RNAi技术在肝癌研究中的应用

肝癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类健康。肝癌的传统治疗方法效果差,目前缺乏有效的治疗手段,因此寻找新的更有效的肝癌治疗策略显得尤为迫切。近年来,随着分子生物学的深入研究,RNA干扰(RNAi)技术的应用为肝癌的治疗带来了新突破。RNAi技术特异性高、稳定性好、无免疫原性,在病毒感染、肝癌等疾病治疗上有广阔的应用前景,其在抑制肝癌细胞生长、增殖、侵袭转移、增强肝癌细胞凋亡和对药物的敏感性等方面有较好的表现。本文将对近年来RNAi技术在肝癌基因靶向治疗领域的应用研究作一综述。     

microRNAs对一碳单位代谢的调控及相应生物学过程的影响

一碳单位代谢(OCM)是生物体一碳单位即甲基基团从供体化合物转移到受体的过程,对DNA合成和DNA甲基化至关重要。microRNAs (miRNAs)是一类约为22个核苷酸的内源非编码RNA,能够通过与靶 mRNA特异性结合而导致靶mRNA降解或抑制其蛋白的翻译。miRNAs 通过调节转录后水平来调控基因的表达并参与后续的生物学过程,在一碳单位代谢和相应生物学过程中发挥着重要作用。本文阐述了miRNAs在一碳单位代谢中的作用及其研究进展。     

犬传染性肝炎DNA疫苗安全性评价

目的 研究犬传染性肝炎核酸疫苗pVAX1-CpG-Loop的安全性.方法 BALB/c小鼠随机分为4组,高剂量组(肌内注射每只200 μg)、低剂量组(肌内注射每只100 μg)、联合免疫组(肌内注射每只100μg,皮下注射50μg,滴鼻每只50μg)和PBS组,每两周免疫1次,共免疫3次.末次免疫后4周、6个月检测血常规和血液生化及对F1代的影响,用PCR和RT-PCR的方法检测DNA疫苗的生物学分布和存留时间,末次免疫后4周和6个月取脏器观察病理损伤.结果 各剂量组的主要血液学检测指标、对F1代的影响差异无显著性.末次免疫后4周各剂量组AST明显高于对照组.DNA疫苗在注射部位可存留8周,其中高剂量组和低剂量组在肝、脾、肾和注射部位有分布,联合免疫组在肺组织也有分布.末次免疫后4周小鼠肝肾有淋巴细胞浸润,6个月后慢性炎症明显好转.结论 由犬传染性肝炎病毒DNA疫苗引起的肝肾损伤是一过性的,并且pVAX1-CpG-Loop没有整合到宿主基因组,也没有传递给F1代.     

纤维蛋白原Bβ-148(C→T)基因多态性与纤维蛋白原水平、颈动脉粥样硬化相关性研究

目的研究纤维蛋白原(Fg)Bβ-148(C→T)基因多态性与Fg水平、颈动脉粥样硬化相关性。方法用聚合酶链反应(PCR)限制性片段长度多态性(RFLP)分析方法;使用Clauss试剂盒采用自动检测法测定Fg水平;彩色多普勒诊断颈动脉粥样硬化并分级,0级<1mm,1级≤2mm,2级≤3mm,3级>3mm,4级完全闭塞。结果T/T型患者血浆Fg水平4.13±1.44与C/T型血浆Fg水平3.3±1.05、C/C型血浆Fg水平3.62±0.38比较,有显著性差异(P<0.05)。T/T型与严重的颈动脉粥样硬化明显相关(P<0.005)。结论FgBβ-148(C→T)突变基因T与Fg水平、严重的颈动脉粥样硬化明显相关。     

两种新型实验动物垫料的性状研究

目的测定新开发的实验动物垫料玉米秸、麦秸的物理性状及卫生指标,探索其定型生产的合理流程。方法对玉米秸、麦秸进行合理加工,测定并比较玉米秸、麦秸、刨花的物理性状、化学污染物含量及携带的微生物数量。结果3种垫料的化学污染物指标均低于我国实验动物配合饲料卫生标准的要求。经预真空高压灭菌后垫料中菌落总数、大肠菌群、沙门菌数、真菌数等微生物指标均小于我国配合饲料卫生标准的要求。经预真空高压灭菌后3种垫料刨花、麦秸、玉米秸的含水量平均为(7.52±0.15)%、(7.60±0.13)%、(7.28±0.13)%。吸湿性分别为(290.94±62.58)%(、414.44±81.21)%(、325.84±78.11)%。结论新开发的实验动物垫料麦秸、玉米秸合乎实验动物垫料的性能要求,适合用于啮齿类实验动物饲养。     

罕见的母亲串联易位(14;15)致畸1例

染色体着丝粒融合的罗伯逊易位导致胎儿畸形临床常见,但由串联易位致畸的病例罕见,现报告1例.     

