咖啡酸苯乙酯诱导人大肠癌细胞凋亡的研究

目的 :探讨咖啡酸苯乙酯 (caffeicacid phenethylester ,CAPE )诱导大肠癌HCT116细胞发生凋亡的作用 ,为CAPE用于大肠癌的临床治疗提供依据。方法 :采用MTT法、HE染色、AnnexinV FITC/PI双染色流式细胞术和末端脱氧核苷酸标记法(TUNEL) ,检测不同浓度CAPE作用后HCT116细胞增殖活性和细胞凋亡的变化。结果 :2 5、5 0、10 0mg/L的CAPE处理HCT116细胞 2 4h后 ,抑制率分别为12 2 0 %、2 2 44 %、3 7 86% ,细胞增殖明显受到抑制 ,呈量效依赖性 ;凋亡率分别为( 10 2 0± 0 66) %、 ( 16 60± 0 61) %、( 2 5 5 3± 3 2 7) % ,均显著高于对照组 ( 5 47± 0 93 ) % ,P <0 0 1。HE染色呈现典型的凋亡细胞形态特征。TUNEL法标记见明显的凋亡阳性细胞。结论 :CAPE可诱导体外培养的大肠癌细胞发生凋亡     

APE1 siRNA表达载体的构建及其对骨肉瘤细胞APE1表达的抑制作用

目的构建DNA损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,观察其对骨肉瘤细胞HOS和9901APE1蛋白表达的抑制作用.方法设计合成APE1 siRNA cDNA序列与线性化pSilence 2.0-U6质粒连接后构建APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,经酶切鉴定和测序确认.应用免疫组化检测骨肉瘤细胞APE1蛋白的表达,同时应用免疫印迹检测其对APE1基因的敲低作用的量效和时效关系.结果通过双酶切鉴定和测序分析,成功构建了APE1 siRNA表达载体.免疫组化和免疫印迹证实pSilence APE1对骨肉瘤细胞APE1基因具有特异性"敲低"作用,其抑制APE1基因表达效率为72%～95%,而且其抑制作用以3.0μg pSilence APE1转染第3天最为显著.结论成功构建了APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,并且该载体能有效地敲低骨肉瘤细胞APE1基因表达.     

咖啡酸苯乙酯对大肠癌细胞β-catenin蛋白表达的影响

目的探讨咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对体外培养的人大肠癌HCT116和SW480细胞β-catenin蛋白表达的影响.方法以大肠癌细胞株HCT116和SW480为研究对象,应用间接免疫荧光、Western blotting检测2.5、5.0、10 mg/L CAPE处理24、48 h后细胞β-catenin表达变化.结果Western blotting检测结果显示2.5、5.0、10mg/L CAPE处理HCT116和SW480细胞24、48 h后β-catenin总蛋白表达降低,呈剂量和时间依赖性,间接免疫荧光检测结果显示细胞β-catenin蛋白胞核及胞浆表达下调,细胞连接处胞膜表达上调.结论CAPE能明显下调β-catenin蛋白表达并阻止其核转位,这可能是其抗癌作用的重要分子机制.     

EGFR抑制剂吉非替尼对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂吉非替尼对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响,为原发性肝癌的分子靶向治疗提供实验依据.方法应用免疫组化法检测SMMC-7721细胞中EGFR的表达,不同浓度吉非替尼处理SMMC-7721细胞48 h后,MTT法检测细胞对该药物敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡变化.结果SMMC-7721细胞中EGFR呈强阳性表达,吉非替尼明显下调EGFR表达,抑制SMMC-7721细胞生长,呈剂量时间依赖性,8 mmol/L吉非替尼组细胞凋亡率为(58.58±2.95)%,显著高于对照组(0.11±0.04)%,(P＜0.01).结论吉非替尼能够通过诱导细胞凋亡抑制SMMC-7721细胞生长,因而有望为肝癌的分子靶向治疗提供新的有效途径.     

