金匮肾气丸联用葡萄糖酸钙治疗原发性骨质疏松症的临床研究

目的观察金匮肾气丸联用葡萄糖酸钙治疗原发性骨质疏松症骨量减少的临床疗效。方法选择2008年04月～2010年03月本院门诊及住院的获得完整随访资料的原发性骨质疏松症患者90例,随机分为A组(金匮肾气丸+葡萄糖酸钙组)30例,口服金匮肾气丸3g 3次/日;同时口服葡萄糖酸钙1g 3次/日;B组(葡萄糖酸钙组)30例,口服葡萄糖酸钙1g 3次/日;C组(阿法骨化醇组)30例,口服阿法骨化醇胶丸0.25U 2次/日。疗程6个月。治疗组与对照组在疼痛评分、骨密度变化、血钙、血清碱性磷酸酶检查结果方面进行比较。结果 A、B、C 3组患者疼痛评分较治疗前均明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.01)。A组患者疼痛评分下降较B、C组明显,差异有统计学意义(P<0.05);A、B、C 3组患者治疗后骨密度均较前升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。A组较B、C组骨密度上升程度明显,组间比较有统计学差异(P<0.05)。A、B、C 3组患者治疗前后血清钙、磷、碱性磷酸酶检查结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论金匮肾气丸联用葡萄糖酸钙治疗原发性骨质疏松症临床疗效显著。     

经中心静脉置管168例常见并发症原因分析及护理对策

目前,中心静脉置管术已广泛用于临床,尤其是在危重患者的诊治过程中,它以给药迅速、对血管刺激性小、血管通路可靠等优势,在抢救患者生命、供给营养、接受药物治疗、中心静脉压监测等方面发挥着越来越重要的作用[1]。但是中心静脉置管后有时会出现一些并发症,如与穿刺相关的出血、气     

早期综合肠内营养措施在脑卒中患者中的应用研究

<正>近年来,随着加强医疗病房(ICU)监护和抢救技术的不断提高,脑卒中患者的长期生存率有了明显提高,因此患者的营养支持亦逐渐被ICU医师重视,由于此类患者往往存在     

骨形成蛋白2壳聚糖微球的制备

目的 探讨壳聚糖微球包裹人重组骨形成蛋白2(rhBMP-2)的制备方法 .方法 采用Berthold的沉淀/凝聚法制备壳聚糖微球,用此微球包裹rhBMP-2,对rhBMP-2壳聚糖微球的大小、形态、含量和体外释药进行研究.结果 空白壳聚糖微球表面光滑,粒径范围1.2～3.8 μm.载药量约为4.68X104 U/mg,包封率为91.8%.体外释放试验显示,壳聚糖微球释放rhBMP-2初期释药较快,尤其第1天有突释现象(累计释药度约占19.6%),随后释放速度逐渐变缓,第10天累计释放度约54.5%,第20天约64.4%.结论 rhBMP-2壳聚糖微球具有较高的包封率和显著的缓释rhBMP-2作用.     

33例寰枢椎不稳定的治疗体会

目的探讨寰枢椎不稳定的手术治疗效果。方法 33例寰枢椎不稳定的病人,男24例,女9例,平均年龄41.3岁,其中Ⅱ型齿状突骨折20例,Ⅱ型Hangman骨折5例,Ⅱa型Hangman骨折3例,齿状突发育不良5例。手术采用齿状突螺钉固定10例,C1、C2椎弓根螺钉固定9例,改良Magerl固定6例。结果 31例病人获得随访,平均随访时间3.6年,没有出现严重的并发症,随访X线片显示颈椎骨性愈合。结论针对寰枢椎不稳定的原因制定相应的手术方式能取得满意的临床效果。     

经肛门巨结肠根治术治疗126例儿童先天性巨结肠临床疗效研究

目的探讨经肛门巨结肠根治术治疗儿童先天性巨结肠临床疗效及手术技巧。方法回顾分析经肛门手术治疗126例先天性巨结肠患儿的临床资料,采用经肛改良Soave术95例,经肛改良Swenson术31例。结果除早期经肛Soave术中7例（5．6％）二期手术外,余均一期完成手术（94．4％）。辅助腹部小切口5例,腹腔镜12例。术后并发症35例,其发生率为27．8％,其中肛周糜烂15例,小肠结肠炎9例,吻合口狭窄5例,污粪2例,再手术4例,两种术式的术后并发症比较差异无统计学意义（P〉0．05）。103例获随访1—10（中位数2）年,痊愈96例（93．2％）,好转5例（4．9％）,无效2例（1．9％）,两种术式不同类型的术后排便功能优良率比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论两种术式治疗先天性巨结肠临床疗效好,各有其优点,均存在一定的并发症,但经肛Swenson术较经肛Soave术操作更简单方便,术后不需扩肛。     

