用FISH技术检测肝癌及喉癌细胞系染色体畸变

目的探讨肝癌及喉癌细胞系染色体畸变。方法选用９种染色体特异性探针，分别对肝癌及喉癌细胞系的染色体进行荧光原位杂交检测。结果在两种细胞系中，这些探针均呈现异常的杂交信号。肝癌细胞系中主要是结构畸变，而喉癌细胞系中染色体数目畸变占主要地位。两种细胞系中染色体畸变所涉及的范围极广，而且畸变类型极为复杂。结论与常规的细胞遗传学分析方法比较，荧光原位杂交技术具有快速、准确、灵敏等优点，可以用于肿瘤细胞染色体畸变的检测     

肝癌细胞凋亡相关基因APG的克隆、表达及其与肝癌相关性研究

目的 研究和克隆新的肝癌凋亡相关基因,探索肝癌发生机制。方法 采用同源筛选、RT-PCR等克隆肝癌凋亡相关基因APG,分析其在肝癌及癌旁组织中表达,测序比对,研究其与肝癌之间相关性。结果 克隆了一个肝癌凋亡相关基因,cDNA全长为563bp。其在肝癌及癌旁组织中序列存在一定差异。50例肝癌中,16%(8/50)为上调表达,84%(42/50)为下调表达(P<0.01)。AGP表达与性别、AFP大小无关(P>0.05),但与肿瘤大小(P<0.05)、HBsAg(P<0.01)、分化程度(P<0.01)、包膜侵犯(P<0.01)、临床分期(P<0.01)、血管癌栓(P<0.01)、癌旁卫星灶(P<0.01)、Ki-67蛋白表达(P<0.01)、细胞凋亡(P<0.05)、P53蛋白表达(P<0.01)密切相关。结论 APG是肝癌凋亡相关的下调基因,其表达与肝癌的某些临床病理特征有关。     

人睾丸前列腺素D合成酶的原核表达

目的：将获得纯化的重组人睾丸前列腺素D合成酶（L－PGDS）用于基础和临床研究,方法：在原核表达系统中,用异丙基-β-D－硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组质粒pGEX-2T／htL-PGDS的表达,用谷胱甘肽琼脂糖珠亲和并纯化重组融合蛋白GST／htL-PGDS,再用凝血酶裂解融合蛋白,从而获得纯化的重组L－PGDS。对表达纯化重组蛋白的质粒进行DNA测序,并对重组蛋白进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）分析,鉴定其是否为所需目的蛋白。结果：用IPTG诱导重组质粒pGEX-2T／htL-PGDS表达的最佳浓度为1mmol/L最佳时间为4h。在此基础上获得的融合蛋白用凝血酶裂解后获得单一纯化的重组蛋白L-PGDS,最佳裂解时间为2h。SDS－PAGE和DNA测序证实,所获的重组蛋白确系所需目的蛋白,结论：用上述方法可获得纯化的人睾丸L－PGDS。     

香烟烟雾水溶物对小鼠卵母细胞成熟和IVF的影响

采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究不同产地３种香烟的烟雾水溶物对小鼠卵母细胞成熟和受精能力的影响。结果显示３种香烟烟雾水溶质对卵母细胞生发泡破裂都没有影响,但可以显著地抑制卵母细胞第一极体的释放、降低卵母细胞的体外受精率和体外存活率。结果提示,香烟烟雾中影响生殖作用的主要成分是其中的水溶性成分,它们可以破坏卵母细胞的成熟、降低卵细胞的受精能力,对生殖细胞和生育能力有一定的毒性作用;不同产     

香烟烟雾水溶物对雌性小鼠生殖作用的影响

「目的」探讨香烟对生殖作用的影响。「方法」腹腔注射香烟烟雾水溶物后观察其对小鼠怀孕率、胚胎发育的影响,采用卵母细胞的体外增养和全外受精的方法,观察其对超排卵数、卵细胸的成熟和受精能力影响。「结果」香烟烟雾水溶物可以极显著的地降低小鼠的妊娠率,抑制胚胎发育,还可以显著性地抑制卵母细胞的体内成熟,降低第一极体的释放率和卵母细胞的体外受精率,使卵母细胞在体外的生存能力明显降低。本实验结果还显示,香烟烟雾     

精子获能的分子机制

精卵受精之前精子经过获能。所谓获能 ,即精子在女性生殖道内停留期间获得受精能力的分子和生理活动。最近几年 ,许多研究者模仿女性生殖道内的环境而用类似培养介质对精子获能的分子机制进行了广泛的体外研究 ,本文将就此作一综述 ,以期系统阐明精子获能分子机制 ,为进一步探讨男性不育的病因提供理论基础。1　胆固醇流失与精子获能精子获能期间 ,精子膜的流动性发生改变 ,精子膜脂类发生重排 ,胆固醇 /磷脂比率降低[1] 。这些可能与胆固醇的流失密切相关。牛血清白蛋白 (ＢＳＡ)可与胆固醇结合 ,其可以浓度依赖方式刺激胆固醇流失 ,提示培…     

