川芎嗪促进大鼠视网膜神经节细胞轴突再生的实验研究

目的通过在视网膜组织三维立体培养系统中加入不同浓度的川芎嗪溶液,观察川芎嗪对视网膜神经节细胞轴突再生的作用。方法建立体外培养的大鼠视网膜组织三维立体培养系统,将1～3d新生远交群SD（Sprague Dawley）大鼠视网膜切成0．5mm×0．5mm大小的视网膜组织,加入不同浓度（0．125、0．25、0．5、1．0g／L）川芎嗪溶液后,在相差显微镜下动态观察视网膜神经节细胞轴突的生长情况,于加药后第3、6和9天记录再生轴突的数目及长度。结果与对照组相比,各浓度川芎嗪对视网膜神经节细胞轴突生长均有促进作用,以0．5g／L浓度效果最明显,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组织化学染色显示视网膜神经节细胞的轴突具有明显再生现象。结论一定剂量范围的川芎嗪可促进视网膜神经节细胞轴突再生和伸长。（中国跟耳鼻喉科杂志,2009,9：86—88）     

不同重组病毒载体在大鼠骨髓间充质干细胞中的转染效率及基因表达

目的：探讨不同的重组病毒载体对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞（rMSCs）的转染效率和外源基因表达水平,为利用骨髓间充质干细胞进行细胞和基因治疗提供实验依据。方法：采用淋巴细胞分离液、密度梯度离心及体外培养方法分离rMSCs,流式细胞仪检测细胞表面CD11b、CD45和CD90的表达鉴定细胞类型。进一步用携带绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的重组Ad5-EGFP、Ad5F35-EGFP、rAAV1/2-EGFP、rAAV2-EGFP及Lentivirus-EGFP转染体外培养的rMSCs,荧光显微镜观察、流式细胞仪检测EGFP阳性率和荧光强度。结果：rMSCs细胞表面CD11b、CD45和CD90阳性率分别为（14.1±3.3）%、（1.1±0.4）%和（82.3±5.7）%。Ad5-EGFP按10、100和1000MOI转染rMSCs,2d后流式细胞仪检测,EGFP阳性率分别为（33.6±2.7）%、（88.6±1.0）%及（99.9±0.1）%,荧光强度为4.4±0.3、39.8±1.5及811.4±3.9;Ad5F35-EGFP按10、100和1000MOI转染rMSCs,2d后阳性率分别为（96.9±0.4）%、（99.9±0.1）%及（99.7±0.1）%,荧光平均强度为369.3±14.8、895.4±7.5及703.2±38.4;rAAV1/2-EGFP及rAAV2-EGFP按1×104和1×105vg/细胞转染rMSCs,6d后阳性率分别为（0.94±0.31）%及（1.30±0.36）%,和（2.16±0.38）%及（3.90±0.33）%;LV-EGFP按30（TU/细胞）转染rMSCs,6d后阳性率为（60.5±3.2）%,荧光强度为27.0±3.6。结论：Ad5、Ad5F35及LV能够有效转染体外培养的rMSCs并表达外源基因,转染效率与病毒的用量间存在量效关系。     

某研究型专科医院临床研究人才队伍建设的实践与探讨

目的 以某三级甲等专科医院构建临床研究队伍为例,探索适合研究型专科医院临床研究队伍建设的有效方式.方法 回顾性分析某三级甲等眼耳鼻喉专科医院临床研究队伍的建设工作,从设立临床研究队伍的背景、组建过程、取得的成效等总结经验、发现存在的问题并提出完善建议.结果 医院为临床研究队伍提供了高水平的科研平台和保障措施,临床研究队...     

视网膜相关疾病基因治疗的现状

随着对各种疾病认识的深入和医疗手段的提高,精准医学要求我们将研究细化到分子水平。基因治疗以其独有的优势成为遗传性疾病的重要治疗手段。视网膜由于其特有的优势一直处在基因治疗研究的最前沿,已在体外实验和疾病模型中获得了较为成熟的理论和技术,已有部分转化为临床成果。本文重点综述视网膜相关疾病的基因治疗现状,分析其研究成果、突变位点和疾病模型,希望对后续疾病的研究方向和治疗手段提供有价值的参考。我们还列出了目前常用的基因治疗载体,以供相关研究者选择和改进。     

糖尿病患者白内障房水晚期糖基化终末产物及转化生长因子的变化

目的检测糖尿病患者白内障前房液中晚期糖基化终末产物（advancedg lycation end products，AGEs）与转化生长因子-β（transforming growth factor，TGF-β）及葡萄糖的含量，探讨AGE、TGF-β2水平与糖尿病患者白内障的内在联系。方法收集糖尿病患者白内障、老年性白内障的前房液，采用生化方法、酶联免疫吸附测定（enzyme—linked immunosorbent assay，ELISA）法对48例糖尿病患者白内障和54例老年性白内障的房水中葡萄糖、AGEs、TGF-β2的含量进行检测。结果糖尿病合并白内障患者房水中葡萄糖水平和AGEs含量分别为（6．83±1．40）mmol／L、（355．79±195．64）pg／mL，显著高于老年性白内障患者[（4．74±1．30）mmol／L、（161．67±86．23）pg／mL]，两组间差异具有统计学意义（P〈0．01），TGF-β2在糖尿病患者白内障的房水（368．00±264．23）pg／mL较老年性患者（732．00-4-394．57）pg／mL明显降低，两组间差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论糖尿病患者白内障房水中葡萄糖和AGEs含量显著高于老年性白内障，而TGF-β2的含量则降低。AGEs和TGF-β2在糖尿病患者白内障房水中含量的变化提示两者可能与糖尿病患者白内障的发生、发展有关。（中国眼耳鼻喉科杂志，2008，8：368—370）     

