HIF-1α过表达慢病毒载体的构建及对心肌细胞Notch配体Jagged1表达的影响

目的构建低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)过表达重组慢病毒质粒并包装病毒,将病毒感染乳鼠心肌细胞,分析其对Notch配体Jagged1表达的影响。方法从cDNA文库中PCR扩增人HIF-1α编码序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV218,转化感受态大肠杆菌细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将HIF-1α过表达慢病毒质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装出慢病毒颗粒。原代分离SD乳大鼠心肌细胞,将HIF-1α过表达慢病毒感染心肌细胞,定量PCR分析Jagged1 mRNA水平的变化。结果成功扩增HIF-1α编码序列并正确连接入线性化载体GV218,获得阳性转化子并测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为1×10~8TU/ml的慢病毒颗粒,Western blot法检测到HIF-1α-GFP融合蛋白。重组慢病毒感染乳鼠心肌细胞后,胞核中见GFP信号。与对照组相比,HIF-1α过表达5天后显著上调Jagged1 mRNA的水平。结论心肌细胞中HIF-1α可诱导Jagged1的表达。HIF-1α过表达重组慢病毒载体的成功构建,为研究缺血缺氧性心肌损伤反应的分子机制奠定了基础。     

石蜡包埋组织中目的基因原位逆转录——聚合酶链反应检测

目的探讨原位逆转录-聚合酶链反应技术(ISRT-PCR)在普通制作石蜡包埋组织中的应用及价值.方法应用直接法ISRT-PCR方法对普通制作、石蜡包埋淋巴瘤组织中的丙型肝炎病毒(HCV)基因组序列进行检测.结果从存档多年的福尔马林固定、普通制作石蜡包埋淋巴瘤组织中检测到HCV RNA序列.结论ISRT-PCR可用于福尔马林固定、普通制作石蜡包埋组织中低拷贝目的基因组序列的检测方法为常规制作的存档石蜡包埋组织的充分利用提供了一条新的途径.     

EB病毒miRNAs在鼻咽癌细胞株C666-1和CNE-2Z中的差异性表达分析

目的：探讨ebv-miRNA在低分化NPC细胞株C666-1（EBV＋）和CNE-2Z（EBV表达水平随传代次数增加而逐渐降低）中的差异性表达进而分析其功能.方法：常规培养NPC细胞株C666-1和CNE-2Z,分别提取总RNA并进行质检;RT-PCR检测LMP-1和LMP-2A mRNA的表达以判断EBV的感染情况;miRNA芯片技术检测EBV miRNAs的表达并对其表达谱进行差异性分析;荧光定量RT-PCR进行验证;复习文献了解ebv-miRNA调控的靶基因以了解其功能.结果：从C666-1和CNE-2Z两株细胞抽提的总RNA纯度高,A260/A280〉2.0,A260/A230〉2.1,RNA完整性好.C666-1具有比CNE-2Z更高的LMP-1和LMP-2A mRNA表达.ebv-miRNA表达谱的差异分析表明39个ebv-miRNAs中19个在两株细胞显著差异性表达;荧光定量RT-PCR结果证实ebv-miR-BHRF1-1和ebv-miR-BART14＊在C666-1中表达升高而ebv-miR-BART8＊表达降低,与芯片结果趋势一致;复习文献,EBV miRNAs功能远不清楚,少数已知的靶基因涉及信号转导、转录调控、细胞凋亡、增殖、免疫反应和病毒DNA复制等方面.结论：ebv-miRNA在低分化NPC中具有差异性表达并广泛参与基因调控.不同NPC细胞中EBV miRNA表达差异预示着基于ebv-miRNA的NPC个性化治疗的可能性.     

bcl-6、P53与非霍奇金淋巴瘤预后的关系

~~bcl-6、P53与非霍奇金淋巴瘤预后的关系$遵义医学院病理教研室!563003现就职于广东医学院病理教研室@揭伟 $遵义医学院病理教研室!563003@郭瑞珍 $遵义医学院病理教研室!563003@唐文台 $遵义医学院病理教研室!563003@肖庆邦~~~~~~~~     

PTTG 与C-MYC在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义

目的:探讨原癌基因PTTG与C-MYC在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达及临床病理意义.方法:应用免疫组织化学S-P法检测PTTG和C-MYC在NHL与对照组织中的表达,分析它们的表达与NHL的组织类型、恶性程度,临床分期及PTTG与C-MYC两者间的相关性.结果:与对照组织相比,NHL中PTTG显著高表达(P<0.05),且T细胞淋巴瘤比B细胞淋巴瘤表达率高(P<0.01),两组淋巴瘤中侵袭性强亚型中表达率均高于其对应的惰性亚型组(P均<0.05);临床分期晚期组表达率高于早期组(P<0.05).NHL中C-MYC表达率仅6.1%,且与PTTG之间无相关性(rs =- 0.368, P>0.05).结论:PTTG高表达但不通过活化C-MYC来参与NHL的发生、发展.     

