HIV-1B亚型核心蛋白gag基因真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达

目的克隆人类免疫缺陷病毒Ⅰ型B亚型核心蛋白gag基因,构建真核表达载体,并在真核细胞中表达,为进一步制备自行设计的以λ噬菌体作为载体的HIV核酸疫苗奠定基础。方法以克隆好的HIV1B亚型U26942全基因质粒DNA作为模板,根据Genbank中gag基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5’端分别引入BamHⅠ及XhoⅠ酶切位点,特异性的扩增gag基因。TA克隆后经双酶切、测序等鉴定重组质粒,再经双酶切、连接构建含gag编码基因的真核表达载体,并进行酶切鉴定分析pcDNA3.1(+)/gag。在脂质体介导下转染HepG2细胞,经G418压力筛选建立稳定转染gag基因的细胞系,用RT PCR及Western印迹检测其在HepG2细胞中的表达。结果重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切成5.4kb与1.5kb的片断,表明表达载体pcDNA3.1(+)中插入了gag基因片断,测序结果表明编码框正确。RT PCR及Western印迹证实稳定转染gag基因的HepG2细胞系中有该基因的表达。结论成功构建了HIV1B亚型核心蛋白gag基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/gag,并在HepG2细胞中获得稳定表达。     

青宝丹外敷治疗静脉炎的观察与护理

静脉炎是指由于静脉输液引起的浅表静脉局部炎症,是静脉输液中常见的并发症。现代医学认为,静脉炎的发生机制主要是在末梢静脉输入非生理pH值的液体,血浆渗透压的液体或某些微粒因子等,刺激局部血小板,引起聚集,形成血栓并释放组胺,使静脉收缩、管腔变窄,出现血流缓慢现象,影响对输注液体的稀释作用,     

RNAi技术沉默K562细胞中c-myc基因的初步研究

目的 运用RNAi技术,设计针对c-myc的小干扰RNA(siRNA),研究其干扰效果。方法 针对c-mycmRNA的第1357靶位点设计siRNAs,经Lipofectamine^TM2000脂质体法转染K562细胞,进行RT-PCR、细胞计数和MTT法及流式细胞仪检测,观察其干扰效果。结果 转染组与阴性对照组和空白对照组相比,c-mycmRNA表达明显减弱,细胞计数和MTTD(λ)值均有显著降低,并有明显的凋亡率。结论 运用RNAi技术,可以有效地干扰c-myc的表达,并进一步诱导细胞凋亡。     

经椎弓根楔形截骨前方垫高-后方闭合矫正术治疗静止期胸腰椎结核角状后凸畸形

目的探讨经椎弓根楔形截骨前方垫高-后方闭合矫正术治疗静止期胸腰椎结核角状后凸畸形的临床疗效。方法对30例静止期胸腰椎结核角状后凸畸形患者采用经椎弓根楔形截骨前方垫高-后方闭合矫正术治疗,观察患者术后切口愈合、感染、Cobb角、视觉模拟评分法（VAS）评分及植骨融合情况。结果患者均顺利完成手术,手术切口一期愈合,未发生切口感染等并发症。术后均获得随访,随访时间3~45（24.4±7.4）个月。术后1周、末次随访后凸Cobb角均较术前明显减少,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;但末次随访与术后1周后凸Cobb角比较差异无统计学意义（P＞0.05）。VAS评分由术前4~8（5.4±1.3）分降至术后1周的0~3（1.2±0.4）分,差异有统计学意义（P＜0.05）。术后随访过程中,患者植骨均达到骨性融合。患者腰背部疼痛及神经功能障碍均得到不同程度改善。结论经椎弓根楔形截骨前方垫高-后方闭合矫正术治疗静止期胸腰椎结核角状后凸畸形疗效满意,是一种较为安全、理想的手术方式。     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行测序鉴定。结果被检样品扩增出特异片段,经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列,证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的 探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法 对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA，用巢式PCR外侧下游引物进行反转录，以反转录产物为模板，进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMDl8-T载体后进行测序鉴定。结果 被检样品扩增出特异片段，经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论 反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列，证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。     

siRNA抑制HPV18 E6基因及其对HeLa细胞凋亡的影响

目的研究特异小干扰RNA(sm all interfering RNA,siRNA)对宫颈癌HeLa细胞中人乳头瘤病毒(hum an pap-illom avirus,HPV)18型E6基因的抑制及其对细胞凋亡的影响。方法针对HPV18E6基因设计siRNA序列,经PCR方法体外扩增,得到含有U6启动子以及siRNA序列的PCR产物,利用L ipofectam ineTM2000脂质体转染HeLa细胞,在U6启动子的作用下于细胞内转录siRNA。针对转染后不同时间点采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力,流式细胞仪PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR测定HPV18E6 mRNA变化。结果转染siRNA后细胞活力受到显著抑制(P<0.05),光镜下出现明显的凋亡形态,72 h的凋亡率达到55.8%。RT-PCR结果显示,细胞转染24、48和72 h后HPV18E6 mRNA分别减少了57%、78%和40%,而siRNA阴性对照与未转染细胞相比差异不显著。结论siRNA可特异有效的干扰宫颈癌HeLa细胞内HPV18E6基因的表达,从而可诱导肿瘤细胞凋亡。     

240例慢性原发性肾小球疾病的中西医结合治疗

我们自1976～1986年采用中西医结合方法治疗慢性原发性肾小球疾病240例,效果较好,现报告如下。临床资料本组240例均为本院肾病门诊和住院患者,其中男性97例,女性143例。年龄:14～68岁,平均42.5岁。诊断均按照1979年10月北戴河座谈会制定的"关于原发性肾小球疾病的临床分类标准",属于慢性肾炎普通型107例,肾病型74例,高血压型14例,慢性隐匿性肾炎14例,慢性肾炎尿毒症31例。病程:2～31年,平均9.6年。治疗方法肾病型:强的松40～60mg/日(作为     

植物油乳治疗胃溃疡的实验与临床研究

目的：对两种植物油乳──鸦胆子油乳（简称鸦乳）和豆油乳治疗胃溃疡的作用进行观察。方法：首先观察鸦乳对四种胃溃疡动物模型的疗效，进而探讨其对动物胃粘膜内源性PGE2、MDA、SOD活性和氧自由基相对含量的影响，然后通过开放性临床观察和随机双盲对照试验观察其临床疗效。结果：鸦乳对四种胃溃疡动物模型均有疗效（P＜0．01）；豆油乳对应激性胃溃疡动物模型亦有疗效，作用与鸦乳比较，差异无显著性（P＞0．05）；鸦乳增加动物及人体胃粘膜内源性PGE2（P＜0．01），降低动物胃粘膜SOD活性（P＜0．01），减低动物胃粘膜MDA和氧自由基相对含量（P＜0．01）。开放性临床观察及随机双盲对照临床观察均显示，鸦乳治疗胃溃疡的8周有效率＞91．62％，8周愈合率＞75％，疗效优于对照剂西咪替丁（国产）和石蜡油乳（P＜0.01），未发现不良反应。结论：鸦乳和豆油乳治疗胃溃疡的疗效是肯定的，其主要作用机理是增加胃粘膜内源性PGE2、减轻氧自由基对胃粘膜的损害。