不同重组病毒载体转染大鼠骨间充质干细胞的效率及其基因表达

背景:利用基因工程细胞进行替代治疗和基因治疗中合适的供体细胞、靶细胞以及相应载体是细胞和基因治疗最为困难的部分.目的:检测重组腺病毒Ad5和Ad5F35、腺相关病毒rAAV1/2和rAAV2、慢病毒LV对大鼠骨髓间充质干细胞的感染效率和外源基因表达水平,拟筛选能够高效转导骨髓间充质干细胞的载体.设计、时间及地点:细胞基因工程对照观察,于2006-10/2007-03在上海市第一人民医院中心实验室完成.材料:清洁级SD大鼠10只用于制备骨髓间充质干细胞.所有重组病毒均携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因,AdS由本实验室制备,Ad5F35由解放军第二军医大学钱其军教授惠赠,rAAV2及rAAV1/2为本元正阳基因技术有限公司产品,LV由中科院上海生化与细胞生物学研究所郭礼和教授惠赠.方法:采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第4代用于实验.按1×105/孔接种于24孔细胞培养板中,1 d后细胞贴壁,设立5组:第1组向细胞培养液中加入10,100,1 000 MOI Ad5-EGFP,第2组加入10,100,1 000 MOIAdSF35-EGFP,第3组加入1×104,1×105vg rAAV1/2-EGFP,第4组加入1×104,1×105vg rAAV2-EGFP,第5组加入30 TU LV-EGFP.Ad病毒感染2d,rAAV及LV病毒感染6d.主要观察指标:EGFP阳性表达及荧光强度.结果:Ad3-EGFP感染24 h后镜下可见EGFP阳性细胞,随着病毒用量的增加EGFP阳性细胞数目增多,荧光亮度增强,12d后阳性细胞开始逐渐减少,荧光亮度减弱.AdSF35-EGFP感染情况与Ad5-EGFP基本相似,但EGFP阳性细胞数和荧光亮度均增加.rAAV1/2-EGFP或rAAV2-EGFP感染6 d后,EGFP阳性细胞数和荧光亮度均较弱.LV-EGFP感染第2天即可见少量EGFP阳性细胞,随着时间延长EGFP阳性细胞数目逐渐增多,至第6天表达EGFP荧光的细胞数量及亮度不再有明显变化.结论:腺病毒Ad5、AdSF35与慢病毒LV能够有效感染体外培养的骨髓间充质干细胞,并表达外源基因,感染效率与病毒用量之间存在量效关系.腺相关病毒rAAV1/2和rAAV2体外感染效果不佳.     

老年性白内障合并2型糖尿病患者晶状体上皮细胞转化生长因子β表达及其与晚期糖基化终末产物的相关性

目的研究转化生长因子p（transforminggrowthfactor—β,TGF—β）在老年性白内障合并2型糖尿病患者中的表达变化及其可能的作用机制,为进一步阐明老年性白内障合并2型糖尿病患者发病的分子机制提供实验数据。方法分别采用点杂交和实时荧光聚合酶链反应方法定量检测和分析老年性白内障患者及老年性白内障合并2型糖尿病患者晶状体前囊膜上皮细胞中TGF-β蛋白、mRNA表达水平。免疫荧光方法观察晚期糖基化终末产物（advanced glycation endoproducts,AGEs）对体外培养人晶状体上皮细胞TGF-β表达的影响。结果与老年性白内障患者相比,老年性白内障合并2型糖尿病患者晶状体前囊膜上皮细胞中TGF-β（TGF-β／2／3）蛋白表达增加（P〈0．05）,mRNA表达变化分别为TGF—β1升高（P〈0．05）,TGF—β2降低（P〈0．01）,TGF-β3未见显著改变（P〉0．05）。AGEs与晶状体上皮细胞共培养后,细胞表面TGF—β（TGF-β1／2／3）表达上调。结论TGF—β在老年性白内障合并2型糖尿病患者晶状体上皮细胞中的表达上调。AEGs可诱导晶状体上皮细胞TGF—β表达上调。（中国眼耳鼻喉科杂志,2010,10：212514）     

重组腺病毒介导绿色荧光蛋白基因对小鼠眼组织的转染和表达

目的研究不同剂量Ad5-EGFP前房注射后，报告基因在小鼠眼部组织的表达情况及分布特点。方法24只BALB／c小鼠随机分组。实验组以不同浓度梯度前房注射Ad5-EGFP。对照组前房分别注射PBS和不给予任何注射。观察活体眼部组织EGFP表达情况及阳性细胞的类型。结果低浓度注射组在各个时间点眼表均未观察到EGFP荧光表达。高浓度注射组在注射病毒第1d即可以观察EGFP的表达，在第10d时眼表EGFP荧光亮度、范围增加最为明显。EGFP在角膜内皮细胞、虹膜色素上皮细胞及小梁网阳性表达。结论Ad5型腺病毒载体定向携带报告基因在眼前节表达，为眼前节疾病的基因治疗提供了实验依据。     

炎症相关机制在青光眼视网膜视神经损伤与保护中的作用

青光眼是世界上最常见的致盲性眼病之一,但是人们对青光眼真正的发病机制还不明确,仅降低眼压并不能完全阻止视神经的萎缩和变性。炎症是所有类型青光眼进展过程中的共同特征,免疫反应、胶质细胞的活化和增殖、慢性氧化应激和线粒体功能障碍、缺血缺氧等机制均参与炎症反应过程。该文旨在对青光眼视神经损伤中与炎症相关的机制进行概述,以期为青光眼视神经的保护策略提供新思路。