BH3-Only促凋亡蛋白的研究进展

凋亡是细胞的程序性死亡,它对多细胞生物个体的发育、维持自身发展平衡以及抵御刺激起着非常关键的作用.大多数情况下,细胞生死主要由Bcl-2家族蛋白的相互作用实现[1].……     

结合新医改，拓展医学院校思想政治理论课教学新思路

思想政治教育是医德教育的基础,医药卫生体制改革与对医学生教育培养紧密相连,"新医改"相关原则、政策及目标与医学生的未来发展,包括道德素养,职业选择及职业精神的培养有密切关系。医学院校思想政治理论课教师在拓展教学新思路上可以有新的探索和尝试的空间。医学院校思想政治理论课教师拓展教学新思路,可以借"新医改"进行新路径的选择和探究。     

重组腺病毒mIκBα基因联合γ射线治疗肝细胞癌的实验观察

目的 探讨重组腺病毒mIkBα基因（AdmIkBα）联合γ射线对人高转移性肝细胞癌HCC9204细胞和裸鼠HCC9204移植瘤生长的影响。方法利用有限稀释法测定病毒滴度，以不同感染复数（MOI）的AdIxBαm（10、20、30、50）转染HCC9204细胞，Westemblotting法检测转染前后细胞1：）65表达和mIxBa表达。采用4Gyγ射线对各组细胞进行治疗。MTT法检测转染组、转染组＋放射组、对照组细胞生长抑制率。建立裸鼠HCC9204肝癌动物模型，肿瘤局部注射AdmIkBα30MOI并联合6Gyy射线治疗，在不同时间测量肿瘤体积。结果病毒滴度1．252×10^9pfu／ml。mIkBa蛋白随AdmlteBa剂量增加而进行性增加，P65蛋白随AdmIkBα剂量的增加呈进行性递减。转染组体外细胞生长随AdmIkBα剂量的增加逐渐受抑制，经7射线照射后生长抑制更加明显。AdmIkBα转染和放射联合治疗后7～28d，裸鼠肿瘤生长速率明显低于单纯照射组、单纯转染治疗组。结论AdmIkBα转染联合Y射线治疗可增强对肝痛细胞杀灭作用．联合治疗明品优于单纯放疗组和单纯基因治疗组。     

Slug在胰腺癌中的表达及干扰Slug对胰腺癌转移的影响

目的 探讨Slug和E-CADHERIN(E-cadherin)表达与胰腺癌转移的关系以及干扰Slug转录因子对胰腺癌转移的影响.方法 采用免疫组化和RT-PCR技术分别检测36例胰腺癌组织中Slug、E-cadherin和mRNA表达.将肝脏高转移潜能的胰腺癌细胞株SW1990H4,分为3组:对照组、空载体质粒(shRNA-1)和转染干扰S1ug质粒(Slug-shRNA-1),观察Slug对E-cadherin mRNA表达的逆转作用,及对SW1990H4体外侵袭、运动的抑制作用.结果 胰腺癌组织中Slug高表达,而E-cadherin低表达.转移组胰腺癌组织中Slug蛋白和mRNA表达明显高于非转移组,差异分别有统计学意义(P＜0.05),而E-cadherin在转移组胰腺癌中无表达.PCR产物凝胶电泳结果显示,Slug mRNA在空白对照组SW1990H4中表达为0.985±0.016,E-cadherin mRNA表达为0.120±0.001.shRNA-1时转染48 h时,Slug mRNA的表达水平为0.973±0.014,E-cadherin mRNA表达水平分别0.160±0.001,与对照组比差异分别无统计学意义(P＞0.05).转染Slug-shRNA-1组瞬时转染48 h时,Slug mRNA的表达水平为0.554±0.011,E-cadherin mRNA表达水平为0.36±0.002,与对照组和shRNA-1组比差异分别有统计学意义(P＜0.05).SW1990H4稳定转染后,shRNA-1和Slug-shRNA-1组Slug mRNA表达水平分别为0.968±0.015,0.206±0.017,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而E-cadherin mRNA表达水平分别为0.18±0.002,0.727±0.006,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).体外细胞运动实验表明,对照组、转染shRNA-1和SlugshRNA-1组跨膜细胞数393±28、352±24、96±13,差异有统计学意义(P＜0.01).重组细胞基底膜(Matrige1)侵袭实验显示,3组穿透基底膜细胞数分别为223±69、202±64、65±19,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Slug高表达,E-cadherin低表达与胰腺癌的转移相关.胰腺癌细胞中存在Slug mRNA与E-cadherin mRNA表达的逆转关系,抑制Slug mRNA的表达对胰腺癌细胞的侵袭和运动有抑制作用,可能为胰腺癌转移的基因治疗提供新的靶点.