大鼠肝包膜下移植Walker-256制备肝癌模型

目的通过原位移植的方法制备大鼠肝癌动物模型。方法取大鼠肿瘤细胞Walker-256制备为浓度1×10^8个／ml,分别于Wistar大鼠肝包膜下接种0．04ml。观察大鼠肝脏实体瘤的生长情况及肺转移的发生率。结果肝包膜下接种细胞悬液7d可见较小肿瘤块生长;14d开始出现肺转移,并伴有肠系膜、生殖系统的转移;21d肺转移率达100％。肝肿瘤组织HE染色结果可见肿瘤组织呈条索及团块状排列,排列紊乱,癌细胞索之间由血窦相连,癌肿边缘的肝组织受压萎缩。肺组织切面有多个散在的圆形或卯圆形实化灶。HE染色结果可见腺体样或乳头状结构,核染色深,核仁、核膜比较清楚。     

复肝春6号抗H22肝癌作用机制的实验研究

目的探讨复肝春6号（FGC-6）抗肝癌作用机制。方法建立荷H笠肝癌小鼠模型，以DNA琼脂糖凝胶电泳观察FGC-6对肿瘤细胞诱导凋亡的作用，以Western blot检测肿瘤组织中bcl-2、bax基因的蛋白表达水平；制备FGC-6含药血清，观察其对体外培养H22细胞的增殖抑制作用。结果FGC-6可诱导肿瘤组织DNA片段化，琼脂糖凝胶电泳结果可见梯状条带出现；Western blot结果显示FGC-6使肿瘤组织中bcl-2基因表达量明显降低，而bax基因的表达水平却明显升高；FGC-6含药血清对体外培养H22细胞增殖有明显抑制作用。结论FGC-6的抗肝癌作用可能与调节bcl-2和bax基因的表达量，诱导肝癌细胞凋亡有关。     

PCR方法检测实验动物皮肤病原真菌

目的对用于实验动物皮肤病原真菌检测的分子生物学方法即皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR（任意引物聚合酶链式反应）相结合技术的特异性及敏感性进行评价,并通过建立动物模型及实际的皮肤真菌检测来验证此方法的可行性。方法特异性测定：用皮肤病原真菌通用引物进行PCR,扩增大肠杆菌DNA、犬肝炎病毒DNA及小鼠肝癌H22细胞DNA。敏感性测定：以紫外分光光度法测定DNA质量浓度,根据测定值将DNA进行10倍系列质量浓度稀释,得到100 ng~10 fg的8个质量浓度,然后对其进行PCR扩增。建立实验动物皮肤病原真菌感染的动物模型。用皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR相结合技术检测从动物模型及河北省各地的实验动物单位采集的动物皮肤标本。结果用皮肤病原真菌通用引物扩增实验动物三种皮肤病原真菌标准菌株,均扩增出大小为440 bp的条带,而大肠杆菌、犬肝炎病毒、小鼠肝癌H22细胞均未扩增出条带。皮肤病原真菌通用引物PCR敏感性测定,模板DNA 100 ng~100 fg的7个系列浓度均扩增出了阳性条带,10 fg为阴性。建立了实验动物皮肤病原真菌感染的动物模型。对河北省各地的实验动物皮肤真菌检测过程中出现一例通用引物阳性标本。结论皮肤病原真菌通用引物（CHS1 1S,CHS1 1R）具有较强的特异性,敏感度为100 fg;将皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR技术相结合可用于检测实验动物皮肤病原真菌。     

犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白Loop1、Loop2基因的克隆与表达

腺病毒主要的中和抗原表位位于六邻体蛋白Loop1、Loop2上，目前的研究主要集中在人腺病毒，犬传染性肝炎病毒（即犬腺病毒Ⅰ型）尚未见报道。本次研究参考Genebank发表的基因序列设计引物，提取ICHV基因组DNA，分别PCR扩增六邻体蛋白（Hexon）的Loop1、Loop2基因片段，用T4酶连接在一起，克隆入原核表达载体pET28a中，测序显示本室保存病毒分离株Loop1与CLL株、RI261株和TorontoA26/61株核苷酸序列同源性分别为100%、100%和83.8%；Loop2与CLL株、RI261株和TorontoA26/61株核苷酸序列同源性分别为88.1%、88.1%和99.3%，推导的氨基酸序列同源性分别为93.6%、93.6%和98.6%。转化BL21工程菌，实现了重组Loop蛋白在大肠杆菌中的高效表达，分子质量约为36kDa，并且利用镍柱纯化重组蛋白，纯度达95%以上。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后，以间接ELISA法测定血清抗病毒抗体效价达1：320以上，western blot鉴定免疫血清与ICHV特异性结合。本实验为建立新的犬传染性肝炎病毒基因工程产品奠定了良好的基础。