Sprouty1载体的构建及对NF-κB转录活性的调控影响

目的构建pCMV-MYC-SPRY1表达载体,应用荧光素酶报告基因实验研究pCMV-MYC-SPRY1对NF-κB信号转导通路的影响,以及对HEK293细胞增殖调控的研究。方法采用PCR技术在肝文库里扩增SPRY1编码的目的基因片段,将其构建到真核表达pCMV-MYC载体上,用荧光素酶报告基因实验验证其对下游报告基因NF-κB转录活性的影响以及用GENMEDMTS细胞增殖检测试剂盒检测pCMV-MYC-SPRY1对HEK293细胞增殖的影响。结果成功构建pCMV-MYC-SPRY1表达载体,表明SPRY1负调控NF-κB的活性,对HEK293细胞增殖具有抑制作用。结论 pCMV-MYC-SPRY1表达载体的成功构建及对NF-κB转导通路的研究,为进一步研究SPRY1基因编码的蛋白质的功能打下了基础。     

miRNA-29b在癌症发生发展中的作用机制及其临床应用的研究进展

miR-29b 是最近生物医学界所关注的研究热点之一,尤其在人类癌症中。越来越多的研究发现,miR-29b 在多种癌症中异常表达,与肿瘤细胞增殖、分化、凋亡、侵袭、转移及药物耐受相关,有望成为癌症的新型诊断标志物及治疗靶点。本文重点就miR-29b 在人类癌症中的表达、作用及其调控机制和临床应用的研究进展进行综述,以促进miR-29b 在临床诊断和治疗中的转化应用。     

蛋白质组学在肿瘤患者血清标志物研究中的应用

近几年来随着蛋白质组学研究技术的提高,蛋白质组学被广泛应用于各种疾病研究中,特别是肿瘤标志物方面.肿瘤标志物的研究被广泛应用于无症状的早期患者的筛查,但目前仍有许多影响其临床应用的问题亟待解决,现就目前蛋白质组学在肿瘤标志物方面的应用进行简要综述.     

甲状腺癌钠／碘转运蛋白及促甲状腺激素受体表达及相关性研究

目的研究甲状腺癌钠／碘转运蛋白（NIS）和促甲状腺激素受体（TSHR）的表达特征及其相关性。方法收集正常甲状腺组织52例、结节性甲状腺肿58例和甲状腺癌56例,通过荧光定量分析和免疫组化法研究NIS和TSHR的表达。结果甲状腺癌NISmRNA和TSHRmRNA的表达显著低于正常甲状腺组织和结节性甲状腺肿（P〈0．001）,正常甲状腺组织和结节性甲状腺肿NIS和TSHR的表达呈正相关（r=0．758和0．653,P=0．006和0．005）,而在甲状腺癌中无显著相关性（r=0．389,P=0．136）。免疫组化结果表明甲状腺癌NIS阳性产物主要定位于细胞质,TSHR阳性产物定位于细胞质和细胞膜。甲状腺癌和结节性甲状腺肿NIS及TSHR蛋白表达显著高于正常甲状腺（P〈0．001）;同正常甲状腺组织相比,甲状腺癌NIS及TSHRmRNA表达下降同时伴有细胞质蛋白表达升高的分别为45例和47例（80％,85％）。结论甲状腺癌NIS和TSHR表达具有非相关性以及在转录和翻译水平上具有矛盾性,NIS蛋白非功能定位于细胞质,因而不能发挥正常的运输及聚碘功能。     

酶分子定向进化的最新研究进展及应用

酶分子定向进化又称为酶分子体外进化,属于蛋白质的非理性设计,是蛋白质工程的新策略,是在试管中模拟达尔文进化的过程,利用分子生物学手段在分子水平创造分子的多样性,结合灵敏的筛选技术,迅速得到理想的突变体。与传统的理性设计相比,它不需事先了解蛋白质的空间结构、活性位点、催化机制^[1]等因素,而是人为地创造特殊的进化条件,模拟自然进化机制（随机突变、基因重组和自然选择）,在体外改造酶基因,产生基因多样性,并结合定向筛选（或选择）技术,获得具有某些预期特征的改构酶^[2]。     

胃癌血清适配体的筛选及其鉴定

目的:以羧基化琼脂磁珠为筛选介质,利用RT-PCR和靶标替换消减SELEX技术从胃癌血清中筛选得到高特异性?强亲和力的适配体?方法:以离心超滤(50 000超滤管)法处理后的胃癌血清作为靶分子,羧基化琼脂磁珠为载体,先将寡核苷酸文库与反筛磁珠(结合正常血清)结合,取上清再与筛选磁珠(结合胃癌血清)结合,洗去未结合的寡核苷酸分子,对结合在磁珠上的寡核苷酸分子进行分离和扩增,λ酶切法制备ssDNA次级库,进行10轮筛选,将第10轮的文库扩增得到dsDNA,利用胶回收试剂盒回收纯化目的片段的dsDNA,并与pMDTM18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆,测序获得适配体序列,同时用流式细胞术测定胃癌血清适配体的Kd值?结果:经过10轮筛选后,得到20条与胃癌血清结合的适配体?结论:特异性检测表明,筛选得到的胃癌血清适配体与胃癌血清的结合解离常数均在纳摩尔级水平,其中5?7?16?17?18号适配体能高特异性?强亲和力结合胃癌血清,与正常人血清不结合?该研究为胃癌的早期诊断提供了实验基础?     