基于PK/PD参数的碳青霉烯类药物给药方案设计

碳青霉烯类药物为目前临床中抗菌谱最广,抗菌强度最强的抗菌药物之一,由于其对产超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrum beta-lactamase,ESBL）、头孢菌素酶（Ampler class C-lactamase,Ampc）等酶的细菌均具有抗菌活性,该类药物也是目前临床中用于各种多药耐药细菌感染的主要治疗药物。     

雷公腾内酯与多柔比星诱导耐药白血病细胞凋亡协同作用及其机制的探讨

目的：以耐多柔比星（adriamycin,ADM）的人急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）耐药细胞株HL60/ADM为研究对象,探讨IC20浓度雷公腾内酯（triptolide,TPL）能否提高ADM诱导耐药白血病细胞凋亡及其与Nrf2通路的关系。方法：流式细胞仪检测空白对照组、IC20浓度TPL单药组、ADM单药组和TPL联合ADM组处理HL-60/ADM后细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测各个处理组作用后,Nrf2及其下游基因醌氧化还原酶（quinone oxidoreductase,NQO1）、谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase,GSR）及血红素加氧酶1（heme oxygenase 1,HO-1）的表达水平变化;蛋白质印迹法检测各处理组作用后Nrf2蛋白表达变化。结果：TPL单药组细胞凋亡率为（5.28±0.80）%,与空白对照组的（7.09±0.46）%比较差异无统计学意义,P=0.226;但该浓度TPL可使ADM组细胞凋亡率由（19.55±1.70）%提高到（72.62±4.83）%,是ADM单药组的3.71倍,P〈0.001。空白对照组、TPL单药组、ADM单药组及双药联合组Nrf2mRNA表达水平分别为1、0.742±0.052、0.619±0.042和0.241±0.010,NQO1分别为1、0.363±0.075、0.228±0.053和0.050±0.034;GSR分别为1、0.268±0.042、0.231±0.106和0.038±0.017;HO-1分别为1、0.495±0.023、0.282±0.099和0.048±0.036;各用药组Nrf2及其下游基因NQO1、GSR及HO-1的mRNA表达水平较对照组均出现显著下调,P〈0.001;其中双药联合组下调程度最大。蛋白质印迹法结果显示,用药组及联合组Nrf2表达水平较对照组均有不同程度下调,其中联合组下调最为明显。结论：IC20浓度雷公腾内酯可显著提高ADM诱导耐药白血病细胞凋亡,其分子机制与下调Nrf2通路有关。     

丹参酮对大鼠急性肺损伤保护作用的实验研究

目的探讨丹参酮对急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织的保护作用及其可能机制。方法 45只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(NS组)、急性肺损伤组(LPS组)、丹参酮IIA磺酸钠干预组(STS组),LPS组和STS组通过股静脉注射LPS(5 mg/kg)建立急性肺损伤模型。STS组在注射LPS前30 min静脉给药10mg/kg,NS组和LPS组给予等量NS。分别在6 h、12 h、24 h三个时间点活杀大鼠,检测血气分析、肺组织湿/干重比(W/D)、HE染色、采用酶联免疫吸附分析法检测各时相点大鼠血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)浓度。结果与LPS组相比,STS组急性肺损伤的程度明显减轻,PaO2显著改善(P<0.05),肺W/D比值降低(P<0.05),HE染色显示肺组织损伤减轻。STS组血浆TNF-α、IL-6浓度较LPS组相应时相点显著下降,而IL-10浓度明显升高,高峰提前(P<0.05)。结论丹参酮对AL I大鼠肺组织具有一定的保护作用,其机制可能是抑制了TNF-α、IL-6的释放,增加IL-10的释放,使促炎-抗炎平衡,减轻肺部及全身的炎性反应。     

