精子获能的研究进展

精卵融合之前精子必须获能。获能曾被定义为精子活动亢进 ,但目前认为精子活动亢进可能为精子获能的一个方面或精子获能的结果 ,两者并不完全一致。目前 ,研究精子获能的方法主要有 :体外授精 ,顶体反应的诱导 ,金霉素荧光分析法和麦胚凝集素、植物血凝素荧光分析法。精子获能的体外研究主要集中于对诱导精子获能的物质和诱导后结果的分析 ,为进一步阐明精子获能的分子机制和从分子水平给予获能下一个准确定义打下了基础     

人睾丸前列腺素D合成酶的原核表达

目的：将获得纯化的重组人睾丸前列腺素D合成酶（L－PGDS）用于基础和临床研究,方法：在原核表达系统中,用异丙基-β-D－硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组质粒pGEX-2T／htL-PGDS的表达,用谷胱甘肽琼脂糖珠亲和并纯化重组融合蛋白GST／htL-PGDS,再用凝血酶裂解融合蛋白,从而获得纯化的重组L－PGDS。对表达纯化重组蛋白的质粒进行DNA测序,并对重组蛋白进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）分析,鉴定其是否为所需目的蛋白。结果：用IPTG诱导重组质粒pGEX-2T／htL-PGDS表达的最佳浓度为1mmol/L最佳时间为4h。在此基础上获得的融合蛋白用凝血酶裂解后获得单一纯化的重组蛋白L-PGDS,最佳裂解时间为2h。SDS－PAGE和DNA测序证实,所获的重组蛋白确系所需目的蛋白,结论：用上述方法可获得纯化的人睾丸L－PGDS。     

抗人肝癌MDscFV基因的表达及其免疫活性初步研究

将抗人肝癌单克隆抗体MD的重链可变区VH和轻链可变区VL基因重组，并使其表达。采用PT-PCR技术扩增VH及VL基因，通过重叠延伸拼接PCR在VH和VL基因间引入连接短肽，体外构建MDscFV基因，经过常规转化与筛选，诱导表达蛋白。MDscFV基因全长为732bp，VH354bp位于上游VL330bp位于下游。重组蛋白相对分子量36kDa。scFV保留了与亲本抗体MD相似的免疫活性。成功地构建了抗人单链抗体MDscFV，并获得了较高水平的功能性表达。     

血液细胞与分子生物学检验进展

临床血液学检验 (ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｌｏｏｄ)的主要任务是采用物理化学、自动血细胞分析、细胞和分子生物学、显微镜及免疫化学等技术 ,对血液系统疾病的发生、发展进行实验室的诊断 ,为临床提供实验诊断的依据。可以说 ,血液病的诊断与治疗依赖于血液学的检验 ,血液学检验的发展提高了对临床血液病发生机制的认识。传统血液学检验主要包括白细胞、红细胞、血小板及血栓止血的检验。然而 ,随着细胞生物学、分子生物学等生物技术的发展 ,血液学检验的内容及临床应用已有了较大的拓展 ,尤其在血栓与止血的检验、造血干 /祖…     

蛋白激酶CK2α基因在肝癌中的表达及其意义

为了克隆肝癌中CK2α基因并研究其功能。通过逆转录PCR从肝癌组织及癌旁肝组织中获得CK2α亚基因编码区cDNA。利用表达载体pT7—7进行定向克隆。IPTG诱导表达，Western blot鉴定。CK2α在肝癌中表达强于癌旁肝组织。转化子的阳性筛选率为100％。重组质粒转化表达菌经IVTG诱导后出现一个分子量42kDa蛋白过度表达，Western blot结果证明，过度表达产物能与抗人CK2α亚基抗体发生特异性免疫反应。结论 蛋白激酶CK2α亚基在肝癌中表达，并产生一定的功能。     

骨髓间质干细胞绿色荧光蛋白基因的转染和克隆化研究

目的 建立能稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)并连续传代培养的骨髓间质干细胞(MSCs)株。方法 采用电穿孔法将带有GFP的质粒(pGFP-N1)在不同条件下转染MSCs,经过G418筛选,有限稀释法筛选阳性克隆,荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP的表达情况。结果 电穿孔以电容量1050μF、电压260V时效果最好,转染GFP的MSCs能在含有G418的培养基中生长,未转染的骨髓间质干细胞不断死亡。转染24h后即能观察到少量荧光细胞,一个月后大部分荧光细胞呈集落样生长,荧光表达较强,转染率为50％-60％。体外克隆后,能稳定表达至10代,10代后荧光强度明显减弱。结论 GFP基因能在MSCs中进行有效的复制、转录和翻译,并可持续、稳定、高效表达;转染GFP的MSCs能作为研究MSCs的诱导分化及生物细胞工程治疗的载体细胞。     

重组纤溶酶原激活剂抑制剂-2对裸鼠皮下纤维肉瘤细胞移植瘤超微结构的影响

目的：研究重组纤溶酶原激活剂抑制剂一２基因表达对纤维肉瘤细胞超微结构的影响。方法：透射电镜对裸鼠皮下纤维肉瘤细胞移植瘤细胞超微结构进行研究。结果：ＨＴ１０８０Ｃ＋细胞形态多为不规则形状，细胞膜呈波状和突起。核膜呈波状或是凹陷很深。而转染纤溶酶原激活剂抑制剂一２基因的克隆细胞则显示细胞膜基本无突起，核多呈校形或椭圆形，核膜较平滑等良性化的结构。结论：重组纤溶酶原激活剂抑制剂一２可使纤维肉瘤细胞恶性特征减弱，降低肿瘤细胞的侵袭性。     

染色体荧光原位杂交技术研究小片段和复杂的染色体易位

染色体之间的平衡易位，当片段很小或涉及染色体数目多时，显微镜下容易漏诊，或难以准确判定断裂点。本文报告了用染色体荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）的实验技术结合常规Ｇ显带、高分辨Ｇ显带技术诊断了２例难辨认的染色体易位。本研究表明，ＦＩＳＨ技术结合细胞遗传学核型分析，对于检测小片段难辨认或复杂的染色体易位是非常有帮助的。     

肝癌高危儿童中乙肝病毒逃脱变异分子机制研究

目的；分析受乙肝疫苗保护后部分儿童的“免疫无效”现象。方法：采用巢式PCR－SSCP银染技术对60例曾受疫苗保护的儿童血清中HBV DNA S基因片段进行研究。结果：在HBsAg阴性血清中存在HBV S基因点突变，该突变位于从HBV基因组EcoR I位点算起的第367－369核苷酸区域内，结论：肝癌高危儿童中发现存在HBV逃脱变异，疫苗刺激机体所产生的抗体不能中和入侵的HBVa决定族，也不能阻断HBV感染致使产生“免疫无效现象”。     

氯化钇和氯化镨对人血淋巴细胞微核率的影响

目的探讨稀土元素钇和镨的遗传毒性。方法用微核试验法研究了氯化钇和氯化镨对体外培养的人淋巴细胞微核率的影响。结果钇和镨能够引起人血淋巴细胞微核率显著升高，在一定范围内，微核率随氯化钇、氯化镨处理浓度的增大而提高。结论提示稀土元素钇和镨具有一定的遗传毒性