免疫组化法检测大肠肿瘤DNA修复基因APE1表达和细胞定位

目的 探讨DNA修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1,APE1)在大肠癌发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化PowerVisionTM法检测125例大肠癌、72例大肠腺瘤、60例癌旁大肠黏膜和40例正常大肠黏膜中APE1的表达和细胞定位,并分析其与大肠癌临床病理之间的关系.结果 正常大肠黏膜APE1呈胞核表达,大肠腺瘤和大肠癌组织APE 1表达特征发生改变,呈胞核表达、单纯胞浆表达或核浆共同表达,大肠癌组织APE1胞浆异位表达率为73.6%,大肠腺瘤APE1胞浆异位表达率为83.3%,二者差异无统计学意义(P＞0.05),但均显著高于癌旁大肠黏膜(10%)和正常大肠黏膜(0) (P＜0.01).APE1胞浆异位表达与大肠癌临床分期和淋巴结转移有关(P＜0.01、P＜0.05).结论 APE1胞浆异位表达可能在大肠癌的发生、发展中起重要作用.     

血清甲胎蛋白及P53抗体与原发性肝癌病理分化程度的关系研究

目的通过联合检测血清甲胎蛋白(AFP)和P53抗体在原发性肝癌患者中的分布状况(阳性率),分析血清AFP和P53抗体与肝癌病理分化程度的关系。方法采用化学发光法测定患者血清AFP含量,用ELISA法测定患者血清P53抗体的水平,并与肝癌病理分化程度进行相关分析。结果 50例原发性肝癌患者血清AFP阳性率为78.00%(39/50),血清P53抗体阳性率为48.00%(24/50)。血清AFP含量和P53抗体滴度与肝细胞性肝癌的分化程度均呈负相关,即患者血清AFP和P53抗体含量越高,其病理分化程度越低。结论联合检测肝细胞肝癌患者血清中甲胎蛋白及P53抗体的含量和表达水平,可能有助于肝细胞肝癌患者的早期诊断和治疗。     

医院合理用药管理的实践与体会

目的探讨医疗机构开展合理用药工作管理的方法及机制。方法分析医疗机构不合理用药情况的原因,采取了相应对策促进合理用药管理。结果与结论合理用药管理是系统性工程,需要加强综合管理,该院通过组建静脉配置中心、改进药品调剂模式、加强信息化建设、实施行政干预等方法逐步、系统地开展合理用药工作,取得了一定成效。     

全过程质量管理体系在药品监管中的应用

世界卫生组织提供的一组最新资料显示,全球有近1/7病死者的死因不是自然固有的疾病,而是不合理用药[1].由于近年来人们对抗菌药物的过分依赖和滥用,使得耐药菌株迅猛增长,已成为与耐药结核菌、艾滋病病毒相并列的对人类健康构成威胁的三大病原微生物之一[2].     

DNA损伤修复基因MPG在人体骨肉瘤的表达及其治疗意义

目的本研究首先观察N-烷基嘧啶DNA糖基化酶(MPG)在人体骨肉瘤中的表达特点及其与患者预后的关系,进而构建复制缺陷型腺病毒MPG表达载体,探讨人骨肉瘤细胞HOS过表达MPG及其对DNA损伤药物MMS,MNNG和TMZ敏感性的影响.方法应用免疫组化方法检测60例骨肉瘤组织和3株骨肉瘤细胞中MPG的表达.按染色强度将其分为低表达组和高表达组,统计分析它们与临床病理及患者预后的关系.应用流式细胞术、蛋白印迹和HEX标记寡核苷酸方法确定MPG腺病毒表达载体Ad5 HA-MPG在人体骨肉瘤细胞HOS中的感染效率,MPG蛋白表达和MPG酶活性;MTS、SRB和[3H]胸腺嘧啶掺入法检测细胞存活;PE-Annexinv/7-AAD流式细胞术检测细胞凋亡.结果3株骨肉瘤细胞MPG均呈弱阳性表达.60例骨肉瘤中MPG 40例(65%)为高表达,MPG表达和WHO分型和患者预后显著相关.10 MOI Ad5 HA-MPG可使90%以上HOS感染,感染细胞高表达MPG并具有MPG酶活性.MPG过表达HOS显著地提高DNA损伤性化疗药物MMS、MNNG和TMZ的敏感性,其IC50值分别下降了6.0、4.5和2.5倍.结论Ad5 HA-MPG瞬时MPG过表达,可能是一种提高骨肉瘤细胞对DNA损伤性化疗药物敏感性的潜在治疗方法.