Induction of ERBB2 nuclear transport after radiation in breast cancer cells

The ERBB2 nuclear transport in breast cancer cell lines after radiation and its possible role in radiation tolerance were observed. Confocal microscopy and Western blotting were applied to detect the nuclear ERBB2 expression after radiation in breast carcinomas cells. And the effects of Herceptin, AG825 and Cisplatin on the expression of nuclear ERBB2 were investigated. Survival fractions were also observed. After radiation, compared with control group, confocal microscopy and Western blot revealed that the expression of nuclear ERBB2 was increased in breast cancer cells time-dependently. Herceptin, and AG825 could significantly inhibit the radiation-induced nuclear ERBB2 expression, and decrease survival fractions. Cisplatin also induced the nuclear ERBB2 expression in breast cancer cells with high ERBB2 expression. It was concluded that radiation could induce ERBB2 nuclear transport, and nuclear ERBB2 may correlate with radiation resistance in breast cancer cells with high ERBB2 expression.     

吉非替尼对肺癌细胞株H358放疗敏感性的影响及其机制

背景与目的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是决定放疗效应的重要因素,它的过表达或激活常与包括非小细胞肺癌在内的肿瘤放疗抵抗相关,因而阻断EGFR的信号通路是增强放疗敏感性很有潜力的治疗策略。本研究旨在观察小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼与放疗联合是否有提高非小细胞肺癌细胞株H358放疗敏感性的作用以及探索其分子机制。方法将非小细胞肺癌细胞株H358分为X线组和X线+吉非替尼组,前者采用单纯X线照射,后者经1mol/L吉非替尼作用24h后再行X线照射。克隆形成实验比较两组细胞放射敏感性,免疫荧光激光共聚焦显微镜观察X线照射后各时间点细胞核中磷酸化γ-H2AX及EGFR焦点在细胞中的定位情况,Westernblot法检测放疗后核蛋白中EGFR的表达。结果克隆形成实验中X线+吉非替尼组各个剂量点的细胞存活率均少于X线组,可见X线+吉非替尼组对放疗更敏感。免疫荧光激光共聚焦显示,X线+吉非替尼组比X线组各时段细胞核内γ-H2AX焦点数增加,持续的时间也更长。EGFR免疫荧光及Westernblot结果显示,X线组EGFR在放疗后1h内入核,而X线+吉非替尼组EGFR不在核内表达,仍位于细胞浆内。对Westernblot结果用SPSS13.0进行统计学分析,其差异有统计学意义(P=0.042)。结论吉非替尼可能是通过抑制EGFR放疗后入核进行损伤后DNA双链断裂修复,而起到对NSCLC细胞株H358放疗增敏的作用。     

Trastuzumab对放射诱导下HER-2的入核及DNA损伤的影响

目的:通过观察HER-2单克隆抗体trastuzumab对BT474细胞中HER-2的入核效应和对核内DNA损伤修复的影响,来探讨HER-2直接入核通路上trastuzumab放疗增敏机制.方法:将BT474细胞随机分成单纯照射组和trastuzumab干预组,通过克隆形成实验来观察各剂量下放射后两组BT474细胞的存活分数的差异,共聚焦显微镜下观测trastuzumab对放射后HER-2核转运和DNA DSB标志物γH2AX表达的影响,免疫印迹实验检测trastuzumab对放射后早期BT474细胞核内HER-2蛋白、DNA-PKcs的表达影响.结果:与单纯照射组相比,trastuzumab干预组可降低放射后各剂量下BT474细胞的存活分数(SF),共聚焦显微镜可观察到trastuzumab推迟了照射后HER-2蛋白由细胞膜进入核内的过程,并增加放射后12 h时间点的γH2AX表达,Western blot实验结果显示trastuzumab干预下调了放射后早期核内DNA-PKcs和HER-2的表达.结论:trastuzumab能够通过减少HER-2的入核,并进一步下调DNA-PKcs活性,抑制放射诱导下BT474的早期DSB修复.     

PBL教学法在肿瘤学临床教学中的应用

目的:在肿瘤学临床教学中引入PBL教学方法,探讨其优势和不足。方法:选择62名在肿瘤科临床实习进修的轮转生,分别采取PBL教学和传统LBL教学,并对教学质量和教学满意度进行比较。结果:两组轮转生出科考试理论成绩比较无显著性差异(P>0.05),PBL教学组临床综合能力成绩明显高于对照组(P<0.05);采用PBL教学的实验组教学满意度较高,尤其是有助于提高临床思维能力、加深知识的理解和记忆、提高自学能力及增强交流与合作能力。结论:肿瘤学有利于临床PBL教学方法的应用;传统LBL教学方法与临床PBL教学方法在肿瘤学临床教学中的合理搭配,更有利于提高教学质量。     

TCT联合HC-Ⅱ HPV筛查宫颈病变及药物干预的方法

目的探讨应用液基薄层宫颈刷片细胞学检测(Thinprep cytological test,TCT)及杂交捕获二代(Hybrid captureⅡ,HC-Ⅱ)人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)分型检测筛查宫颈病变的意义和对高危病例进行药物干预的方法。方法2004年4月~2005年8月,采用TCT和HPV DNA分型检测对17 320例患者进行宫颈病变的筛查,并以病理组织学活检为标准来验证筛查结果,同时应用氟尿嘧啶(5-Fu)可吸收缓释药膜对适宜病例进行局部干预治疗。结果TCT结果异常者1 754例,其中高危型HPV-DNA阳性450例;431例TCT提示无HPV感染病例中有172例高危型HPV-DNA阳性;TCT或TCT联合HC-ⅡHPV筛查宫颈上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)II级及以上病变的敏感性和特异性分别为81.12%、89.65%和72.08%、97.99%;采用5-Fu可吸收缓释药膜治疗25例CINⅠ级HPV高危型感染患者后,其病毒负荷量下降幅度、转阴率和病理逆转率均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论TCT和HPV分型检测联合应用于宫颈病变筛查可提高CINⅡ级及以上病变的特异性检出;5-Fu可吸收缓释药膜治疗CINⅠ级HPV高危型感染患者可降低其病毒负荷量,甚至清除。     