多重实时荧光定量PCR同时检测急性白血病患者WT1和MDR1基因表达水平方法的建立

目的 构建可同时检测AL患者WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR方法.方法 提取K562细胞的总RNA,并逆转录扩增WT1和MDR1的cDNA,通过Bam H Ⅰ及BglⅡ酶切后连接成WT1和MDR1重组片段,对WT1和MDR1重组片段进行PCR扩增,PCR产物纯化后与pMD18载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,构建载有WT1和MDR1基因的标准品重组质粒,用限制性核酸内切酶法和PCR法鉴定质粒.用FAM荧光标记MDR1探针、VIC荧光标记WT1探针,建立能在1个试管中同时检测WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR反应体系.应用该体系检测47例AL患者及32例对照者WT1和MDR1基因表达水平,比较两组之间WT1和MDR1基因表达水平的差异,并随访7例AL患者不同病程中WT1和MDR1基因表达水平的变化与临床预后的关系.结果 经EcoR1酶切及PCR法证实WT1和MDR1基因重组质粒已成功构建.所建立多重实时荧光定量PCR方法的灵敏度为102拷贝/μl;所建立标准曲线的R2分别为0.999和0.998.AL患者WT1和MDR1基因的表达水平中位数分别为37 000(163～6 370 000)拷贝/μg RNA和76 200(179～18 000 000)拷贝/μg RNA,显著高于对照组的258(0～643)拷贝/μg RNA和333(0～779)拷贝/μg RNA,差异有统计学意义(Z=6.755、6.736,P＜0.01).对应用相同的诱导和巩固化疗方案治疗的7例AL患者进行随访,3例持续缓解患者中,WT1和MDR1的表达水平在初治时分别为2 170和86 900、1 130和5 860、1 170和586拷贝/μg RNA,治疗后WT1和MDR1的表达水平明显下降,分别为370和560、138和980、150和690拷贝/μg RNA,此3例患者获长期完全缓解.在3例完全缓解后复发患者中,WT1和MDR1表达水平在初治时分别为1 600和11800、24 800和968、48 200和1 100 000拷贝/μg RNA,在化疗获得完全缓解后均降低,但在随后治疗过程中,WT1、MDR1表达量又逐渐升高,分别为20 314和25 660、184 364和31 530、15 680和878 000拷贝/μg RNA,此3例患者最终均出现临床复发.另外1例未缓解患者初治时WT1和MDR1表达水平分别为81 600和1 200 000拷贝/μg RNA,化疗后WT1、MDR1表达水平不仅未下降,反而有所上升,分别为124 100和7 632 400拷贝/μg RNA,此例患者始终未获缓解.结论 本研究成功构建了可同时检测WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR方法.同时检测AL患者WT1和MDR1基因表达水平的变化可能有助于判断预后.

Abstract：

Objective To set up a multiplex real time quantitative PCR method to detect the expression of WT1 and MDR1 gene simultaneously in acute leukemia patient. Methods Total RNA was extracted from k562 cell line and was reverse transcribed to cDNA by the outer primers of WT1 and MDR1 respectively. The cDNA of WT1 and MDR1 were purified and digested by Bam H Ⅰ and Bgl Ⅱ , and then the two fragments were ligated to form the recombinant fragment WT1 + MDR1. The outer forward primer of WT1 and outer reverse primer of MDR1 were used to amplify the recombinant fragment WT1 + MDR1. The PCR product was purified and cloned into pMD18-T vector, and then transferred into E. coli DH-5α. A new kind of WT1-MDRl-contained standard plasmid was obtained from the positive colony. The recombinant plasmid was verified by digestion with restriction enzyme and PCR amplification. A multiplex real time quantitative PCR method was set up with FAM-labeled MDR1 probe and VIC-labeled WT1 probe in one reaction tube. The WT1 and MDR1 gene expression was detected in forty-seven AL patients and thirty-two controls by this method. Seven patients were followed-up to elucidate the relationship between the gene expression levels and clinical prognosis. Results The recombinant plasmid was confirmed by EcoR1 digestion and PCR amplification. The multiplex real time quantitative PCR technique could reach the sensitivity of WT1 and MDR1 gene up to 102 copy/μl. The standard curve slopes were 0. 999 and 0. 998. The WT1 [ 37 000( 163-6 370 000 )copies/μg RNA ] and MDR1 [ 76 200( 179-18 000 000 )copies/μg RNA ]expression levels of AL patients were significantly higher as compared to the controls [ 258( 0-643 ) copies/μg RNA and 333( 0-779 )copies/μg RNA ]( Z= 6. 755,6. 736, P ＜ 0. 01 ). Following up seven patients with similar regimen of chemotherapy, the WT1 and MDR1 expression correlated to the clinical course. Three AL patients with WT1 and MDR1 expression levels (2 170 and 86 900, 1 130 and 5 860, 1 170 and 586 copies/μg RNA )significantly decreased after chemotherapy and kept in the low range ( 370 and 560,138 and 980, 150 and 690 copies/μg RNA ), and had a favorable outcome. Three AL patients with WT1 and MDR1 expression levels ( 1 600 and 11 800, 24 800 and 968, 48 200 and 1 100 000 copies/μg RNA )decreased after initial chemotherapy, but increased significantly afterwards (20 314 and 25 660,184 364 and 31 530, 15 680 and 878 000 copies/μg RNA ),and suffered clinical relapse. One patient with high WT1 and MDR1 expression levels ( from 81 600 and 1 200 000 copies/μg RNA to 124 100 and 7 632 400 copies/μg RNA )showed the persistence of disease. Conclusions A multiplex real time quantitative PCR method to detect WT1 and MDR1 gene simultaneously is constructed successfully. The expression of WT1 and MDR1 may provide useful information for AL patients prognosis.