低剂量~（12）C~（6＋）离子辐射诱导的小鼠骨髓细胞适应性反应实验研究

目的研究低剂量重离子辐射（LDR）对小鼠造血系统的适应性反应特征。方法对小鼠给予大剂量（2.0 Gy）12C＋6射线照射前预先采用0.050,0.075 Gy 12C＋6离子束全身照射,其中一批小鼠24 h处死,测定外周血指标、脏器系数、骨髓细胞微核率、骨髓DNA含量;第二批小鼠接受大剂量（2.0 Gy）全身辐照后观察其30 d存活情况。结果与大剂量直接照射组相比,0.050Gy低剂量照射组小鼠外周血白细胞明显升高,骨髓DNA含量升高,小鼠骨髓细胞的微核率降低（均P〈0.05~0.01）,其余指标无统计学差异。0.075 Gy低剂量照射后小鼠外周血白细胞与照射对照组比较有一定下降,其余指标无明显差异。结论低剂量碳离子束照射能拮抗大剂量照射后引起的骨髓细胞损伤,对造血组织产生适应性反应,对重离子治疗肿瘤及放射防护具有一定参考意义。     

甲状腺髓样癌的研究进展

甲状腺髓样癌(medullarythyroidcarcinoma,MTC)占甲状腺癌的8%～10%,是一种起源于甲状腺滤泡旁细胞(C细胞)的恶性肿瘤。能分泌特异的降钙素,也称为滤泡旁细胞癌,属APUD系统肿瘤。不具备摄碘功能,恶性程度介于分化型与未分化甲状腺癌之间,多数患者疗效欠佳。目前认为MTC除了外科手术,其它治疗方法基本无效。放疗、化疗仅作为一种姑息治疗方法,生物治疗在晚期MTC中初步开始应用,但大多还处于临床研究阶段,真正用于临床还有距离。研究证实髓样癌发病的主要原因是ret原癌基因的突变,从而使C细胞过度增殖所致。本文复习有关文献,就其临床特征及药物靶向治疗等方面进行归纳总结,希望对临床工作有所帮助。     

癌胚抗原特异性单克隆抗体(Anti-CEA)核酸适配体的筛选

目的:筛选癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单克隆抗体(Anti-CEA)的核酸适配体(aptamers),为肺癌血清肿瘤标志物核酸适配体的筛选奠定实验基础?方法:利用羧基化琼脂磁珠作为筛选介质,以Anti-CEA为筛选的目标靶分子,通过消减SELEX技术及实时定量PCR技术,从随机ssDNA文库中筛选出与Anti-CEA特异性结合的aptamers,并通过凝胶阻滞实验(EMSA)鉴定筛选到的Anti-CEA-aptamer复合物,然后将得到的第10轮富集文库扩增为双链DNA,通过切胶纯化后,连接PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,同时利用交错PCR技术鉴定阳性克隆,经测序,获得aptamers的序列?结果:经过10轮筛选得到了4条与Anti-CEA结合的aptamers,测序结果显示均为不同序列?结论:验证筛选出的与Anti-CEA结合的aptamer,特异性检测结果表明2号aptamer与靶分子结合的特异性很高,且与非特异蛋白无明显吸附,筛选出的aptamers用于识别Anti-CEA,将为肺癌的早期诊断和早期治疗提供新的突破口?     

甲状旁腺素对人甲状腺髓样癌细胞调控作用的实验研究

目的探讨甲状旁腺素（parathyroid hormone,PTH）和甲状旁腺素受体单抗（Anti-Parathyroid Hormone Receptor1antibody,anti-PTHR1）对人甲状腺髓样癌细胞株（TT细胞株）体外生长及细胞增殖的影响。方法体外培养TT细胞株,药物作用分为PTH组,anti-PTHR1组,各组经药物处理后,先在倒置显微镜下观察细胞的生长状况,MTT法检测细胞生长抑制率,RT-PCR法检测PTHmRNA的表达变化情况。结果倒置显微镜下可较明显看到细胞的变化,MTT结果显示,PTH和anti-PTHR1能有效地抑制TT细胞的增殖,呈时间和剂量依赖关系,2.0μmol/L的PTH和1.0μmol/Lanti-PTHR1能明显提高细胞的生长抑制率（P〈0.05）,RT-PCR结果显示药物作用后PTHRmRNA的表达下调（P〈0.05）。结论 2.0μmol/L的PTH和1.0μmol/L的anti-PTHR1可抑制TT细胞的增殖。阻止细胞周期进展,明显降低其增殖指数,在诱导凋亡中起重要作用。