胰腺癌胰液肽表达谱变化的分析

目的:分析正常胰液与胰腺癌胰液多肽表达谱的差异.方法:用 ZipTip C18提取胰液样品多肤,采用基质辅助激光解析离子化飞行时阃/飞行时间质谱技术(MALDI TOF/TOF MS)对胰液的多肽表迭谱进行肽质量指纹图谱(PMF)分析,对获得的数据进行标准化处理,对高丰度的差异肤段进行TOF/TOF分析,建立胰腺癌胰液的诊断模型.结果:通过质谱分析,得到了反映胰腺癌胰液多肤组成的特征图谱,通过TOF/TOF分析,一个胰腺癌胰液相关的肽段鉴定为fibrinogen α链前体,氨基酸序列为DS-GEGDFLAE GGGVR.结论:ZipTip C18富集胰液样品后直接进行MALDI-TOF/TOF MS分析的技术,可应用于快速扫描与胰腺癌有关的多肽表达谱,建立胰腺癌胰液的多肽诊断模型,具有较好的临床应用价值.     

乳腺间质成纤维细胞的生物学特征及其在乳腺癌诊断及鉴别诊断中的作用

采用免疫组化S-ABC法检测正常乳腺、乳腺增生、纤维腺瘤、导管原位癌和浸润性导管癌间质中成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和CD34．表达情况。结果正常乳腺和良性肿块间质的成纤维细胞CD34表达阳性，α-SMA表达阴性；导管原位癌和浸润性导管癌间质成纤维细胞CD34表达阴性；33．3％的导管原位癌和56．9％的浸润性导管癌间质成纤维细胞α-SMA表达阳性。认为间质成纤维细胞检测可提高乳腺癌的诊断和鉴别诊断水平。     

胰腺癌转移相关基因C14orf166的真核表达及其蛋白相互作用的蛋白质组学筛选

目的旨在对胰腺癌转移相关基因C14orf166进行真核重组表达,并在此基础上结合蛋白质组学方法初步筛选其相互作用蛋白,为进一步研究C14orf166在肿瘤转移中的作用提供研究基础。方法构建人C14orf166的带双标签的真核表达载体pcDNA3.1-Flag-C14orf166-His,通过脂质体将其转染至人胚肾293T细胞。采用Ni-agrose进行His标签蛋白的pull-down纯化,分离C14orf166的蛋白结合复合体,对蛋白混合物进行SDS-PAGE分析,选择差异条带,进行MALDI-TOF-TOF质谱鉴定。结果在293T细胞中重组表达了C14orf166蛋白,对C14orf166蛋白复合体进行分离鉴定后,筛选出RS8、EFCB9和NRAP3个可能与C14orf166相互作用的蛋白。结论基因重组表达结合pull-down和蛋白质组学方法可以发现新的相互作用蛋白,为进一步了解C14orf166在肿瘤发病机制中的作用提供了新的线索。     

蝎毒多肽提取物抗肿瘤血管生成作用的实验研究

目的探讨东亚钳蝎蝎毒的多肽提取物PESV的抗血管生成活性和对肿瘤生长的抑制作用。方法①用不同浓度的PESV(4～20mg·L-1)作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用BrdU参入的ELISA法观察HUVEC增殖活性和凋亡水平变化,流式细胞术检测凋亡细胞比例,免疫组化法检测Bal和Bax表达。②观察PESV对鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管生成的影响。③皮下注射PESV(0.3mg·kg-1),观察对S180肉瘤和H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长、肿瘤血管生成和血管生成因子(VEGF和bFGF)表达的影响。结果①体外实验显示,PESV在8～20mg·L-1范围明显抑制HUVEC的增殖活性(与对照组比较,P<0.01),而对乳腺癌细胞MDAMB231的增殖无影响;PESV作用后HUVEC凋亡细胞比例较对照组增加,P<0.05,Bax表达增加;Bcl2表达降低。②0.5mg/CAM和0.8mg/CAM的PESV能明显抑制CAM新生血管的形成。③体内实验显示PESV能明显抑制小鼠S180肉瘤和H22肝癌的肿瘤生长和血管生成水平,并降低肿瘤组织内血管生成相关因子VEGF和bFGF的表达。结论PESV具有良好的体内和体外抗肿瘤血管生成活性,并籍此抑制肿瘤的生长。     

乳腺癌根治术切口选择对皮瓣愈合的影响

目的研究乳腺癌根治术切口对皮瓣愈合的影响.方法回顾分析了1986～2001年680例乳腺癌根治术患者,选择不同的手术切口对皮瓣坏死的发生率及皮瓣愈合的影响.结果 1986～1994年间手术采用纵切口312例,皮瓣坏死106例(34.0%);1995～2001年间手术采用横切口368例,皮瓣坏死19例(5.2%).结论手术行纵切口的皮肤张力较大、血运障碍是皮瓣坏死发生率较高的主要原因;而横切口皮肤由于纵向张力的缓冲,皮肤张力减低,皮瓣血运良好,切口一期愈合率明显提高.     

人胰液蛋白2D图谱的建立

目的建立人胰液蛋白表达谱。方法采用丙酮沉淀法处理来自于四个非胰腺癌患者的胰液标本，利用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOF-MS/MS）技术对胰液蛋白进行分离和鉴定。结果建立了高分辨率的人胰液蛋白表达谱，鉴定了91个独立的胰液蛋白，并对91个蛋白进行了功能注释分析。结论胰液蛋白表达谱为深入理解胰腺疾病的病理生理机制及筛选和发掘胰腺癌潜在生物标志物提供了理论基础。     

胰腺癌胰液蛋白质组学分析

目的:利用比较蛋白质组学方法鏊定胰腺癌早期诊断的蛋白标志.方法:采用双向电泳(2-DE)分离比较9个胰腺导管腺癌患者和9个非胰腺癌患者的胰液蛋白质表达谱,用肤质量指纹图谱(PMF)为基础的基质辅助激光解析离子化飞行时间串联质谱(MALDF-TO-F-MS/MS)对差异蛋白进行鉴定.采用蛋白质印迹方法进一步验证蛋白质MMP-9和DJ-1在胰液中的表迭.结果:2-DE显示共24个蛋白质点出现>2.0倍的表达差异,上调14个,下调10个.蛋白质印迹检测显示在胰腺癌胰液中高表达MMP-9和DJ-1蛋白.结论:MMP-9和DJ-1可能成为通过内镜下逆行胰胆管造影术(ERCP)筛查胰腺癌高危患者及早期诊断胰腺癌的潜在的胰液肿瘤标志.     

软骨发育不全患者FGFR3突变基因分析简

目曲对9例初步诊断为软骨发育不全患者及其父母进行成纤维生长因子受体3（fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3）基因突变筛查,以判定患者是否为软骨发育不全,同时验证中国人群中FGFR3是否为引起软骨发育不全的致病基因。方法提取9例患者及父母的外周血液DNA,并针对FGFR3外显子10序列设计引物,进行PCR扩增、纯化,并对PCR扩增产物进行毛细管电泳测序。结果9例患者的FGFR3基因第10外显子1138位点均发生了G〉A碱基转换,使得其所编码蛋白FGFR3的第380位氨基酸由甘氨酸（G1y）变为精氨酸（Arg）。结论通过毛细管测序,9例患者均可以确诊为软骨发育不全,同时也验证了在中国人群中FGFR3基因是导致软骨发育不全的致病基因,G1138A为热点突变。