吉非替尼对肺癌细胞株A549和H1975放射敏感度的影响及其机制

目的 本研究旨在探讨小分子表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼是否能增加肺癌细胞株A549和H1975的放疗敏感度及其机制。方法 选取两种非小细胞肺癌细胞株A549和H1975,分为单纯X线组和X线+吉非替尼组。单纯X线组采用单纯X线照射,X线+吉非替尼组经10 μmol/L吉非替尼作用24 h后行X线照射。两株细胞不同分组细胞,采用克隆形成实验检测放射敏感度,免疫荧光激光共聚焦显微镜观察X线照射后不同时间点细胞核中磷酸化H2AX（γ-H2AX）亮点在细胞中的定位情况,Western blot法检测放疗后胞质胞核蛋白中EGFR的表达。结果 克隆形成实验中,A549细胞X线+吉非替尼组在各放疗剂量点的SF2值（0.3475）低于单纯X线组（0.4833）;H1975细胞X线+吉非替尼组与单纯X线组在各放疗剂量点的SF2值分别为0.3094和0.3207,无明显差异。免疫荧光结果显示,照射4 Gy后各时间点X线+吉非替尼组A549细胞核中γ-H2AX亮点相比单纯X线多;单纯X线组和X线+吉非替尼组H1975细胞γ-H2AX亮点在各时间点无明显差异; Western blot结果显示,A549细胞经4Gy照射后EGFR有入核现象,而预先经吉非替尼处理再接受4Gy照射,EGFR蛋白绝大部分位于细胞质内;H1975细胞,单纯X线组和X线+吉非替尼组EGFR蛋白均在细胞质中表达,胞核中几乎没有,且两组无明显差异。结论 吉非替尼能增加肺癌细胞株A549的放射敏感度,可能与阻止放疗后EGFR入核进行双链断裂（double strand break,DSB）修复有关;对H1975细胞无影响,与其放疗后EGFR不入核相关。     

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药机制研究进展

含有表皮生长因子受体突变的非小细胞肺癌患者中70％～80％对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼和厄洛替尼敏感,但最终仍会出现耐药导致肿瘤进展。表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药分为原发耐药和继发耐药,继发耐药机制主要包括表皮生长因子受体二次突变（T790M）、HER2及HER3的代偿作用、MET扩增、胰岛素样生长因子受体结合蛋白缺失及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路活化。     

Survivin在紫杉醇介导MCF-7细胞凋亡中的作用

目的 观察紫杉醇对人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡诱导作用，探讨Survivin在此过程中的作用。方法 将不同浓度的紫杉醇作用于MCF-7细胞，噻唑蓝（MTT）比色法检测紫杉醇作用的时间效应和剂量效应；用光镜、Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪观察细胞的凋亡变化；用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot法观察在紫杉醇作用过程中Survivin的mRNA和蛋白水平的变化。结果 细胞生长抑制率呈现一定的时间、剂量依赖性。较高浓度的紫杉醇处理MCF-7细胞48h后可观察到凋亡。而在各种浓度紫杉醇作用过程的早期（6h内），Survivin转录和蛋白表达水平明显—过性升高。结论 紫杉醇可诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡；而紫杉醇作用过程的早期Survivin表达的增加，极可能有利于肿瘤细胞逃避紫杉醇诱导的细胞凋亡，增加肿瘤细胞耐药的机会。     

Chk1/2和Plk1蛋白在子宫内膜癌中的表达

目的 Chk1/2（checkpoint kinase 1、2）和Plk1（polo like kinase 1）是各细胞周期检测点启动DNA损伤修复的主要激酶,本研究检测3种激酶在子宫内膜癌及正常子宫内膜组织中的表达,探讨3种蛋白在两者之间的表达差异、与子宫内膜癌临床病理特征的关系及3种蛋白表达的相关性。方法 应用免疫组化SP法检测44例子宫内膜癌组织和21例正常子宫内膜组织中Chk1、Chk2和Plk1蛋白的表达情况。结果 Chk1、Chk2和Plk1蛋白在子宫内膜癌患者中的阳性率分别为47.7％、75.0％和31.8％,在正常子宫内膜中的阳性率分别为61.9％、61.9％和4.8％;Plk1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达显著高于正常子宫内膜组织（P＜0.01）,而Chk1、Chk2的表达差异无统计学意义（P>0.05）。Chk1、Chk2和Plk1蛋白的表达在不同年龄、病理类型和临床分期的子宫内膜癌患者中差异无统计学意义（P>0.05）;但Chk1的表达在不同分化程度的子宫内膜癌患者中差异有统计学意义（P<0.01）。Spearman等级相关分析,在44例子宫内膜癌患者中,Chk2与Plk1间的表达呈正相关（r＝0.482,P＝0.001）。结论 Plk1可能成为子宫内膜癌比较理想的治疗靶点,而CHK1/2在子宫内膜癌中表达及意义还有待进一步研究。