小鼠CXCR4基因慢病毒载体构建与真核表达

本研究旨在克隆小鼠CXC型趋化因子受体4（CXCR4）基因,构建携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的CXCR4重组慢病毒载体并在真核细胞中表达。采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）以C57BL／6小鼠骨髓细胞为模板克隆全长型CXCR4基因,连接至克隆载体pCR-Blunt,经限制性内切酶酶切后亚克隆至慢病毒转移载体,构建携带EGFP及CXCR4双顺反子结构的自身失活型重组慢病毒表达质粒;同时构建LV-IRES-EGFP作为对照质粒;通过脂质体转染法与包装质粒及包膜蛋白质粒共转染包装细胞293FT,超速离心浓缩病毒颗粒后转染293FT细胞,采用荧光显微镜和流式细胞术（FCM）检测EGFP的表达,Western blot鉴定CXCR4蛋白表达。结果表明,成功克隆小鼠CXCR4基因,构建重组慢病毒转移质粒LV-IRES-EGFP-CXCR4及对照质粒LV-IRES-EGFP,三质粒系统共转染293FT细胞后获得病毒滴度可达到10^8TU／ml。以重组慢病毒颗粒感染293Fr细胞后第3天,在荧光显微镜下观察到较强绿色荧光表达,FCM检测显示感染效率可达95％,FCM及Western blot结果显示感染后293Fr细胞表达CXCR4蛋白。结论：成功构建自身失活型慢病毒载体LV-IRES-EGFP-CXCR4,并在真核细胞中获得表达。     

婴儿骨皮质增生症一例

患儿　女。剖腹产 2天后右大腿远端肿胀 ,搬动婴儿时啼哭 ,小夹板固定后第 3天摄片 ,两侧股骨及胫骨未见明显异常 (图 1)。距第 1次摄片 8天后摄片示右股骨骨干中远段及胫骨近段可见明显骨膜反应 ,股骨下段骨皮质增生明显(图 2 )。右大腿软组织明显肿胀 ,小腿轻度肿胀。左股骨远段两侧层状骨膜增生。实验室检查 :ESR 80mm/min ,AKP80 0U。经仔细询问病史 ,该患儿哥哥于 3年前有同样病史 ,现已自愈。最后诊断 :婴儿骨皮质增生症。讨论　婴儿骨皮质增生症通常见于婴儿期 ,为一种病因不明的侵犯骨骼和肌肉筋膜的疾病 ,生后 5个月内发病 ,没有种族倾向 ,曾有家族发病的报道。明显的受累部位是骨(特别是下颌骨、锁骨和肋骨 )及其邻近的筋膜、肌肉和结缔组织。临床主要症状为受累骨处的软组织肿胀、触痛、硬块 ;患儿几乎均有发热 ,血沉加快 ,血清碱性磷酸酶升高 ;5 0 %患儿有血红蛋白增多 ,贫血 ,假性瘫痪 ,胸膜炎 ,苍白等表现 ;还可有骨关节疼痛和胸痛等。应用皮质激素治疗症状可缓解。肿胀的软组织和触痛虽非常明显 ,但不热 ,不红 ,可逐渐消退 ,又可随时在原位或另外部位复发。疾病的严重程度和病...     

去乡村踩雪

霜雪天,宜到老村约布衣旧友,就瓦松老屋桑木桌,呷农家酿,嚼乡土菜.柴门犬吠,风雪归人,踏雪寻梅,霜夜听更,是人世间最温暖的事.雪覆小村,是空灵轻软的水墨意境,是苍茫天地间清灵的大写意.     

125I放射性粒子植入联合栓塞化疗治疗肾上腺转移瘤临床应用

目的 探讨CT导引下经皮穿刺植入125I放射性粒子联合介入栓塞化疗治疗肾上腺转移瘤的方法及疗效.方法 对12例肾上腺转移瘤患者,应用介入栓塞化疗,2周后复查CT,采用治疗计划系统(TPS)计算剂量和布粒计划,CT定位下行病灶内125I放射性粒子植入术.植入结束后,再次进行CT扫描观察粒子分布情况及有无并发症,评价粒子分布情况.术后2～6个月定期CT随访.结果 术后2、4、6个月随访,12例有效率分别为58.33 %、81.82 %、80.00 %.结论 CT引导下经皮穿刺125I粒子植入联合介入栓塞化疗治疗肾上腺转移瘤安全,损伤小,并发症轻,近期疗效确切,值得推广和应用.     

交链孢酚诱发人胚食管上皮癌的研究

将体外培养的水囊引产的人胎儿食管用交链孢酚(Alternariol,AOH)处理24h,再培养两周,分别接种于裸小鼠皮下和腹腔内。皮下接种的3个食管组织块中之一形成鳞状细胞癌,其余2个和接种于腹腔的2个食管组织块上皮细胞呈明显增生或乳头状增生。空白对照组的食管组织块未见增生。溶剂对照组者仅呈轻度增生。结果提示互隔交链孢霉在人食管癌病因学中起着重要作用。     

补肾中药复方延缓老年雄性大鼠股骨皮质骨、松质骨骨量增龄性丢失的实验研究

目的　研究补肾中药复方延缓老年大鼠股骨皮质骨 、松质骨骨量增龄性丢失的作用。方法３６只２４月龄 Ｓ Ｄ 雄性大鼠随机分为２４月龄本底对照组、３０月龄增龄对照组、补肾中药复方低剂量组、补肾中药复方高剂量组,每组各９只。低剂量组、高剂量组均自２４月龄给药至３０月龄。各组相应处理以后分别测定各组大鼠左侧股骨以松质骨为主的近段、远段以及以皮质骨为主的中段的骨密度。结果　补肾中药复方低剂量组大鼠股骨各段骨密度增龄性减少率出现延缓的趋势;高剂量的补肾中药复方则能明显延缓股骨各段骨密度增龄性减少率。结论　补肾中药复方具有量效依赖性地延缓大鼠皮质骨、松质骨增龄性骨丢失的作用     

