.01),作用均呈浓度相关性。10μg·mL^-1金胺O可...     

基于UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1抑制探讨二蒽酮的潜在肝毒性

目的 基于胆红素代谢酶UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1）靶点评价何首乌中二蒽酮类成分的潜在肝毒性。方法 采用Discovery Studio 2.5软件的From Receptor Cavities模块对UGT1A1酶蛋白空腔进行自动识别，将反式-大黄素-大黄素二蒽酮（trans-EMD）、顺式-大黄素-大黄素二蒽酮（cis-EMD）与UGT1A1酶蛋白进行对接，确定待测单体与酶蛋白的作用方式以及连接的紧密程度；应用大鼠肝微粒体孵育体系，加入底物胆红素对照品溶液，评价trans-EMD、cis-EMD（0.037、0.110、0.330、0.990、2.970 μg·mL^-1）对UGT1A1酶的作用，同时启动Ⅰ、Ⅱ相代谢，以表观抑制常数（K_i）为评价指标；CCK-8法检测trans-EMD、cis-EMD（0.04、0.10、0.30、1.00、3.00 μg·mL^-1）作用24 h对HepaRG细胞的毒性作用；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测trans-EMD、cis-EMD（0.04、0.30、3.00 μg·mL^-1）作用24 h对HepaRG细胞UGT1A1 mRNA水平的影响。结果 分子对接实验显示trans-EMD、cis-EMD可与UGT1A1结合于site F，2个化合物10或10''位不同氢键构型可引起化合物空间构型的改变，影响其与UGT1A1的结合强弱；体外酶抑制实验表明trans-EMD、cis-EMD对UGT1A1酶均表现出竞争型抑制作用，抑制作用较强；细胞毒性实验表明trans-EMD（IC₅₀为1.333 μg·mL^-1）和cis-EMD（IC₅₀为1.715 μg·mL^-1）均表现出较明显的HepaRG细胞毒性，IC₅₀值较小；与对照组比较，trans-EMD和cis-EMD 0.30、3.00 μg·mL^-1均可显著下调UGT1A1 mRNA表达水平（P＜0.05），且作用存在浓度相关性。结论 具有大黄素（10→10''）大黄素或大黄素（10→10''）大黄素母核结构的二蒽酮化合物是一类具有潜在肝毒性的化合物，其毒性作用可能与抑制胆红素代谢酶UGT1A1相关。     

基于体外Pig-a基因突变试验的大黄素型蒽醌致突变风险评价

目的 对相同母核结构的8种大黄素型蒽醌类化合物开展体外Pig-a基因突变试验，分析不同大黄素型蒽醌结构与致突变性的关联。方法 L1578Y细胞分别与系列浓度的大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、羟基大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作用4 h（有S9）或24 h（无S9），给药24 h后应用细胞计数板进行计数，计算细胞相对倍增速率（RPD）评价受试物细胞毒性；细胞表达8 d后经APC-anti-CD45和PE-anti-CD90.2标定后，使用流式细胞仪检测突变细胞（CD45^＋CD90^－）发生率。结果 所有受试物在有或无S9代谢活化条件下所设浓度组RPD均大于50%，未见明显细胞毒性作用，可排除试验中假阳性结果。在非S9代谢活化条件下芦荟大黄素25 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率与溶媒对照组比较显著升高（P<0.001）； S9代谢活化条件下，与溶剂对照组比较，大黄素50 μg·mL^-1组，羟基大黄素6.25、12.5、25 μg·mL^-1组，大黄酚25、50、100 μg·mL^-1组和大黄酸12.5、25、50 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率显著升高（P<0.05、0.01、0.001）。结论 羟基取代基的多寡及所在位点是蒽醌类化合物致突变性强弱的决定性因素，其体内致突变性及致癌性作用仍需进行大量体内研究证实。     

基于质谱的DNA加合物组技术在药学领域应用的研究进展

DNA加合物是评价DNA损伤最直接的分子证据，随之产生一个专门研究DNA修饰识别和DNA加合物定量的新领域——DNA加合物组学。其中质谱（MS）分析法是常用的DNA加合物组学技术，并且随着质谱分析仪的灵敏度和扫描速度的提高，使得利用DNA加合物组学技术来筛查人类基因组中DNA损伤成为可能。其中，基于质谱技术对马兜铃、巴豆醛等致癌物生成的DNA加合物的种类的检测应用十分广泛。主要就基于质谱的加合物组学检测技术及其在致癌物检测中的应用进行概述。     