骨髓间质干细胞绿色荧光蛋白基因的转染和克隆化研究

目的 建立能稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)并连续传代培养的骨髓间质干细胞(MSCs)株。方法 采用电穿孔法将带有GFP的质粒(pGFP-N1)在不同条件下转染MSCs,经过G418筛选,有限稀释法筛选阳性克隆,荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP的表达情况。结果 电穿孔以电容量1050μF、电压260V时效果最好,转染GFP的MSCs能在含有G418的培养基中生长,未转染的骨髓间质干细胞不断死亡。转染24h后即能观察到少量荧光细胞,一个月后大部分荧光细胞呈集落样生长,荧光表达较强,转染率为50％-60％。体外克隆后,能稳定表达至10代,10代后荧光强度明显减弱。结论 GFP基因能在MSCs中进行有效的复制、转录和翻译,并可持续、稳定、高效表达;转染GFP的MSCs能作为研究MSCs的诱导分化及生物细胞工程治疗的载体细胞。     

Nucleostemin基因在骨髓间充质干细胞诱导致瘤过程中的表达

目的研究骨髓间充质干细胞（MSC）诱导肿瘤发生的机制。方法用荧光差异显示技术（FDD）寻找差异基因;PCR、免疫组织化学、Western blotting加以验证;实时荧光定量反转录聚合酶链反应（Realtime RT—PCR）检测诱导致瘤细胞在裸鼠体内致瘤后致瘤组织的基因表达水平。结果FDD结果显示Nucleostemin（NS）基因高表达,与PCR、Western blotting显示结果一致。Realtime RT—PCR表明,NS基因在MSC、F6及3组F6致瘤组织细胞之间的表达水平差异有统计学意义（F=160,P〈0．05）。F6组NS基因表达水平为（0．0372±0．0019）,MSC基因表达水平为（0．0021±0．0002）,增高18倍（P〈0．05）;裸鼠皮下注射F6细胞后,第4、6、7周分离致瘤组织细胞内NS基因表达水平分别为（0．0504±0．0083）、（0．0995±0．0026）和（0．0614±0．0036）,呈上升趋势（与MSC对比,P值均〈0．05）。Western blotting及免疫组织化学染色证明F6细胞NS蛋白表达明显增高。结论NS基因与肿瘤细胞形成有关。     

香烟烟雾水溶物对雌性小鼠生殖毒性的研究

为了研究香烟的生殖毒性,采用灌服香烟烟雾水溶物后观察其对小鼠怀孕率和胚胎发育的影响,以及取出卵母细胞进行体外培养和体外受精的方法,观察香烟烟雾水溶物对超排卵的卵母细胞数目、卵母细胞的成熟和受精能力等的影响.结果表明,香烟烟雾水溶物可以极显著地降低小鼠的妊娠率,抑制胚胎发育,显著性地抑制卵母细胞的体内成熟,降低第一极体的释放率和卵母细胞的体外受精率,使卵母细胞存活率显著降低.结果还显示,香烟烟雾水溶物对小鼠生殖作用的损害和对卵母细胞成熟的抑制作用可能是可逆的,停止灌服香烟烟雾水溶物和将卵母细胞以及受精卵培养在正常的培养液中,小鼠的生育能力又能基本恢复正常,卵母细胞的第一极体的释放率以及体外受精率都明显提高.提示,香烟烟雾水溶物可以破坏卵母细胞的成熟和减数分裂,降低小鼠的生殖能力和生育能力,但这种毒性作用是可以逆转的,戒烟后又可恢复正常.香烟中对生殖毒性较大的物质可能是其中的一些含量较高的重金属元素.     

应用荧光原位杂交技术进行产前诊断的可行性探讨

目的：探讨荧光原位杂交技术（FISH）应用于绒毛及羊水间期细胞进行产前诊断的可行性。方法 应用18、X号染色体着丝粒探针及21号染色体特定区域探针,分别对绒毛及羊水间期细胞进行荧光原位杂交,并与中期分裂相进行比较分析。结果 绒毛及羊水间期细胞均出现了杂交信号,万以绒毛细胞杂交比率高,信号强;常染色体探针出现3个及1个杂交点的比率约为1％和6％,X染色体探针出现3点的比例也在1％左右。结论 荧光原位杂交技术对检出染色体非整倍体有较强的特异性,同时也为染色体非整倍体的检出提供了诊断依据。FISH技术应用于产前诊断具有快速、简便、灵敏的优点,有较大的临床应用价值。