非小细胞肺癌组织中脆性组氨酸三联体和PCNA的表达

目的:观察人非小细胞肺癌组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.方法:应用免疫组织化学(SP法)检测80例非小细胞肺癌和40例肺良性病变组织中FHIT和PCNA的表达.结果:非小细胞肺癌组织中FHIT表达阳性率(57.5%)低于肺良性病变组织(90.0%)(P＜0.01);腺癌组织中FHIT的表达阳性率高于鳞癌,且表达阳性率与鳞癌分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P＜0.05);非小细胞肺癌组织中FHIT表达阳性率与患者是否有吸烟史有相关性(P＜0.05);非小细胞肺癌组织中PCNA表达阳性率(60.0%)高于肺良性病变组织(10.0%)(P＜0.01);FHIT表达阳性率与淋巴结转移、TNM分期有关(P＜0.05);非小细胞肺癌组织中FHIT和PCNA表达呈负相关(rs=-0.547,P＜0.01).结论:FHIT表达下调是肿瘤细胞增殖活跃的分子基础之一,FHIT与非小细胞肺癌的发生、发展关系密切.     

GSTM1、GSTT1基因缺失与肺癌遗传易感性关系的研究

目的　探讨GSTM1、GSTT1基因缺失与肺癌发病之间的关系。方法　采用PCR技术检测 77例肺癌患者和 10 7例健康对照人群中GSTM1、GSTT1基因缺失的频率。结果　病例组GSTM1基因缺失的频率为5 8 4 % ,显著高于对照组的缺失频率 4 2 1% (χ2 =4 811,P =0 0 2 8) ,危险度分析得出OR =1 938,95 %CI为1 0 70～ 3 5 0 9;病例组GSTT1基因缺失的频率为 5 7 1% ,接近对照组 5 0 5 %的水平 (χ2 =0 80 2 ,P =0 371)。联合分析表明两基因在肺癌发生中具有协同作用。结论　GSTM1基因缺失或GSTM1、GSTT1基因联合缺失可能与肺癌的发生有关     

人谷胱甘肽硫转移酶M1真核表达系统序列分析

目的 对人谷胱甘肽硫转移酶M1真核表达系统的构建及序列分析。方法 采用RT-PCR方法将肺组织中提取总RNA扩增人谷胱甘肽硫转移酶M1基因的cDNA序列，将其插入到真核表达载体pcDNA3．1多克隆位点中，构建重组表达质粒，并用PCR扩增、酶切分析及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定。结果 入谷胱甘肽硫转移酶M1克隆到真核表达质粒pcDNA3．1中，测序结果同Genbank GSTM1(GI：183668)cDNA序列相比较，在619位点C→A，氨基酸由Pro→Thr；在519位点C→G，编码的氨基酸仍为1ys；在528位点C→T，编码的氨基波仍为Asp。同源性为99％，基因登陆号为AY532926。结论 入谷胱甘肽硫转移酶M1真核表达系统的构建，为进一步进行真核细胞和动物的解毒机制研究，提供应用材料。     

人谷胱甘肽硫转移酶M1基因在CHO细胞中的表达

目的　构建人谷胱甘肽硫转移酶M1(GSTM1)的CHO细胞表达体系。方法　重组质粒pcDNA3 1 GSTM1用LipofectamineTM2 0 0 0转染CHO细胞 ,用G418筛选细胞的阳性克隆 ,并用PCR、RT PCR和Westernblot进行鉴定 ,测定GSTM1酶活性。结果　GSTM1基因已转染到CHO细胞的基因组 ,并转录表达 ,生成GSTM1蛋白 ,经测定活性达到2 8mmol/ (min·mgprot)。结论　通过CHO GSTM1细胞表达 ,为基因工程生产具有完整功能GSTM1的进一步纯化提供了材料 ,为研究化学致癌物在真核细胞中的代谢 ,作为遗传药理学、毒理学研究的候选细胞株奠定了基础。     

青石棉诱导A549细胞ERK1/2、MEK1/2的表达

目的:了解细胞内信号传导在石棉致肺部疾患过程中的作用。方法:用Western免疫印迹法检测石棉刺激的A549细胞裂解液中MEK1/2、:ERK1/2的表达。结果:以0.1 g/L浓度的青石棉刺激A549细胞后,ERK1/2、MEK1/2磷酸化蛋白快速高表达,与空白对照比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:磷酸化的信号蛋白可能在石棉致病中起重要作用。     