肾癌中Tiam 1的表达及临床意义

目的:探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam 1)表达与肾癌发生、发展和转移的关系。方法:应用原位杂交及免疫组化方法检测正常肾组织、肾癌石蜡组织标本中Tiam 1mRNA和蛋白的表达情况。用三种不同浓度2μmol/L(T1低浓度)、4μmol/L(T2中浓度)、8μmol/L(T3高浓度)的索坦干扰786-0细胞24h、48h、72h;同时设正常对照组T4(常规培养液)。应用TUNEL法检测各组作用48h细胞凋亡率的变化。应用原位杂交及免疫组化方法检测各组Tiam 1mRNA和蛋白的表达情况。结果:68例肾细胞癌组织中Tiam 1阳性表达率63.2%(43/68),有淋巴结转移组Tiam 1表达率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05),TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.01);对照组10例正常肾组织中Tiam 1表达均为阴性。Tiam 1基因在786-0细株中表达与肾癌组织中表达相一致。结论:Tiam 1表达与肾癌转移存在密切关系,Tiam 1表达可作为肾癌转移过程中一个有价值的指标;索坦可抑制肾癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡,可特异性抑制肾癌786-0细胞中Tiam 1蛋白及mRNA的表达,且具有浓度和时间依赖性。     

α-硫辛酸对阻塞性黄疸大鼠肝细胞线粒体内能量代谢保护作用及机制

目的 探讨α-硫辛酸对阻塞性黄疸大鼠肝细胞线粒体内能量代谢的保护作用及其机制. 方法 将72只SD雄性大鼠随机分为对照组(SO组),胆总管结扎+0.9%氯化钠溶液组(BDL+NS组),胆总管结扎α-硫辛酸组(BDL+LA组).分别于术后7 d、14 d和2l d检测肝细胞线粒体内MDA、SOD、ATP、ADP和AMP含量并计算总腺苷酸(TAN)和能荷(EC). 结果 BDL+NS组各时间点肝细胞线粒体内MDA、ADP、AMP含量明显升高,而SOD、ATP、EC含量却明显降低.胆总管结扎7 d、14 d时,肝细胞线粒体内MDA含量BDL+LA组比BDL+NS组低,差异有统计学意义(P＜0.01);2l d时,AMP、MDA含量BDL+NS组和BDL+LA中都更进一步升高,但两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).胆总管结扎7 d、14 d时,肝细胞线粒体内SOD含量、ATP含量BDL+LA组比BDL+NS组下降程度有显著性差异(7 d,P＜0.01;14 d,P＜0.05);21 d时,两组肝细胞线粒体内SOD含量都进一步下降,但差异无统计学意义(p＞0.05). 结论 α-硫辛酸在阻塞性黄疸早、中期有保护线粒体能量代谢作用,减轻了阻塞性黄疸时肝的损伤.     

直肠类癌的诊断与治疗

Objective To investigate the diagnosis and treatment of rectal carcinoid. Methods Clinical data of 16 patients of rectal carcinoids in our hospital from January 2000 to December 2009 were analyzed retrospectively. Related literatures were reviewed. Results Among the patients included, 11 cases(68.8%)suffered from hypogastralgia, 3 cases(18.8%)bloody stool, 3 cases(18.8%)defecation number increase. All the patients underwent enteroscopy. The average size in diameter of all the tumors was 8.8 mm. 81.3% of the tumors ≤10 mm in diameter. The average distance from tumor to anus was 6.8 cm and 87.5% of the tumors ≤8 cm in distance, Only 25% of all the cases were diagnosed preoperatively, most cases were diagnosed as other diseases and definitely diagnosed by postoperative pathology. 14 cases underwent operation as radical resection of rectal carcinoma, and 2 cases endoscopic removal. There was no operative death and postoperative five-year survival rate is 69.2%. Conclusions Preoperative diagnosis rectal carcinoid is difficult.Misdiagnosis rate is high. The key point of improving diagnosis of this disease is annal digital examination. Enteroscopy and pathology, operation is the first choice to treat rectal carcinoid.     

心肾同治法对糖尿病大鼠视网膜神经营养因子的作用

目的探讨心肾同治法指导下所创密蒙花复方对糖尿病大鼠视网膜病变神经功能损伤的保护机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、密蒙花复方组。通过链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型。连续灌胃给药90 d,分别于第30、60、90天检测各组大鼠视网膜电生理指标,第90天时HE染色观察视网膜形态改变、TUNEL法检测视网膜神经节细胞凋亡及PCR、Western blot检测脑源性神经营养因子(BDNF)、视网膜睫状神经营养因子(CNTF)mRNA和蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠视网膜电图振荡电位(OPs)波幅及b波波幅降低,视神经功能下降,差异具有统计学意义(P0.01)。模型组视网膜神经节细胞肿胀,排列紊乱,数目减少,BDNF和CNTF mRNA及蛋白表达下降。密蒙花复方组与模型组比较,OPs、b波波幅升高(P0.01),视网膜神经节细胞凋亡数目减少,视网膜BDNF和CNTF mRNA及蛋白表达升高。结论密蒙花复方可通过调节视网膜神经营养因子BDNF和CNTF表达水平对糖尿病大鼠视网膜病变神经功能损伤起到保护作用。