恒温扩增-核酸试纸在副溶血性弧菌快速检测中的应用

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人磷脂磷酸水解酶3基因真核表达载体的构建及其对卵巢癌细胞生长的抑制作用

目的:构建人磷脂磷酸水解酶3(hLPP3)基因的真核表达载体pLenExpress-hLPP3并转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,初步观察重组表达载体对卵巢癌细胞的转染效率、目的基因表达情况及对卵巢癌细胞生长的影响.方法:采用RT-PCR法从正常胎盘组织中提取hLPP3基因,先克隆人克隆载体pGEM-T easy质粒得到pGEM-T-hLPP3,再用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ进行双酶切,切下的hLPP3基因亚克隆入真核表达载体pLenExpress,得到pLenEx-press-hLPP3重组质粒,采用脂质体转染法转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞.实验分为3组:A组为实验组(转染表达hLPP3基因重组质粒)、B组为空质粒对照(转染空表达质粒)、C组为无转染对照.荧光显微镜观察细胞转染效率,实时荧光定量PCR法检测hLPP3 mRNA的表达,化学法测定转染前后细胞上清液中溶血磷脂酸(LPA)含量的变化,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况.结果:重组表达质粒经限制性酶切鉴定得到与hLPE,基因长度一致(936 bp)的酶切产物,测序分析证实,目的基因序列与GenBank上登录的hLPP3基因(BC009196)序列完全一致.荧光显微镜下见A、B 2组SKOV3细胞内有大量绿色荧光信号,转染率分别为67%和69%,C组细胞中无荧光信号.实时荧光定量PCR测定显示A组细胞中hLPP3 mRNA的相对表达量较B、C组明显增加(A、B、C组分别为0.510 9±0.058 4、0.149 9±0.025 5、0.143 3±0.0181,P<0.05).A组卵巢癌细胞上清液中的LPA含量较B、C组明显下降[A、B、C组分别为(2.37±0.76)μmol/L、(6.71±2.03)μmol/L、(6.84±1.49)μmol/L,P<0.05];流式细胞仪检测显示A组卵巢癌细胞凋亡率明显增加[A、B、c组分别为(30.50±2.12)%、(1.26±0.43)%、(0.10±0.03)%,P<0.05],细胞周期无明显变化.结论:成功构建了表达目的基因hLPP3的重组真核表达载体pLenEx-press-hLPP3,并能高效转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,使细胞中hLPP3基因表达水平明显升高.增强hLPP3基因表达可以降低细胞外LPA水平,诱导细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞的生长.     

S100A4蛋白在宫颈鳞痛中的表达及意义

目的研究S100A4蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义.方法应用免疫组织化学SP法检测65例宫颈鳞癌组织和10例正常宫颈组织中S100A4蛋白.结果在正常宫颈组织中S100A4蛋白不表达;在宫颈鳞癌组织中S100A4蛋白的表达率为35.4%(23/65);与正常宫颈组织比较,差异具有显著性(P＜0.01).S100A4蛋白在宫颈鳞癌中的表达与临床分期和淋巴结转移有关(P＜0.01),与组织学分级无关(P＞0.05);阳性细胞在血管平滑肌细胞以及淋巴细胞中亦有表达.结论S100A4蛋白和宫颈鳞癌的侵袭和转移密切相关;S100A4蛋白可作为判定宫颈鳞癌临床病理特征的重要指标.     

妊娠合并急性胰腺炎16例诊治体会

妊娠合并急性胰腺炎是一种严重的合并症,具有发病急、临床症状不典型、并发症多、病死率高的特点,对母婴均具有极大的危害,易造成胎儿窘迫、死胎、流产,孕妇甚至并发DIC危及生命.现收集我院2002年1月至2009年12月收治的16例患者资料,总结分析如下.     

实时荧光定量PCR技术在食源性致病菌快速检测中的应用

<正>目前我国对食源性致病菌的标准检测方法一直沿用传统的细菌培养法,由于其检测过程繁琐复杂,所用试剂繁多,检测周期较长[1],已难以满足当前卫生应急检测快速诊断的需求[2]。因此,国内外学者都致力于建立以分子生物学为基础的快速检测方法。自美国Applied Biosystems公司于1996年首先推出一种特异、敏感、操作简便的分子检测技术,即实时荧光定量PCR技术以来,国内外已利用此技术相继开     

经脐单孔腹腔镜手术在妇科附件手术中应用的对比研究

目的探讨经脐单孔腹腔镜手术治疗年轻患者妇科附件良性病变中的应用价值。方法 2010年7月～2011年12月36例妇科附件良性病变行经脐单孔腹腔镜手术(单孔腹腔镜组),于脐轮上缘做一2 cm弧形切口,置入单孔腹腔镜穿刺套管,建立人工气腹,置入腹腔镜探头及器械进行手术,手术操作步骤同传统腹腔镜手术,并与同期38例传统腹腔镜妇科手术(传统腹腔镜组)进行对比。结果 2组手术均获成功。与传统腹腔镜组比较,单孔腹腔镜手术时间长[单侧卵巢成熟性畸胎瘤/浆液性囊腺瘤剥除术:(50.3±9.1)min vs.(35.6±8.5)min,t=4.340,P=0.000;输卵管整形术:(32.3±7.6)min vs.(15.7±5.3)min,t=5.383,P=0.001;输卵管切除术:(34.1±5.2)min vs.(14.4±3.5)min,t=6.864,P=0.000;输卵管开窗取胚术:(29.6±7.2)min vs.(16.5±5.7)min,t=4.003,P=0.001]。2组术中出血量[(29.9±11.1)ml vs.(30.6±12.0)ml,t=-0.260,P=0.796]、排气时间[(36.5±4.1)h vs.(35.2±5.4)h,t=1.162,P=0.249]、住院时间[(3.4±0.7)d vs.(3.2±0.9)d,t=1.063,P=0.291]和术后病率[8例vs.7例,χ2=0.165,P=0.684]无统计学差异。2组患者术后随访6个月,均无切口疝发生。结论经脐单孔腹腔镜手术治疗年轻患者妇科附件良性病变达到了微创与美观的结合,安全可行。     

年轻患者经脐单孔腹腔镜手术32例临床应用研究

目的:探讨经脐单孔腹腔镜手术( LESS)在治疗年轻患者妇科疾病中的应用价值.方法:比较32例LESS(LESS组)与32例同期传统腹腔镜手术(对照组)年轻患者的术中、术后及随访情况.LESS组单孔腹腔镜于脐轮上缘行一2 cm弧形切口,置入单孔腹腔镜穿刺套管,建立人工气腹,进腹腔镜探头及器械进行手术,手术操作步骤同对照组.结果:两组手术均获得成功,LESS组不同疾病及总的平均手术时间与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),术中出血量、肛门排气时间、住院时间和术后病率比较差异均无统计学意义(P＞0.05).两组患者均无术中、术后并发症发生,随访6个月,均无切口疝发生.结论:对于妇科年轻患者,LESS微创、安全可行,但手术操作难度相对增大,应尽量选择盆腔无粘连或粘连较轻的患者.     

VEGF-C与妇科肿瘤关系的研究进展

血管内皮生长因子(VEGF)-C是VEGF家族的新成员,通过促进肿瘤细胞生长和抑制凋亡,介导淋巴血管形成促进肿瘤转移,在宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌的发生发展及转移中起重要作用.VEGF-C成为控制肿瘤生长转移以及治疗肿瘤新的理想靶点,阻断VEGFR-3信号通路可为阻止肿瘤淋巴结转移提供一个有效途径.