三明治肝细胞培养模型及其在中药肝毒性评价中的应用

随着中药的广泛使用,安全性逐渐成为影响其临床应用的关键因素之一。肝脏作为机体主要的代谢场所,是药物毒性反应主要的靶器官之一,而使用高效、简便且可靠的体外模型对中药肝毒性进行评价和预警是当前毒理学研究的热点。三明治肝细胞培养模型能表达肝细胞血窦侧与胆管侧的转运体,形成功能性胆小管网络,并具有代谢能力,是研究药物肝胆转运和胆汁淤积的重要工具。对三明治肝细胞培养模型的特点、构建、影响因素及其在中药肝毒性评价中的应用进行综述,为中药肝毒性的评价方法研究提供参考。     

染料苏丹红的高通量致突变性筛选

目的 初步建立Ames波动试验酶标仪结果判定标准,并对染料苏丹红I~IV的DNA碱基突变风险进行评价。方法 不同浓度的阳性对照2-（2-呋喃基）-3-（5-硝基-2-呋喃基）丙烯酰胺（AF-2）、2-氨基蒽（2-AA）分别作用于鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100后,分别经人工识别或用酶标仪在492和623 nm波长下进行读数,确立基于吸光度的阳性孔判定标准。无或有代谢活化（-S₉）条件下使用鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100开展基于96孔液态培养法的细菌回复性突变试验,苏丹红I~IV终浓度分别为0.625、1.250、2.500、5.000和10.000 μg/mL。结果 非S₉代谢条件下酶标仪读板结果与人工计数结果一致性达98.1%,S₉代谢条件下酶标仪读数与菌落生长情况无法建立良好关联。在非代谢活化条件下,苏丹红I与IV对TA98的致突变性作用相对较弱;苏丹红I~IV对TA100存在明显的致突变性作用,并呈一定的浓度相关性。在S₉代谢活化条件下,苏丹红III对TA98和TA100均未见致突变作用;苏丹红I在最高浓度10 μg/mL时对2者均有明显的致突变作用,苏丹红IV浓度高于2.5 μg/mL、苏丹红II浓度高于5 μg/mL时,对2者致突变作用均显著。结论 首次使用Ames波动试验检出苏丹红I~IV的基因突变风险,吸光度读数可在非S₉代谢条件下准确判断Ames波动试验结果,为染料的高通量遗传毒性筛选奠定基础。     

不同代谢活化条件对N-亚硝胺类化合物细菌回复突变结果的影响

目的 检测N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)的致突变风险,探讨不同肝微粒体S9混合液对N-亚硝胺类化合物致突变结果的影响.方法 将鼠疫伤寒杆菌TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535、TA1537和待测化合物分别与SD大鼠、CD-1小鼠和人的肝脏S9混合液混合后于37℃预培养1 ...     

不同生长年限与采收季节对何首乌中14个成分含量的影响

目的:探究何首乌中成分含量随生长年限和采收季节的变化规律。方法:建立超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-QQQ-MS/MS),测定德庆地区何首乌药材中14个成分反式-2,3,5,4ʹ-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(trans-THSG)、顺式-THSG(cis-THSG)、2,3,5,4ʹ-四羟基二苯乙烯-2-O-(2ʺ-O-阿魏酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷、虎杖苷、白藜芦醇、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、芦丁、没食子酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、对香豆酸和决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷含量。结果:建立了准确可靠的UPLC-QQQ-MS/MS测定何首乌中14个成分含量的方法;随生长年限的增加,何首乌中二苯乙烯苷类、黄酮类、酚类化合物含量多降低;随采收季节的变化,二苯乙烯苷类、黄酮类、决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷成分多春季含量最高、秋季含量最低,酚类化合物多夏季含量最高、春秋含量低。结论:成分的含量与何首乌药材生长年限及采收季节密切相关,其中采收季节变化较为明显;以trans-THSG、决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷作为潜在肝毒性物质,cis-THSG作为有效成分,秋季为何首乌的适宜采收期,与《中华人民共和国药典》2020年版规定相符。     

啮齿类动物骨髓微核试验规范化方法介绍及背景数据采集

啮齿类动物骨髓微核试验（in vivo Mammalian Bone Marrow Micronucleus Test）是临床前药物遗传毒性研究标准组合试验之一,在医学、公共卫生、食品和药物安全性评价等领域有巨大应用前景。在GLP条件下确立标准化试验方法和条件,积累一定的背景数据范围,可有效确保试验系统的可靠性,为数据分析提供有力依据。以国家药物安全评价监测中心2007－2015年开展的小鼠及大鼠骨髓微核试验背景数据采集为例,介绍啮齿类动物骨髓微核试验规范化采集方法。