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目的构建低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)过表达重组慢病毒质粒并包装病毒,将病毒感染乳鼠心肌细胞,分析其对Notch配体Jagged1表达的影响。方法从cDNA文库中PCR扩增人HIF-1α编码序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV218,转化感受态大肠杆菌细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将HIF-1α过表达慢病毒质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装出慢病毒颗粒。原代分离SD乳大鼠心肌细胞,将HIF-1α过表达慢病毒感染心肌细胞,定量PCR分析Jagged1 mRNA水平的变化。结果成功扩增HIF-1α编码序列并正确连接入线性化载体GV218,获得阳性转化子并测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为1×10~8TU/ml的慢病毒颗粒,Western blot法检测到HIF-1α-GFP融合蛋白。重组慢病毒感染乳鼠心肌细胞后,胞核中见GFP信号。与对照组相比,HIF-1α过表达5天后显著上调Jagged1 mRNA的水平。结论心肌细胞中HIF-1α可诱导Jagged1的表达。HIF-1α过表达重组慢病毒载体的成功构建,为研究缺血缺氧性心肌损伤反应的分子机制奠定了基础。 相似文献
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目的:探讨ebv-miRNA在低分化NPC细胞株C666-1(EBV+)和CNE-2Z(EBV表达水平随传代次数增加而逐渐降低)中的差异性表达进而分析其功能.方法:常规培养NPC细胞株C666-1和CNE-2Z,分别提取总RNA并进行质检;RT-PCR检测LMP-1和LMP-2A mRNA的表达以判断EBV的感染情况;miRNA芯片技术检测EBV miRNAs的表达并对其表达谱进行差异性分析;荧光定量RT-PCR进行验证;复习文献了解ebv-miRNA调控的靶基因以了解其功能.结果:从C666-1和CNE-2Z两株细胞抽提的总RNA纯度高,A260/A280〉2.0,A260/A230〉2.1,RNA完整性好.C666-1具有比CNE-2Z更高的LMP-1和LMP-2A mRNA表达.ebv-miRNA表达谱的差异分析表明39个ebv-miRNAs中19个在两株细胞显著差异性表达;荧光定量RT-PCR结果证实ebv-miR-BHRF1-1和ebv-miR-BART14*在C666-1中表达升高而ebv-miR-BART8*表达降低,与芯片结果趋势一致;复习文献,EBV miRNAs功能远不清楚,少数已知的靶基因涉及信号转导、转录调控、细胞凋亡、增殖、免疫反应和病毒DNA复制等方面.结论:ebv-miRNA在低分化NPC中具有差异性表达并广泛参与基因调控.不同NPC细胞中EBV miRNA表达差异预示着基于ebv-miRNA的NPC个性化治疗的可能性. 相似文献
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目的:探讨原癌基因PTTG与C-MYC在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达及临床病理意义.方法:应用免疫组织化学S-P法检测PTTG和C-MYC在NHL与对照组织中的表达,分析它们的表达与NHL的组织类型、恶性程度,临床分期及PTTG与C-MYC两者间的相关性.结果:与对照组织相比,NHL中PTTG显著高表达(P<0.05),且T细胞淋巴瘤比B细胞淋巴瘤表达率高(P<0.01),两组淋巴瘤中侵袭性强亚型中表达率均高于其对应的惰性亚型组(P均<0.05);临床分期晚期组表达率高于早期组(P<0.05).NHL中C-MYC表达率仅6.1%,且与PTTG之间无相关性(rs =- 0.368, P>0.05).结论:PTTG高表达但不通过活化C-MYC来参与NHL的发生、发展. 相似文献
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目的:探讨鼻咽癌(NPC)中特殊富含AT序列结合蛋白1(SATB1)的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系。方法:免疫组化检测76例临床NPC及61例对照鼻咽黏膜慢性炎症(NPI)组织样本中SATB1、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达,并分析NPC中SATB1与患者临床参数、E-cadherin和vimentin表达的相关性。体外培养不同分化状态的NPC细胞系CNE1、CNE2Z及C666-1,筛选出SATB1高表达细胞系,采用小干扰RNA(siRNA)沉默SATB1表达后,分析上皮-间充质转化(EMT)相关分子的表达及细胞侵袭能力的改变。结果:临床鼻咽组织中SATB1表达定位于胞质和胞核,NPC组中SATB1阳性表达率显著高于对照NPI组(P0.01);E-cadherin在NPI黏膜上皮中呈膜阳性表达,NPC中膜表达水平下降,但出现胞质阳性。NPI中E-cadherin膜阳性率为100%,显著高于NPC的32.89%(P0.01)。Vimentin呈胞质阳性,NPI上皮细胞中均阴性,但NPC中阳性率为51.32%(P0.01)。NPC中SATB1高表达与患者性别、年龄及N分期无关,但与T分期和M分期均呈正相关(P0.05);SATB1高表达与vimentin呈正相关(r=0.358,P=0.009)。NPC细胞系中SATB1表达与细胞分化水平呈负相关。采用siRNA敲减C666-1细胞中SATB1表达后,E-cadherin表达上升,vimentin表达下降,且细胞侵袭能力下降。结论:SATB1高表达通过促进EMT而介导NPC临床进展。 相似文献
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目的 探讨CD147和其下游基因MMP-2、MMP-9在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达及临床病理意义。方法 应用免疫组化S-P法检测石蜡包埋100例NHL和10例淋巴结良性病变组织中CD147,MMP-2和MMP-9的表达情况,分析两者之间的相互关系及其与NHL生物学行为的相关性。结果 NHL中CD147,MMP-2的表达均显著高于对照组(P=0.018,0.023),而MMP-9的表达差异无统计学意义。CD147与MMP-2和MMP-9间均存在正相关关系(P=0.016,0.034),但三种抗原表达与NHL患者性别、发病部位、临床分期间均无统计学相关性;仅BCL中CD147,TCL中CD147、MMP-2的表达与对照组比较差异有统计学意义(P=0.045,0.015,0.001)。结论 NHL高表达CD147并通过诱导MMP-2和MMP-9,尤以MMP-2的明显表达从而影响其生物学行为,这种影响贯穿NHL的整个临床进展过程。 相似文献
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目的 探讨高糖对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)骨桥蛋白(OPN)表达的影响及机制。方法 SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素复制Ⅰ型糖尿病模型,免疫组化、RT-PCR和western blot检测大鼠主动脉OPN和PCNA的表达;大鼠主动脉VSMCs经含正常糖(5.5mmol/L)、高糖(25mmol/L)、甘露醇(25mmol/L)、高糖+GF109203X(蛋白激酶C抑制剂,10μmol/L),高糖+ NAC(N-acetyl-l-cysteine,NF-κB抑制剂,10μmol/L)的DMEM处理48 h,免疫荧光及western blot检测OPN的表达,western blot 分析PCNA、PKC和 p65的表达。结果 高糖血症大鼠主动脉VSMCs高表达OPN及PCNA。原代VSMCs经高糖刺激后OPN、PCNA、PKC及p65表达明显增加;GF109203X和NAC均可下调PCNA的高表达,但仅GF109203X抑制高糖诱导的OPN高表达。结论 高糖可能通过激活PKC信号诱导OPN表达并促进VSMCs增殖从而在糖尿病性血管并发症中起作用。 相似文献