Abstract：

Objective To investigate expression of slug and E-cadherin in pancreatic cancer tissues and determine the inhibitory effects of anti-Slug, an anti-sense plasmid, on the invasion of pancreatic cancer cell lines in vitro. Methods Slug and E-cadherin protein and mRNA was analyzed by IHP and RT-PCR in 36 cases of pancreatic cancer. Then anti-Slug plasmid was transfected into herin and Slug expression. The inhibitory effects of anti-sense Slug were also detected by Transwell motility assay and Matrigel invasion assay. Results The expression of Slug and mRNA in metastatic pancreatic cancer tissue was higher than that in non-metastatic tissue. E-cadherin and mRNA was lower in metastasis tissues(P＜0.05). The inverse relationships were further observed by transient transfection of anti-Slug into SW1990H4 cells. The downregulated expression of Slug and re-expression of E-cadherin were found. The Slug mRNA levels were 0.985±0.016,0.973±0.014, 0. 554±0. 011 after 0, 48 h of transfection of anti-sense Slug, and that of E-cadherin were 0.120±0.001, 0.360±0.002, 0. 727±0. 006, respectively. The diference was significant between different time points (P＜0.05). The Slug mRNA levels were 0. 206±0.017, 0.968±0.015, and that of E-cadherin were 0. 18±0.002,0.727±0.006 after stable transfection of anti-sense Slug, and control plasmid, respectively. The diference was significant (P＜0.05). The motility activity(393±28, 352±24, 96 ±13 )and the invasion activity (223 ± 69, 202 ± 64, 65 ±19) of1 antisense Slug transfectant cells were significantly decreased as compared with those of control cells (P＜0.05). Conclusions Higher expression of slug and lower expression of E-cadherin is related to the invasion and metastasis in pancreatic cancer. A reverse corelation of E-cadherin and Slug expression exists in pancreatic cancer. Slug is possibly a potential target for cancer gene therapy blocking invasion and metastasis in human pancreatic cancer.     

NF-κB、MMP-9与肝细胞肝癌浸润转移的实验研究

目的观察高转移性肝癌细胞系HCC9204细胞转染抑制性κB基因（IκB-α）后核因子κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的改变以及细胞浸润转移能力的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞，应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达；电泳迁移率分析（EMSA）测定NF-κB活性；免疫组化法检NF-κBp65、MMP-9的表达；激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察MMP-9细胞定位以及细胞形态；基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移。结果HCC9204细胞转染PCDNA3-IκB-α后，细胞内NF-κB和MMP-9 mRNA表达以及NF-κB活性下降；NF-κB、MMP-9表达具有明显的正相关；MMP-9蛋白表达位置和细胞形态改变；细胞侵袭转移能力明显下降。结论NF-κB表达水平与HCC9204的浸润转移能力有关；NF-κB活性抑制后细胞浸润转移能力下降，MMP-9表达下降可能起主要作用。     

小鼠血清前白蛋白试验的正常值范围及其评价

目的研究血清前白蛋白 (PA)诊断试验在健康小鼠血清中的分布和正常参考值以及对小鼠急性肝损害的诊断价值。方法应用临床流行病学方法对血清PA实验进行评价并进行肝脏组织学检测。结果小鼠血清PA正常值成正态分布 ,正常值范围为90～120mg/L,小鼠急性肝损害时 ,血清PA诊断试验的灵敏度为83 % ,特异度为92%,准确率达78 %;轻、中、重度肝损害时 ,血清PA浓度分别为50～85mg/L、22～67mg/L、8～19mg/L ,准确率分别达77% (P<0.05)、80 % (P<0.05)、80 % (P<0.05)。结论血清PA对小鼠急性肝损害有诊断价值。     

2型重组腺相关病毒/增强型绿色荧光蛋白转染胰腺癌细胞PANC-1的体外研究

基因治疗的关键是目的基因的高效转染和表达。我们采用2型重组腺相关病毒（rAAV2／EGFP）对人胰腺癌细胞PANC-1进行体外基因转移，观察EGFP基因能否在PANC-1中有效表达及其细胞毒性，探讨rAAV2介导目的基因转导胰腺癌细胞的效率。[第一段]     

奥沙利铂联合化疗治疗大肠癌毒副反应的护理

2000年6月以来,我院用奥沙利铂与5-Fu-CF(FOLFOX)联合方案对126例行转移性大肠癌化疗.现将护理体会报告如下.     

医学生突发事件救援急救能力及培训需求的调查研究

目的了解医学生的突发事件救援急救能力及培训需求。方法采用自设问卷对我校245名医学生进行问卷调查。结果 86.94%的医学生之前学习过突发事件救援急救知识和急救技能,能够完全掌握熟练操作每项急救技术的学生仅为8.57%¹8.78%。34.69%的学生将突发公共事件的现场急救作为首选学习项目;67.76%的学生将生动现场演示作为首选学习途径。结论医学生是应对社会突发事件救援的后续有生力量,要推进医学生面对突发事件时紧急救援的知识普及和能力提高。     

靶向Slug基因诱导PUMA上调增强AsPC-1细胞对γ射线的敏感性研究

目的 探讨siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌AsPC-1细胞γ射线敏感性的影响。方法 以0、10、50、100感染复数(MOI)的rAAV-EGFP-Slug-siRNA(Slug-siRNA)转染AsPC-1细胞72 h,免疫组织化学法和Western blotting检测转染前后细胞内Slug和PUMA表达。采用4 Gy γ射线细胞进行照射,MTT比色法和Hoechst 33342和PI双染法检测对照组、转染组(MOI 50)、照射组、转染(MOI 50)+照射组细胞存活率和凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,Giemsa 染色观察细胞形态。结果 细胞受到MOI为10、50、100作用72 h后,Slug 蛋白表达相对值分别为0.831±0.14、0.546±0.12和0.178±0.08,明显低于对照组1.17±0.152, 差异有统计学意义(F= 4.992,P<0.05);而细胞受到MOI为10、50、100作用72 h,PUMA 蛋白表达相对值分别为0.325±0.07、0.593±0.11和0.978±0.12,明显高于对照组0.143±0.04, 差异有统计学意义(F= 4.324,P<0.05);转染(MOI 50)+照射组细胞增殖抑制率为(78.76±9.36)%,明显高于转染组和单独射线照射组[(43.68±6.71)%和(19.25±3.72)%],差异有统计学意义(F=5.056,P<0.05)。另外,转染(MOI 50)+照射组细胞的凋亡现象较其他组更加明显。结论 siRNA干扰Slug基因表达能够解除Slug对PUMA的抑制,增强胰腺癌细胞对γ射线的敏感性。