SATB1高表达通过促进上皮-间充质转化而介导鼻咽癌细胞侵袭和转移

目的:探讨鼻咽癌(NPC)中特殊富含AT序列结合蛋白1(SATB1)的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系。方法:免疫组化检测76例临床NPC及61例对照鼻咽黏膜慢性炎症(NPI)组织样本中SATB1、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达,并分析NPC中SATB1与患者临床参数、E-cadherin和vimentin表达的相关性。体外培养不同分化状态的NPC细胞系CNE1、CNE2Z及C666-1,筛选出SATB1高表达细胞系,采用小干扰RNA(siRNA)沉默SATB1表达后,分析上皮-间充质转化(EMT)相关分子的表达及细胞侵袭能力的改变。结果:临床鼻咽组织中SATB1表达定位于胞质和胞核,NPC组中SATB1阳性表达率显著高于对照NPI组(P0.01);E-cadherin在NPI黏膜上皮中呈膜阳性表达,NPC中膜表达水平下降,但出现胞质阳性。NPI中E-cadherin膜阳性率为100%,显著高于NPC的32.89%(P0.01)。Vimentin呈胞质阳性,NPI上皮细胞中均阴性,但NPC中阳性率为51.32%(P0.01)。NPC中SATB1高表达与患者性别、年龄及N分期无关,但与T分期和M分期均呈正相关(P0.05);SATB1高表达与vimentin呈正相关(r=0.358,P=0.009)。NPC细胞系中SATB1表达与细胞分化水平呈负相关。采用siRNA敲减C666-1细胞中SATB1表达后,E-cadherin表达上升,vimentin表达下降,且细胞侵袭能力下降。结论:SATB1高表达通过促进EMT而介导NPC临床进展。     

CD147 、MMP-2 与MMP-9 在NHL 中的表达及临床病理意义

 目的 探讨CD147和其下游基因MMP-2、MMP-9在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达及临床病理意义。方法 应用免疫组化S-P法检测石蜡包埋100例NHL和10例淋巴结良性病变组织中CD147，MMP-2和MMP-9的表达情况，分析两者之间的相互关系及其与NHL生物学行为的相关性。结果 NHL中CD147，MMP-2的表达均显著高于对照组(P=0．018，0．023)，而MMP-9的表达差异无统计学意义。CD147与MMP-2和MMP-9间均存在正相关关系(P=0．016，0．034)，但三种抗原表达与NHL患者性别、发病部位、临床分期间均无统计学相关性；仅BCL中CD147，TCL中CD147、MMP-2的表达与对照组比较差异有统计学意义(P=0．045，0．015，0．001)。结论 NHL高表达CD147并通过诱导MMP-2和MMP-9，尤以MMP-2的明显表达从而影响其生物学行为，这种影响贯穿NHL的整个临床进展过程。     

高糖上调大鼠主动脉平滑肌细胞骨桥蛋白表达

目的 探讨高糖对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）骨桥蛋白（OPN）表达的影响及机制。方法 SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素复制Ⅰ型糖尿病模型,免疫组化、RT-PCR和western blot检测大鼠主动脉OPN和PCNA的表达;大鼠主动脉VSMCs经含正常糖(5.5mmol/L)、高糖(25mmol/L)、甘露醇(25mmol/L)、高糖+GF109203X（蛋白激酶C抑制剂,10μmol/L),高糖+ NAC（N-acetyl-l-cysteine,NF-κB抑制剂,10μmol/L)的DMEM处理48 h,免疫荧光及western blot检测OPN的表达,western blot 分析PCNA、PKC和 p65的表达。结果 高糖血症大鼠主动脉VSMCs高表达OPN及PCNA。原代VSMCs经高糖刺激后OPN、PCNA、PKC及p65表达明显增加;GF109203X和NAC均可下调PCNA的高表达,但仅GF109203X抑制高糖诱导的OPN高表达。结论 高糖可能通过激活PKC信号诱导OPN表达并促进VSMCs增殖从而在糖尿病性血管并发症中起作用。