肺癌组织中黑色素瘤抗原-3基因mRNA的表达

目的：检测肺癌组织中黑色素瘤抗原－3基因（MAGE－3）mRNA的表达，方法；用逆转录－套式聚合酶链反应（RT－PCR）对31例肺癌患者癌组织和相应癌旁组织MAGE－3 mRNA表达情况进行测定；PE－377DNA测序仪对5例10个RT－PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA序列测定。结果：31例肺癌患者癌组织中26例表达MAGE－3 mRNA，阳性率为83.9%；相应的癌旁组织均未表达。DNA序列测定证明PCR扩增产物中目的基因片段均为MAGE－3 cDNA序列，所测5例样本中4例样本有2个相同位置的碱基发生了点突变，导致一个氨基酸残基改变。结论：（1）MAGE－3 mRNA在肺癌中呈高比例表达，提示此抗原有可能作为肺癌患者免疫治疗的靶抗原；（2）我国肺癌患者中存在MAGE-3基因个别位点的变异。     

煤焦沥青诱发大鼠肺癌组织中端粒酶的表达

目的 :判断端粒酶活性在肺癌中的诊断价值。方法 :将Wistar大鼠随机分为实验组 17只和对照组 8只 ,实验组采用支气管灌注煤焦沥青法诱导大鼠肺癌 ,用改良的TRAP银染法测定大鼠肺癌及正常组织中的端粒酶活性。结果 :实验组诱发出肺癌 8例 ,鳞状上皮化生 1例 ,8例肺癌中有 7例为端粒酶阳性 (87.5 % ) ,鳞状上皮化生的1例也为端粒酶阳性 ,实验组其余 8例与对照组 8例端粒酶均为阴性。有癌组与对照组和无癌组相比差异均有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :端粒酶较特异地表达于肺癌组织中 ,有望成为肺癌的诊断指标。     

大蒜对锅炉工生物膜和细胞免疫的保护作用

The workers exposed to coke oven volatile are the risk population of occupational lung cancer than genera population. Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs),a component of coke oven volatile (COE), are the species considered to be the responsible for this high risk of occupational lung cancer. One of most important mechanism of occupational lung cancer induced by PAHs is believed to be due to the accumulation of free radicals associated with COV and subsequent biological member injury caused by free radical reaction as well as decrease in cell immunity. Garlic is the consumed vegetable with a variety of medical functions.     

青石棉诱导A549细胞ERK1/2及Elk1激活的研究

目的　研究细胞外信号调节蛋白在青石棉致肺部疾病的作用。方法　用Western免疫印迹、免疫沉淀等对石棉刺激A5 4 9细胞后细胞外信号调节蛋白及其下游Elk1蛋白磷酸化等进行了研究。结果　石棉刺激细胞后 ,磷酸化ERK1 2、Elk1等高表达 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　ERK1 2、Elk1磷酸化可能参与青石棉的致病过程     

非小细胞肺癌组织中RASSF_(1A)和p16基因启动子甲基化研究

目的:研究肺癌新型侯选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)和p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的甲基化情况,揭示两基因表达失活的机制,为NSCLC的基因诊断和治疗寻找新途径。方法:用甲基化特异性PCR(MSP)方法对96例NSCLC患者癌组织及相应的远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因启动子甲基化状态进行检测。结果:(1)96例NSCLC组织RASSF1A甲基化率48.96%,p16基因34.38%,96例远癌正常肺组织均未发现此两基因甲基化。(2)RASSF1A甲基化率鳞癌组(64.29%)高于腺癌组(37.04%,P<0.05);p16基因甲基化率50岁以上组(44.93%)高于50岁以下组(7.41%,P<0.05),鳞癌(61.90%)高于腺癌(12.96%,P<0.05),有淋巴结转移组(46.67%)高于无淋巴结转移组(13.89%,P<0.05)。(3)RASSF1A与p16基因启动子CPG岛甲基化呈正相关(r=0.256,P<0.05)。结论:RASSF1A和p16在NSCLC尤其是鳞癌中频繁甲基化,可能是两基因表达失活的主要原因。