库普弗细胞在肝再生调控中的作用机制

目的探讨库普弗细胞(KC)在肝部分切除(PH)后再生调控中的作用及机制。方法制备KC条件培养液(KCCM),用MTT法观察其对大鼠原代肝细胞增殖的作用;建立小鼠PH模型,测定KC灭活对肝再生率的影响;应用免疫组化方法检测KC灭活后再生肝中TNF-α、TGF-α和TGF-β1的表达特点。结果KCCM能明显促进原代肝细胞增殖(A=0·746±0·06),与对照组(A=0·536±0·06)相比有显著性差异(P<0·01);KC灭活伴PH后6天肝再生率为95·10%±4·52%,而单纯PH后6天肝再生率为74·50%±1·90%(P<0·01);免疫组化结果显示,小鼠PH后6h,再生肝细胞TNF-α、TGF-α和TGF-β1表达迅速升高,前两者可持续4~5天,而后者在第3天即转为阴性,但在KC灭活伴PH后第6天,3种因子的表达仍然较强,超过单纯PH组。结论在肝再生过程中,KC和其他间质细胞分泌的TNF-α和TGF-α因受到KC分泌的TGF-β1等因子的拮抗而不能充分发挥促肝再生作用;当KC活性被抑制时,TNF-α和TGF-α的活性不再受到拮抗,进而能够增强肝再生能力和加速再生过程。     

IFN-γ拮抗60Coγ射线刺激肺成纤维细胞增殖的机制研究

目的 探讨IFN-γ 拮抗⁶⁰Co γ 射线刺激人肺成纤维细胞(HLF)增殖的机制。方法 应用MTT比色法,观察TGF-β1、受照后大鼠血清促HLF增殖的时效和量效关系及IFN-γ对增殖的影响;用ELISA检测受照后大鼠血清、肺组织TGF-β1水平及IFN-γ 对照后大鼠血清促HLF合成TGF-β1的影响。结果 TGF-β1有促HLF增殖的作用;受照后大鼠血清能促HLF增殖并合成TGF-β1;IFN-γ 显著拮抗血清的上述作用;受照后1～4周大鼠血清和肺组织TGF-β1水平逐渐增加。结论 TGF-β1参与γ 射线刺激HLF增殖的作用,而IFN-γ在一定程度上抑制HLF合成TGF-β1,并拮抗其促HLF增殖的作用。     

应用天青石蓝B染色及偏振光显微镜显示肺内Ⅳ型胶原的方法

肺内含有Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型及其他类型胶原,通常用苦味酸-天狼猩红及偏振光(picro-sirius-polarization)方法可根据胶原的双折光性和着色的不同粗略地区分上述3型胶原.由于肺内Ⅳ型胶原纤维纤细且含量少,并且镜下Ⅰ型和Ⅳ型胶原均可呈黄色类荧光,因此在放射性肺损伤早期很难对Ⅳ型胶原进行准确定位、定量和统计学分析,给开展肺损伤病变的研究造成较大的困难.     

Ⅳ型胶原、MMPs和TIMPs在放射性肺损伤重建中的作用

目的探讨Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶（MMPs）及其组织基质金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）在放射性肺损伤早期重建中的作用。方法用20研Gy^60Coγ射线照射大鼠右胸部，建立放射性肺损伤模型，1、2、4周后分别取材；用实时荧光定量PCR和免疫组织化学方法，从基因表达和蛋白质合成水平结合图像分析对肺组织Ⅳ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2 mRNA进行定量分析。结果实时定量PCR基因检测：Ⅳ型胶原表达于1周时升高，2周时下降；MMP-2在2周时达高峰，与Ⅳ型胶原成相反变化趋势；MMP-9呈明显的升高、下降、再升高趋势，与Ⅳ型胶原变化趋势相同；TIMP-1表达较低，各时间点之间无明显差异；TIMP-2呈现略升高、降低、升高趋势，与MMP-2表达相反。免疫组化-图像分析：肺组织Ⅳ型胶原含量于1周即明显增加，2周开始下降；MMP-2在2周时下降，随后升高，后期与Ⅳ型胶原呈相反趋势；MMP-9变化趋势同Ⅳ型胶原，但程度明显高于后者；TIMP-1于2周时轻度升高，与MMP-9趋势相反。结论Ⅳ型胶原、MMP-2和MMP-9及其组织抑制物参与放射性肺损伤早期的无效重建过程，MMP-2和MMP-9具有降解Ⅳ型胶原作用；Ⅳ型胶原降解障碍可能与肺纤维化启动有一定关系。