宫内发育迟缓大鼠不同阶段胰岛功能及胰岛素敏感性的研究

采用营养不良法建立官内发育迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)大鼠模型,发现IUGR大鼠胰腺发育受损、胰岛β细胞功能减退,随年龄增长逐渐出现糖耐量受损及胰岛素敏感性下降.     

B7家族新成员PD-L1、PD-L2的研究进展

“协同刺激信号”是1970年由Bretscher和Cohn在T细胞活化双信号模型的基础上提出的，即除了通过APC递呈MHC处理过的抗原给抗原特异性T细胞提供第1信号外，还需协同刺激分子作为辅助信号的协同作用，达到生理活化闽值后才能使T细胞产生正常的免疫应答，从而在理论上更好地解释了免疫系统对自身和非自身抗原不同识别的凋节机制。如果缺少共刺激分子的第2信号，将会导致调节性T细胞的无反应性或特异性免疫耐受。     

胰岛移植免疫耐受的研究进展

随着2000年Edmonton方案提出并应用到胰岛移植后,使得移植的成功率大大提高。该方案之所以取得极大的成功,其中尤为重要的是其对以往的免疫抑制方案的改进,这使得免疫耐受的诱导成为近年来胰岛移植领域的研究热点之一。首先新型免疫抑制药物,如脱氧精胍菌素、来氟米特等,在延长同种异体胰岛移植的存活时间的同时,且无任何β细胞毒性作用,提高了胰岛移植的成功率。其次,通过TNF/TNFR家族和B7/CD28家族共刺激分子的阻断,同样具有相似的效果,抗CD40L抗体和CTLA-4 Ig诱导移植免疫耐受已经进入临床研究阶段。而通过调节细胞因子网络(如IL-4、IL-6和IGF)干预Thl/Th2转换亦可诱导移植耐受,但孤立的细胞因子治疗并不足以诱导耐受发生和维持。而让胰岛细胞表达可抑制细胞凋亡基因,同样对移植物功能存活具有重大意义,研究表明Fas/FasL、DCR3和A20基因等均能对移植胰岛的存活起保护作用。随着研究的深入和免疫学的发展,将对免疫耐受的机制有更为深人地了解,相信在未来的胰岛移植治疗糖尿病领域,移植排斥现象将能得到高效可靠的解决方法。     

胰高血糖素样肽1相关研究的进展

胰高血糖素样肽1(GLP-1)及其长效类似物作为糖尿病药物治疗领域研究的热点,已进行了深入的研究.本文将从GLP-1的生理学特征、生物学功能和基于GLP-1信号的糖尿病治疗药物相关进展进行阐述.     

胰岛新生相关蛋白改善胰岛功能的研究

目的: 观察胰岛新生相关蛋白(islet neogenesis-associated protein,INGAP)与胰岛体外共培养对其凋亡?基因表达以及胰岛素释放功能的影响?方法:分离提取8周龄雄性Wistar大鼠胰岛,培养于添加(共培养组)或未添加(对照组)INGAP(10 μg/ml)的RPMI 1640完全培养液中?24 h后收集INGAP共培养组和对照组胰岛,进行吖啶橙-碘化丙啶染色(AO-PI)?葡萄糖刺激的胰岛素释放试验及RT-PCR检测凋亡相关B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)基因和蛋白激酶B(Akt)基因mRNA的表达水平?结果:①INGAP共培养组的胰岛在高糖刺激下的胰岛素释放量高于对照组[(185.00±20.01) μU/ml vs. (58.67±17.03) μU/ml],并且刺激指数亦明显增高(5.10±2.35 vs. 1.92±0.42)?②INGAP共培养组与对照组相比,胰岛Bcl-2基因 (0.607±0.217 vs. 0.503±0.209)和Akt基因 (1.115±0.189 vs. 0.935±0.162) 的mRNA表达水平较明显增加?③共培养组的胰岛细胞存活率明显高于对照组(2 685.45±5.08 vs. 2 108.65±4.02)?结论:INGAP与胰岛体外共培养可以减少胰岛的凋亡,维持胰岛的功能?     

小鼠骨髓间充质干细胞和内皮祖细胞的分离?培养及鉴定

目的:建立一种高效,稳定的从小鼠骨髓中同时分离培养间充质干细胞(MSC)和内皮祖细胞(EPC)的方法.方法:从小鼠骨髓分离单个核细胞,经差速贴壁结合专用血清或特殊培养基分别扩增MSC和EPC.以成骨、成脂诱导分化鉴定MSC,并以流式细胞术(FCM)检测MSC纯度;以Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1荧光双标,结合vWF、CD31免疫组化染色鉴定EPC,并计算其纯度.结果:早期贴壁细胞48 h换液时即可见明显集落形成,1周后即达80%融合,传至第3代后经诱导能够向成骨细胞和脂肪细胞分化,FCM检测CD29、CD34、CD45、CD90阳性率分别为(93.86±1.12)%,(0.48±0.38)%,(1.89±1.49)%,(94.11±3.32)%;2次贴壁细胞经EGM-2 MV专用培养基培养后,第3天开始伸展,第5天可见集落形成,约2周左右可融合近80%,传代后Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色阳性率(75.2±4.5)%,vWF、CD31免疫组化染色阳性率分别为(55.7±4.7)%和(52.5±3.6)%.结论:采用该方法可以同时培养扩增骨髓间充质干细胞和内皮祖细胞,效率高,稳定性和重复性好.     

腺病毒介导胰高血糖素样肽-1受体在小鼠骨髓间充质干细胞表达的体外研究

目的:观察腺病毒介导胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)转染小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)的表达情况及Exendin-4/GLP-1R系统对BM-MSCs细胞增殖及凋亡的影响?方法:利用Ad.Max系统构建含GLP-1R基因的腺病毒表达载体Ad.GLP-1R,感染小鼠BM-MSCs?采用RT-PCR?Western blot和免疫荧光方法检测GLP-1R的表达情况?用Exendin-4刺激感染Ad.GLP-1R的BM-MSCs,通过细胞计数和流式细胞术检测细胞生长曲线?细胞周期及细胞凋亡的变化?结果:腺病毒对小鼠BM-MSCs有较高的感染效率,病毒感染复数(MOI)为400时,感染率高达89.5%?BM-MSCs不表达GLP-1R,感染Ad.GLP-1R后有效表达GLP-1R基因和蛋白?Ad.GLP-1R感染BM-MSCs后,Exendin-4刺激组细胞生长曲线显著高于未刺激组(P < 0.05)?细胞周期检测结果显示,刺激组G0/G1期细胞数显著下降?G2/M期细胞数明显升高,增殖指数(S+G2/M)亦显著增加(P均 < 0.01)?而细胞凋亡率无明显变化?结论:Ad.GLP-1R可以有效感染BM-MSCs,获得高表达GLP-1R的BM-MSCs?Exendin-4可以促进Ad.GLP-1R感染的BM-MSCs增殖?